本文關鍵詞：牙齦卟啉單胞菌RgpA、Kgp基因疫苗與IL-4聯(lián)合免疫效應研究

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【摘要】：背景： 種植體周圍炎是種植體植入后的常見并發(fā)癥之一,也是種植修復失敗的主要原因,目前微生態(tài)學的觀點認為,種植體周圍炎是齦下優(yōu)勢菌群易主的結果。牙齦卟啉單胞菌被認為是牙周炎及種植體周圍炎的主要可疑致病菌,國內外學者已針對牙齦卟啉單胞菌的牙周炎防治進行了大量研究,并深入到分子水平,取得了一定進展。 牙齦蛋白酶是牙齦卟啉單胞菌的主要致病因子,在前期實驗中,我們已證實,應用牙齦卟啉單胞菌rgpA、kgp基因構建的RgpA、KgpA基因疫苗均能夠誘導實驗性種植體周圍炎有效的免疫反應,然而,我們也觀察到,在實驗過程中動物機體產(chǎn)生的特異性抗體功能性水平較低,維持免疫實效期較短,如何提高基因疫苗的靶向性和高效性是我們面臨的主要問題。 基因疫苗的免疫效果受動物個體差異的影響較大,如何提高和改善DNA疫苗的免疫效果是當今DNA免疫研究的熱點,有效方法之一是加入免疫佐劑,如鋁鹽膠體、細胞因子、脂質體、協(xié)同信號因子、寡核昔酸短序列等。其中細胞因子具有明顯的免疫佐劑效應,它們在體內緩慢而持久地釋放,可增強病毒、細菌、寄生蟲疫苗的保護效果,IL-4是目前明確的具有免疫佐劑的細胞因子之一。IL-4是具有抗炎作用的細胞因子,促進以Th2細胞為特征的免疫應答,它可以特異性作用于為致病抗原致敏的B淋巴細胞,調節(jié)調節(jié)T,B淋巴細胞的分化、活化,增強抗原遞呈細胞功能,協(xié)助基因疫苗持續(xù)表達高水平特異性抗體。在本項目的前期實驗中,將RgpA、Kgp基因疫苗與人IL-4重組質粒聯(lián)合應用于大鼠體內,證實可有效增強疫苗對實驗性牙周炎的免疫效果。本研究是將PVAX1-rgpA. PVAX1-kgp和PVAX1-IL-4真核質粒對犬種植體周圍炎模型進行基因聯(lián)合免疫,以期誘導機體產(chǎn)生較強的自身免疫反應,觀察檢驗其在防治該類動物口腔內種植體周圍炎發(fā)生發(fā)展中的作用,同時對比RgpA、Kgp基因疫苗免疫原性,探索具有高效性和強靶向性的種植體周圍炎基因疫苗。 目的： 將PVAX1-rgpA. PVAX1-kgp和PVAX1-IL-4真核質粒,聯(lián)合免疫種植體周圍炎動物實驗模型,驗證人IL-4對RgpA、Kgp基因疫苗的免疫增強作用,為臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法： 1、真核表達質粒PVAX1-RgpA、PVAX1-Kgp、PVAX1-IL-4細菌復蘇及質粒大量提取。 2、10只實驗犬被隨機分成A、B、C、D、E五組,拔除下頜雙側第二、三前磨牙后隨機植入螺紋圓柱型種植體,每只動物植入4枚。3個月后,骨結合良好,分別以PVAX1質粒、PVAX1-kgp、PVAX1-rgpA、PVAX1-kgp+PVAX1-IL-4PVAX1-rgpA+PVAX1-IL-4分組免疫,每兩周重復免疫一次,共計3次。 3、綁線結扎法構建種植體周圍炎模型,綁線后2、4、6周時進行種植體周探診深度(PPD)檢測,探診出血指數(shù)(BOP)檢測,拍攝X線片觀察骨結合情況。 4、每次免疫接種前收集血液,檢測血清中IgG抗體水平。 5、動物過量麻藥處死,將種植體及其周圍軟硬組織制作硬組織切片,亞甲基蘭染色,鏡下觀察并測量垂直性和水平性骨喪失程度。 結果： 1、各組動物種植體周探診深度在綁線后2周開始出現(xiàn)開始差異,4周時差異有統(tǒng)計學意義,B、C、D、E組較A組PPD值小(P0.05)。探診出血指數(shù)(BOP)在各組間有所不同,但無統(tǒng)計學意義的差別(P0.05)。 2、動物免疫結束后結果顯示,各組動物免疫后較免疫前IgG抗體水平均有增加,但B、C、D、E組動物IgG抗體較未免疫前明顯增高(P0.05),且較A組顯示出更高的抗體水平(P0.05),A組免疫后較免疫前無統(tǒng)計學意義(P0.05)。D、E組較B、C組抗體反應更明顯(P0.05),且B組較C組、D組較E組各兩組間IgG抗體水平差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3、組織切片觀察在種植體周骨喪失區(qū)有炎性細胞浸潤,A組骨喪失較嚴重,B、C、D、E組綁線側種植體骨喪失較A組輕微,B、C骨喪失較D、E組明顯。 結論： Kgp、RgpA基因疫苗與IL-4聯(lián)合應用可增強犬機體的免疫應答,IL-4是有效的免疫佐劑。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R783.6;R392

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