本文關鍵詞：Runx2重組慢病毒感染骨髓間充質干細胞并促進其成骨分化的研究

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【摘要】：目的利用重組Runx2基因的慢病毒感染大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs),使其Runx2基因的表達水平提高,觀察BMSCs成骨相關基因的表達情況,研究Runx2基因促進BMSCs的成骨分化情況。方法 PCR擴增Runx2基因,并連接到慢病毒表達載體質粒Pez-lv201,與包裝質粒共轉染293T細胞進行包裝,測得慢病毒液滴度。取4周齡SD大鼠脛骨,分離、培養(yǎng)BMSCs,流式細胞儀鑒定。將Runx2重組慢病毒感染BMSCs。顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化;RT-PCR分析BMSCs成骨基因的表達情況。結果Runx2基因重組慢病毒表達載體質粒酶切和測序鑒定正確。測得慢病毒液滴度為1.6×109TU/ml。流式細胞儀檢測表面抗原CD90和CD105,表達率為99.8%、99.3%。重組慢病毒感染后實驗組細胞形態(tài)呈成骨樣細胞改變;對照組未見明顯變化。實驗組Runx2、OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因的表達水平隨時間推移而增高;對照組上述基因均無明顯表達。結論利用Runx2重組慢病毒感染BMSCs,使其高表達Runx2基因,可以使OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因表達增強,說明Runx2基因可以促進BMSCs向成骨方向分化。
【作者單位】： 浙江醫(yī)院骨一科;深圳市第二人民醫(yī)院骨科;
【基金】：廣東省自然科學基金(s2012010008129) 深圳市戰(zhàn)略新興產業(yè)發(fā)展專項資金項目(ZDSY20120614154551201) 深圳市科技研發(fā)資金項目(CXZZ20120614160234842);深圳市科技研發(fā)資金項目(JCYJ20130401113330839);深圳市科技研發(fā)資金項目(CXZZ20130321152713220) 深圳市重點實驗室提升項目(CXB201104220049A) 廣東省大學生創(chuàng)新訓練項目(1056013089)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 大面積骨缺損一直是創(chuàng)傷骨科的治療難題。自體骨、異體骨以及人工骨材料的填充都難以有效治療大面積的骨缺損。骨組織工程通過整合支架材料、種子細胞、活性因子等提高人工骨材料的成骨活性,對促進骨愈合有重要作用[1]。BMSCs作為種子細胞,在骨修復與重建中可分化為成骨細胞、

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本文編號：1150175