本文關(guān)鍵詞：外周血早晚期內(nèi)皮祖細胞的生物學特性及鑒定的初步研究

  更多相關(guān)文章： 內(nèi)皮祖細胞 內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 一氧化氮 細胞鑒定

【摘要】：目的通過人外周血分離培養(yǎng)早晚期內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs),比較兩類EPCs的特性,以期找到可靠的穩(wěn)定生物學表征及鑒定方法鑒定EPCs。方法通過密度梯度離心法分離人外周血單核細胞,體外種植于內(nèi)皮細胞全培養(yǎng)基誘導培養(yǎng),分別于培養(yǎng)4~7 d及2~3周獲得早、晚期EPCs。對兩類EPCs的細胞形態(tài)、增殖能力、細胞表型、細胞因子表達情況、體外成血管能力及一氧化氮(nitric oxide,NO)釋放能力進行檢測比較,并以成熟人主動脈內(nèi)皮細胞(human aortic endothelial cells,HAECs)作為陽性對照。結(jié)果兩類EPCs形態(tài)不同,早期EPCs形成紡錘樣細胞簇,而晚期EPCs呈鵝卵石樣外觀;晚期EPCs具有高增殖潛能,可在基質(zhì)膠上形成毛細管狀結(jié)構(gòu),而早期EPCs則不具備該特性;兩類EPCs均可攝取乙酰化低密度脂蛋白,并能與荊豆凝集素Ⅰ結(jié)合;流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)早期EPCs不表達CD34和CD133,但造血干細胞標記CD14和CD45表達卻呈陽性,而晚期EPCs對于內(nèi)皮型表面標記CD31和CD34表現(xiàn)為強陽性,但CD14、CD45、CD133表達則呈陰性。RTPCR分析發(fā)現(xiàn)早期EPCs的血管內(nèi)皮生長因子受體2及血管內(nèi)皮鈣黏蛋白基因的相對表達量顯著低于晚期EPCs及HAECs(P0.05),而血管性血友病因子及內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因的相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。細胞因子分泌方面,早期EPCs培養(yǎng)上清液中的VEGF、粒細胞集落刺激因子及IL-8濃度明顯高于晚期EPCs(P0.05)。Western blot檢測示,兩類EPCs均表達eNOS,但培養(yǎng)5周的晚期EPCs的eNOS表達水平高于早期EPCs(P0.05);兩種EPCs均可釋放NO,但NO產(chǎn)量差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論 eNOS的表達及NO釋放能力作為內(nèi)皮細胞的可靠生物學特征可用于EPCs鑒別,多方法聯(lián)合方式用于鑒定EPCs更為可行。
【作者單位】： 江蘇省中醫(yī)院血管外科;南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院血管外科;
【基金】：江蘇省干部保健科研項目(BJ14013)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)參與出生后血管發(fā)生是血管生物學領(lǐng)域的重大研究發(fā)現(xiàn)。EPCs可歸巢至血管新生處參與新生內(nèi)皮化并分化為內(nèi)皮細胞,其在血管新生、血管修復、腫瘤病理及組織工程等方面有很大應用前景[1-4]。Asahara等[5]于1997年首先在人外周血中

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Philip V.Peplow;;Growth factor- and cytokine-stimulated endothelial progenitor cells in post-ischemic cerebral neovascularization[J];Neural Regeneration Research;2014年15期

2 佟鑄;谷涌泉;張建;李建新;張淑文;汪忠鎬;;骨髓刺激對大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細胞的影響[J];中國修復重建外科雜志;2008年10期

3 盧輝俊;馮章啟;喬彤;劉晨;顧忠澤;劉長建;;納米多孔PLLA膜對晚期內(nèi)皮祖細胞行為的影響[J];中國修復重建外科雜志;2009年02期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 尹青令;侯寧寧;崔曉棟;張愛華;孫金隆;靖旭;吳海燕;王濟濰;成敏;;聚乳酸防粘連膜對晚期內(nèi)皮祖細胞功能的影響[J];功能材料;2014年03期

2 龔曉明;鄭瀾;瞿樹林;;有氧運動對內(nèi)皮祖細胞誘導大鼠心肌微血管新生能力的影響[J];北京體育大學學報;2014年06期

3 劉偉;凌均h，

本文編號：1145966