本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的下丘腦中過表達(dá)miR-505小鼠模型的構(gòu)建

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【摘要】：目的:本文用慢病毒定點(diǎn)注射的方法構(gòu)建了在下丘腦中過表達(dá)mi R-505的小鼠模型,并利用熒光原位雜交方法在冰凍切片組織上快速檢測mi RNAs,以確認(rèn)慢病毒載體介導(dǎo)的mi R-505在丘腦中的表達(dá)能力。方法:實(shí)驗(yàn)小鼠在腦立體定位儀下定位到下丘腦位置,采用原位注射的方式進(jìn)行慢病毒注射,注射后采用實(shí)時熒光定量RCR和應(yīng)用了LNA探針和TSA系統(tǒng)的FISH(fluorescence in situ hybridization)技術(shù),完成在慢病毒介導(dǎo)的mi R-505過表達(dá)老鼠下丘腦區(qū)域細(xì)胞中的mi R-505檢測和示蹤。結(jié)果:mi R-505慢病毒注射未成年小鼠下丘腦區(qū)5、10、20和40天后,均可檢測到mi R-505在下丘腦區(qū)域的表達(dá),且實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在慢病毒介導(dǎo)的過表達(dá)小鼠下丘腦注射部位,mi R-505表達(dá)量有明顯的提高。結(jié)論:利用慢病毒注射未成年小鼠下丘腦腦區(qū)的方法,成功的建立了下丘腦中過表達(dá)mi R-505的小鼠模型,使用LNA標(biāo)記探針的FISH方法探索mi RNA表達(dá)規(guī)律較穩(wěn)定,且重復(fù)率高。
【作者單位】： 東華大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)研究所;
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)專項(xiàng)資金(13D110521)
【分類號】：R-332;R338
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):Q95-3;Q75;Q78 Document code:AArticle ID:1673-6273(2015)31-6005-04前言mi RNAs(Micro RNAs)是真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的天然非編碼小RNA,其大小長約20~25個核苷酸[1]。越來越多的證據(jù)顯示:mi RNAs可以調(diào)控大量的蛋

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