本文關(guān)鍵詞：鋅指蛋白ZBTB45基因敲除小鼠模型的建立及其表型分析

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【摘要】：研究背景 含有鋅指結(jié)構(gòu)域（zinc finger domain）的一類蛋白，被稱之為鋅指蛋白（zinc fingerprotein），作為轉(zhuǎn)錄因子，廣泛存在于自然界，是真核生物最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一。作為最豐富的的蛋白質(zhì)模體，普遍發(fā)現(xiàn)于哺乳動(dòng)物的細(xì)胞內(nèi)。在人類基因組中，約有將近2%的序列，多達(dá)上百個(gè)基因可編碼鋅指蛋白，在生命體的活動(dòng)中起著至關(guān)重要的作用�，F(xiàn)今對(duì)鋅指蛋白的研究主要集中在對(duì)其靶分子的篩選及作用調(diào)控機(jī)制的研究。 目前，研究發(fā)現(xiàn)的新型轉(zhuǎn)錄因子ZBTB20廣泛表達(dá)于體內(nèi)各個(gè)組織器官，尤其是大腦、肝臟、胰腺、肌肉等組織，參與了體內(nèi)多種基因及蛋白的轉(zhuǎn)錄、翻譯，調(diào)控著機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育和能量代謝等生命過程，發(fā)揮了相當(dāng)重要的作用。新型轉(zhuǎn)錄因子ZBTB20基因全身敲除模型小鼠存在著極其嚴(yán)重的生理缺陷：生長(zhǎng)發(fā)育明顯障礙，不能存活到成年，具有較高的死亡率，異常嚴(yán)重的糖脂代謝紊亂。同源比較數(shù)據(jù)顯示，ZBTB45是與ZBTB20同源性最高的家族成員，兩者在蛋白水平的一致性高達(dá)43.5%，BTB結(jié)構(gòu)域和C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域的一致性甚至高達(dá)68%，提示ZBTB45可能也與ZBTB20一樣，在機(jī)體內(nèi)參與了諸多重要的生理學(xué)作用。 基因剔除技術(shù)的發(fā)展，使得基因剔除小鼠模型的建立成為可能，并且日漸成為研究基因功能不可或缺的工具。因此，我們可以利用同源重組技術(shù)及Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)構(gòu)建鋅指蛋白ZBTB45基因全身敲除的小鼠，這就為鋅指蛋白ZBTB45基因的功能研究提供了一個(gè)很好模型。 研究目的 利用基因剔除技術(shù)建立新型鋅指蛋白ZBTB45基因條件敲除和全身敲除的小鼠模型，為探討ZBTB45在體內(nèi)的生理學(xué)功能及其作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)手段。 研究方法 利用同源重組和ES細(xì)胞技術(shù)，首先建立ZBTB45基因的Flox小鼠；然后利用Cre/LoxP重組酶系統(tǒng)，建立ZBTB45基因全身敲除小鼠模型，并從基因組和mRNA等水平驗(yàn)證小鼠模型的建立成功；最后，對(duì)ZBTB45基因全身敲除小鼠模型進(jìn)行了發(fā)育、生殖和代謝等方面的初步表型分析。用同窩、同性別的野生型小鼠與KO小鼠作為對(duì)照。選取成年雄性小鼠作為研究對(duì)象，監(jiān)測(cè)體重、進(jìn)食量、隨機(jī)血糖、空腹血糖、口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）、血脂等表型，分析鋅指蛋白ZBTB45在個(gè)體發(fā)育及糖脂代謝中的可能生理學(xué)功能。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 成功建立了新型鋅指蛋白ZBTB45基因全身敲除小鼠模型，，并在基因組、mRNA等水平證明了小鼠模型的成功建立。對(duì)其表型的初步分析顯示：鋅指蛋白ZBTB45基因全身敲除小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育與野生型小鼠相比，沒有肉眼可見的差異，且生育能力不受影響。進(jìn)食量、體重、體重標(biāo)化后的進(jìn)食量均無顯著性差異。糖代謝指標(biāo)包括：空腹血糖、口服糖耐量實(shí)驗(yàn)等，兩種基因型小鼠也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。脂代謝指標(biāo)包括：甘油三酯、膽固醇等，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，也無明顯改變。 結(jié)論 通過對(duì)鋅指蛋白ZBTB45基因全身敲除小鼠模型的初步表型分析，我們發(fā)現(xiàn)KO小鼠的一般發(fā)育正常，在常規(guī)飲食條件下，能量和糖脂代謝等方面與野生型小鼠相比沒有顯著性差異，結(jié)果提示新型鋅指蛋白ZBTB45基因很有可能不參與對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和糖脂代謝的調(diào)控，或者由該基因缺失所引起的生長(zhǎng)發(fā)育障礙和糖脂代謝紊亂并不足以引起相應(yīng)的表型變化。但目前證據(jù)不足，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R363;R-332

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1169016