發(fā)布時(shí)間：2017-11-07 01:09

  本文關(guān)鍵詞：Runx2重組慢病毒感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并促進(jìn)其成骨分化的研究

  更多相關(guān)文章： 組織工程 Runx 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 慢病毒載體

【摘要】：目的利用重組Runx2基因的慢病毒感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),使其Runx2基因的表達(dá)水平提高,觀察BMSCs成骨相關(guān)基因的表達(dá)情況,研究Runx2基因促進(jìn)BMSCs的成骨分化情況。方法 PCR擴(kuò)增Runx2基因,并連接到慢病毒表達(dá)載體質(zhì)粒Pez-lv201,與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行包裝,測(cè)得慢病毒液滴度。取4周齡SD大鼠脛骨,分離、培養(yǎng)BMSCs,流式細(xì)胞儀鑒定。將Runx2重組慢病毒感染BMSCs。顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化;RT-PCR分析BMSCs成骨基因的表達(dá)情況。結(jié)果Runx2基因重組慢病毒表達(dá)載體質(zhì)粒酶切和測(cè)序鑒定正確。測(cè)得慢病毒液滴度為1.6×109TU/ml。流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面抗原CD90和CD105,表達(dá)率為99.8%、99.3%。重組慢病毒感染后實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)呈成骨樣細(xì)胞改變;對(duì)照組未見(jiàn)明顯變化。實(shí)驗(yàn)組Runx2、OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因的表達(dá)水平隨時(shí)間推移而增高;對(duì)照組上述基因均無(wú)明顯表達(dá)。結(jié)論利用Runx2重組慢病毒感染BMSCs,使其高表達(dá)Runx2基因,可以使OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因表達(dá)增強(qiáng),說(shuō)明Runx2基因可以促進(jìn)BMSCs向成骨方向分化。
【作者單位】： 浙江醫(yī)院骨一科;深圳市第二人民醫(yī)院骨科;
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金(s2012010008129) 深圳市戰(zhàn)略新興產(chǎn)業(yè)發(fā)展專(zhuān)項(xiàng)資金項(xiàng)目(ZDSY20120614154551201) 深圳市科技研發(fā)資金項(xiàng)目(CXZZ20120614160234842);深圳市科技研發(fā)資金項(xiàng)目(JCYJ20130401113330839);深圳市科技研發(fā)資金項(xiàng)目(CXZZ20130321152713220) 深圳市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提升項(xiàng)目(CXB201104220049A) 廣東省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目(1056013089)
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 大面積骨缺損一直是創(chuàng)傷骨科的治療難題。自體骨、異體骨以及人工骨材料的填充都難以有效治療大面積的骨缺損。骨組織工程通過(guò)整合支架材料、種子細(xì)胞、活性因子等提高人工骨材料的成骨活性,對(duì)促進(jìn)骨愈合有重要作用[1]。BMSCs作為種子細(xì)胞,在骨修復(fù)與重建中可分化為成骨細(xì)胞、

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王呈;曾炳芳;;骨移植替代材料在創(chuàng)傷骨科的應(yīng)用[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2012年01期

2 廖慶輝;黃震;蔡德鴻;;抗壞血酸、β-甘油磷酸鈉和地塞米松聯(lián)合誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞的分化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉忠;李素萍;楊宏友;王震;呂蓉;吳炳;方勤;李敏;吳學(xué)忠;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化成骨細(xì)胞的研究[J];中國(guó)輸血雜志;2011年05期

2 李慶慶;黃江鴻;何美健;趙忠瑋;王大平;;Runx2及其在骨組織工程中的應(yīng)用[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2014年01期

3 何美健;黃江鴻;段莉;李慶慶;王大平;;低溫快速成型技術(shù)與骨組織工程支架制備[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2014年01期

4 陳聰聰;程迅生;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞基因治療骨缺損的研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)學(xué);2014年04期

5 王嘯;劉祿林;陳斌;費(fèi)蓓蓓;柏林;徐又佳;;雌二醇下調(diào)鐵對(duì)成骨細(xì)胞活性的抑制作用[J];中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志;2014年02期

6 謝靜;婁向新;王先流;楊亮亮;張彥中;;Electrospun Nanofibers of Hydroxyapatite / Collagen / Chitosan Promote Osteogenic Differentiation of BMSCs[J];Journal of Donghua University(English Edition);2014年05期

7 王強(qiáng);鞏鵬;金實(shí);譚廣;王洪江;郭慧淑;董擂;李克軍;程雷;;磁標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞作用的研究[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年01期

8 賀維;陳永吉;解龍川;胡媛媛;冷衛(wèi)東;;SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)鑒定及骨向誘導(dǎo)分化研究[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2010年06期

9 王彥梅;鄒多宏;何家才;;HIF-1在骨缺損修復(fù)中的作用[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2014年02期

10 張志強(qiáng);王玉杰;李佳;木拉提·熱夏提;;大鼠毛囊干細(xì)胞的成骨及成脂誘導(dǎo)[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2014年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 聶磊;高活性多孔磷鈣基載藥復(fù)合骨支架的制備及性能研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 蔣濤;大鼠脫細(xì)胞脊髓支架的優(yōu)化改性及相關(guān)特性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 黃香蘭;腫瘤性骨軟化癥的臨床和組織病理學(xué)特征[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 熊昆;納米硅酸鋅的微波水熱合成及用于改善可降解無(wú)機(jī)生物材料的性能[D];華南理工大學(xué);2013年

5 李明芬;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能及其機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

6 常正奇;富含功能蛋白的凍干組織工程骨的構(gòu)建及成骨效果與成骨機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

7 唐仲文;骨不連細(xì)胞體外培養(yǎng)及壓應(yīng)力刺激對(duì)其成軟骨分化影響的研究[D];中南大學(xué);2014年

8 郭云山;Orai1調(diào)控成骨細(xì)胞分化與凋亡參與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

9 杜曉巖;特定序列寡核苷酸對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響[D];吉林大學(xué);2014年

10 木拉提·熱夏提;毛囊干細(xì)胞和異種脫細(xì)胞支架復(fù)合培養(yǎng)方法及組織相容性研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張揚(yáng);純鈦表面不同處理對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞礦化的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

2 張克劍;pEGFP/Ang-1轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs視網(wǎng)膜下移植對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管滲漏的影響[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

3 王新;BMP-2/氰基丙烯酸復(fù)合生物膠修復(fù)大鼠下頜骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2013年

4 粟欽;DMOG對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖與成骨分化影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

5 王彥梅;海藻酸鈣—納米羥基磷灰石骨修復(fù)材料的制備及生物相容性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

6 陳小丹;不同濃度的胎牛血清對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞純度及周期的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

7 陳聰聰;異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合高壓氧修復(fù)海水浸泡兔橈骨開(kāi)放性骨缺損的相關(guān)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

8 徐志明;補(bǔ)腎活血法對(duì)骨折愈合影響的臨床及實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

9 張志強(qiáng);大鼠毛囊干細(xì)胞的鑒定及選擇其最適培養(yǎng)液的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2014年

10 湯光輝;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制水通道蛋白4的上調(diào)減輕腦缺血誘發(fā)的腦水腫的分子機(jī)理研究[D];上海交通大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 余勤;連俊蘭;王艷;郭瑩;萬(wàn)海同;;大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)擴(kuò)增及生物學(xué)特性研究[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2006年02期

2 武和明,邢樹(shù)忠,張曉e，

本文編號(hào)：1150175