本文關鍵詞：LIF基因慢病毒載體構建及其在人脂肪間充質干細胞的表達

  更多相關文章： LIF 人脂肪間充質干細胞 質粒重組 慢病毒轉染

【摘要】：目的構建LIF慢病毒載體,轉染人脂肪間充質干細胞,以此獲得高表達LIF的人脂肪間充質干細胞,為LIF在人脂肪間充質干細胞介導的免疫調節(jié)效應機制研究中奠定基礎。方法以PCR擴增得到LIF基因序列,采用質粒重組技術獲得載有LIF基因的重組質粒,然后用重組質粒包裝慢病毒。用膠原酶消化法分離培養(yǎng)人脂肪間充質干細胞,然后將慢病毒轉染人脂肪間充質干細胞,通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達,采用流式細胞技術檢測慢病毒轉染率,RT-PCR及Western blot技術檢測LIF的表達水平,最后經(jīng)SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,計量資料均以(x±s)表示,組間均數(shù)比較采用成對樣本t檢驗,以P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果通過PCR技術擴增得到LIF基因序列,并且成功構建帶有LIF基因的重組質粒,重組質粒經(jīng)限制性內切酶雙酶切鑒定,得到大小為608 bp左右的條帶,大小與LIF基因序列匹配,通過重組質粒轉染293T細胞后獲得慢病毒顆粒,滴度檢測達1×108TU/ml。成功分離得到純度高的h ASCs,慢病毒轉染h ASCs后,流式細胞儀檢測慢病毒轉染率可達90%。RT-PCR及Western blot結果經(jīng)統(tǒng)計學分析提示,轉染后LIF的表達水平明顯升高。結論攜帶人LIF基因的慢病毒載體可以有效轉染h ASCs,并且表達LIF。
【作者單位】： 浙江省溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內二科;
【基金】：浙江省自然科學基金(Y2101091,LY13H090010,LY14H130002) 浙江省高校“十二五”神經(jīng)生物學重點學科(204-071006)
【分類號】：R329.2;Q78
【正文快照】： 近年來,間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植為神經(jīng)系統(tǒng)疾病如多發(fā)性硬化(Multiplesclerosis,MS)、腦卒中等的治療帶來了新希望[1]。MSCs是中胚層來源的具有自我更新和多向分化潛能的多能干細胞[2]。此外,MSCs還具有低免疫原性和免疫調節(jié)等特性,MSCs具備的上述特性

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 趙閆麗;黃琦;;橋本甲狀腺炎Th1/Th2偏移的研究及治療進展[J];浙江中醫(yī)藥大學學報;2014年01期

2 張微;曹娜;裴路;;脂肪干細胞的生物學特性及其在骨組織工程中的研究進展[J];北京生物醫(yī)學工程;2014年03期

3 李榮良;韓扣蘭;戴小麗;李衛(wèi)勇;黃誠;;人臍帶間充質干細胞移植治療Graves病小鼠的療效[J];山東醫(yī)藥;2013年36期

4 Yufang Yan;Tuo Ma;Kai Gong;Qiang Ao;Xiufang Zhang;Yao Gong;;Adipose-derived mesenchymal stem cell transplantation promotes adult neurogenesis in the brains of Alzheimer's disease mice[J];Neural Regeneration Research;2014年08期

5 高俊瑋;馬浚寧;候博儒;任海軍;;炎性細胞因子對神經(jīng)干細胞增殖與分化的調節(jié)[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2015年02期

6 畢涌;洪娟;李力群;李曉莉;魏鵬;施鎮(zhèn)江;王廷華;張旭;;重組質粒pcDNA3-β-NGF的構建及其轉染小鼠骨髓間充質干細胞生物學活性的研究[J];中國病理生理雜志;2013年11期

7 畢涌;洪娟;林曉濱;李曉莉;魏鵬;施鎮(zhèn)江;黃桂琴;王廷華;張旭;;人β-NGF基因修飾的骨髓間充質干細胞對帕金森病大鼠行為學的影響[J];中國病理生理雜志;2014年03期

8 畢涌;林曉濱;李曉莉;魏鵬;王廷華;張旭;洪娟;;綠色熒光蛋白轉基因小鼠骨髓間充質干細胞腦內移植后的成活及遷移[J];中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志;2014年04期

9 姚夢枝;肖志杰;許念桂;文鐵;;脂肪間充質干細胞治療神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的研究進展[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;2014年09期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 徐巍;骨髓間充質干細胞對光損傷視網(wǎng)膜的保護作用與機制[D];福建醫(yī)科大學;2013年

2 武艷;基于骨髓間充質干細胞對微環(huán)境的調控作用影響皮膚瘢痕形成的實驗研究[D];南開大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 毛雨紅;CXCR4/CXCR7在SDF-1誘導間充質干細胞增殖、遷移中的作用及信號轉導機制研究[D];桂林醫(yī)學院;2013年

2 武海軍;非接觸共培養(yǎng)條件下兔骨髓間充質干細胞向類髓核細胞誘導分化的實驗研究[D];內蒙古醫(yī)科大學;2013年

3 張瑩瑩;骨髓間充質干細胞移植在小鼠卵巢功能重建中的應用[D];安徽醫(yī)科大學;2014年

4 高冬蘊;間充質干細胞調控糖尿病難愈性創(chuàng)面代謝并促愈合的機制[D];南方醫(yī)科大學;2014年

5 姚夢枝;慢病毒介導p16ink4a基因沉默對老齡脂肪間充質干細胞增殖分化能力的影響[D];中南大學;2014年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳莉娜;王穎;張艷艷;關偉軍;;間充質干細胞的免疫調節(jié)作用[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年28期

2 饒圣宏;;間充質干細胞的研究進展[J];赤峰學院學報(自然科學版);2012年09期

3 王佃亮;張艷梅;杜娟;;間充質干細胞過濾分離器制備人羊膜間充質干細胞的研究[J];中國生物工程雜志;2012年10期

4 李陳;肖玉周;;不同來源的間充質干細胞生物學特性差異研究進展[J];創(chuàng)傷外科雜志;2014年01期

5 李麗春;李劍平;;基因轉染間充質干細胞的臨床治療:特點與問題[J];中國組織工程研究;2014年14期

6 殷海斌;田新;楊春會;高曉慧;;間充質干細胞的生物學特性及臨床應用(英文)[J];中國組織工程研究;2014年14期

7 許琴,朱依純,肖雁冰,田虹;小鼠骨髓間充質干細胞的分離及培養(yǎng)[J];遵義醫(yī)學院學報;2002年02期

8 張明偉,郭子寬,劉曉丹,吳英,侯春梅,毛寧;小鼠骨骼肌源間充質干細胞的分離與培養(yǎng)[J];中國實驗血液學雜志;2003年05期

9 李府;間充質干細胞的來源、特性及臨床應用前景[J];國外醫(yī)學(兒科學分冊);2004年02期

10 陳光輝 ,王燕,李天德,邵建華;自成人脂肪組織分離與培養(yǎng)間充質干細胞的實驗研究[J];解放軍醫(yī)學雜志;2004年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李艷菊;胡亮杉;郭坤元;;間充質干細胞對衰老大鼠睪丸的影響[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

2 郭勇;張西正;李瑞欣;張春秋;郭春;張彥軍;閆玉仙;;力學拉伸對經(jīng)5-氮胞苷誘導的間充質干細胞向心肌細胞分化的影響[A];第九屆全國生物力學學術會議論文匯編[C];2009年

3 李力;王海燕;杜娟;賴潔娟;劉慶;黃蘇娜;蔣建新;;直流電刺激對人臍帶間充質干細胞物理特性的影響實驗研究[A];第七屆全國創(chuàng)傷學術會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學論壇論文匯編[C];2009年

4 馬麗;呼瑩;馬冠杰;姜學英;趙春華;;小鼠真皮間充質干細胞的生物學特性及對造血恢復的影響[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

5 韓欽;劉艷寧;何東南;閆曦;曹瑩;趙春華;;分離和鑒定小腸上皮干細胞及其可塑性與間充質干細胞的比較[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

6 劉曉丹;劉兵;李秀森;毛寧;;人臍帶間充質干細胞的分離與培養(yǎng)[A];第11次中國實驗血液學會議論文匯編[C];2007年

7 姜玉玲;喬虹;劉夢雪;李強;孫玉倩;張巾超;;瘦素誘導體外培養(yǎng)大鼠脂肪間充質干細胞凋亡[A];2008內分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

8 肖娜;郭錦鵬;趙秀華;金文靜;盧光t;程臘梅;;不同來源間充質干細胞的生物學特性比較[A];湖南省生理科學會2008年度學術年會論文摘要匯編[C];2008年

9 陳廣華;楊婷;付t$t$;苗瞄;金正明;唐曉文;韓悅;何廣勝;仇慧英;馬驍;陳峰;薛勝利;王熒;孫愛寧;吳德沛;;臍帶間充質干細胞治療糖皮質激素耐藥的難治性急性移植物抗宿主病19例分析[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

10 洪珞珈;趙明明;張宇晶;;間充質干細胞與系統(tǒng)性紅斑狼瘡[A];2012年全國微循環(huán)與血液流變學基礎研究及臨床應用學術研討會專題報告及論文集[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 滿學杰;天津濱海新區(qū)建最大間充質干細胞生產(chǎn)基地[N];新華每日電訊;2008年

2 滿學杰;津昂賽打造間充質干細胞生產(chǎn)基地[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2008年

3 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;間充質干細胞研究又見新方法[N];健康報;2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學院健康科學研究所 曹楷;間充質干細胞：干細胞中的孫悟空[N];上�？萍紙�;2014年

5 記者　陳建強;首家間充質干細胞庫在津建成[N];光明日報;2006年

6 記者　馮國梧;細胞產(chǎn)品國家工程中心建設方案獲準[N];科技日報;2007年

7 實習生 劉霞;間充質干細胞有望用于面部整形[N];科技日報;2007年

8 本報記者 王新佳;我國“原始間充質干細胞”注射液進入臨床研究[N];中國高新技術產(chǎn)業(yè)導報;2005年

9 馮國梧;全球首個臍帶間充質干細胞庫規(guī)模化運營[N];科技日報;2008年

10 劉瑩清;全球首個臍帶間充質干細胞庫泰達規(guī)模運營[N];北方經(jīng)濟時報;2008年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳亮;胰島素樣生長因子1增強骨形態(tài)形成蛋白9介導的間充質干細胞成骨分化及成骨作用的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

2 鄭宗梅;脂肪間充質干細胞作為骨組織工程種子細胞的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2006年

3 王憲英;腦組織微環(huán)境及神經(jīng)甾體對臍帶間充質干細胞分化的影響[D];河北醫(yī)科大學;2012年

4 李曉東;牙胚間充質干細胞在不同條件下牙向分化的實驗研究[D];四川大學;2004年

5 郭虹;胎兒多種組織間充質干細胞生物學特征及胎兒骨髓血液血管干細胞特性的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2003年

6 侯靜;間充質干細胞在輻射損傷后干性維持的機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

7 袁茵;人臍帶間充質干細胞對不同類型腫瘤細胞惡性表型的調控作用研究[D];南方醫(yī)科大學;2014年

8 來曉瑜;一個新的人間充質干細胞特異性表面抗原的鑒定和間充質干細胞亞群生物學特性的研究[D];浙江大學;2009年

9 韓春;牙根發(fā)育期相關間充質干細胞生物學特性的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2009年

10 孫念政;胎盤間充質干細胞誘導分化為胰島素分泌細胞及其對糖尿病鼠降糖作用的研究[D];山東大學;2009年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王敏;羊膜間充質干細胞克隆的分離和生物學特性的研究[D];華東理工大學;2010年

2 蘇曉華;牛胎肝間充質干細胞的分離培養(yǎng)及生物學特性研究[D];東北林業(yè)大學;2011年

3 鄧長卿;臍帶間充質干細胞生物學特性及功能研究[D];蘇州大學;2011年

4 楊晨;臍帶間充質干細胞的分離鑒定[D];吉林大學;2013年

5 馬云鵬;應用大塊平鋪法對人臍帶間充質干細胞分離、傳代、凍存及復蘇的研究[D];河北醫(yī)科大學;2013年

6 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人臍帶間充質干細胞凋亡及其分子機理[D];內蒙古大學;2013年

7 王黎明;臍帶間充質干細胞的分泌蛋白表達譜研究[D];安徽醫(yī)科大學;2014年

8 唐秋靈;人臍帶間充質干細胞向男性生殖細胞分化的研究[D];汕頭大學;2008年

9 徐小霞;人胎盤絨毛層間充質干細胞體外培養(yǎng)的優(yōu)化及生物學特性的初步分析[D];蘇州大學;2009年

10 王建軍;成人脂肪間充質干細胞體外長期培養(yǎng)及成骨潛能的實驗研究[D];蘭州大學;2009年

，

本文編號：1159273