本文關(guān)鍵詞：牙齦卟啉單胞菌RgpA、Kgp基因疫苗與IL-4聯(lián)合免疫效應(yīng)研究

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【摘要】：背景： 種植體周圍炎是種植體植入后的常見并發(fā)癥之一,也是種植修復(fù)失敗的主要原因,目前微生態(tài)學(xué)的觀點認(rèn)為,種植體周圍炎是齦下優(yōu)勢菌群易主的結(jié)果。牙齦卟啉單胞菌被認(rèn)為是牙周炎及種植體周圍炎的主要可疑致病菌,國內(nèi)外學(xué)者已針對牙齦卟啉單胞菌的牙周炎防治進(jìn)行了大量研究,并深入到分子水平,取得了一定進(jìn)展。 牙齦蛋白酶是牙齦卟啉單胞菌的主要致病因子,在前期實驗中,我們已證實,應(yīng)用牙齦卟啉單胞菌rgpA、kgp基因構(gòu)建的RgpA、KgpA基因疫苗均能夠誘導(dǎo)實驗性種植體周圍炎有效的免疫反應(yīng),然而,我們也觀察到,在實驗過程中動物機(jī)體產(chǎn)生的特異性抗體功能性水平較低,維持免疫實效期較短,如何提高基因疫苗的靶向性和高效性是我們面臨的主要問題。 基因疫苗的免疫效果受動物個體差異的影響較大,如何提高和改善DNA疫苗的免疫效果是當(dāng)今DNA免疫研究的熱點,有效方法之一是加入免疫佐劑,如鋁鹽膠體、細(xì)胞因子、脂質(zhì)體、協(xié)同信號因子、寡核昔酸短序列等。其中細(xì)胞因子具有明顯的免疫佐劑效應(yīng),它們在體內(nèi)緩慢而持久地釋放,可增強(qiáng)病毒、細(xì)菌、寄生蟲疫苗的保護(hù)效果,IL-4是目前明確的具有免疫佐劑的細(xì)胞因子之一。IL-4是具有抗炎作用的細(xì)胞因子,促進(jìn)以Th2細(xì)胞為特征的免疫應(yīng)答,它可以特異性作用于為致病抗原致敏的B淋巴細(xì)胞,調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)T,B淋巴細(xì)胞的分化、活化,增強(qiáng)抗原遞呈細(xì)胞功能,協(xié)助基因疫苗持續(xù)表達(dá)高水平特異性抗體。在本項目的前期實驗中,將RgpA、Kgp基因疫苗與人IL-4重組質(zhì)粒聯(lián)合應(yīng)用于大鼠體內(nèi),證實可有效增強(qiáng)疫苗對實驗性牙周炎的免疫效果。本研究是將PVAX1-rgpA. PVAX1-kgp和PVAX1-IL-4真核質(zhì)粒對犬種植體周圍炎模型進(jìn)行基因聯(lián)合免疫,以期誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的自身免疫反應(yīng),觀察檢驗其在防治該類動物口腔內(nèi)種植體周圍炎發(fā)生發(fā)展中的作用,同時對比RgpA、Kgp基因疫苗免疫原性,探索具有高效性和強(qiáng)靶向性的種植體周圍炎基因疫苗。 目的： 將PVAX1-rgpA. PVAX1-kgp和PVAX1-IL-4真核質(zhì)粒,聯(lián)合免疫種植體周圍炎動物實驗?zāi)Ｐ?驗證人IL-4對RgpA、Kgp基因疫苗的免疫增強(qiáng)作用,為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法： 1、真核表達(dá)質(zhì)粒PVAX1-RgpA、PVAX1-Kgp、PVAX1-IL-4細(xì)菌復(fù)蘇及質(zhì)粒大量提取。 2、10只實驗犬被隨機(jī)分成A、B、C、D、E五組,拔除下頜雙側(cè)第二、三前磨牙后隨機(jī)植入螺紋圓柱型種植體,每只動物植入4枚。3個月后,骨結(jié)合良好,分別以PVAX1質(zhì)粒、PVAX1-kgp、PVAX1-rgpA、PVAX1-kgp+PVAX1-IL-4PVAX1-rgpA+PVAX1-IL-4分組免疫,每兩周重復(fù)免疫一次,共計3次。 3、綁線結(jié)扎法構(gòu)建種植體周圍炎模型,綁線后2、4、6周時進(jìn)行種植體周探診深度(PPD)檢測,探診出血指數(shù)(BOP)檢測,拍攝X線片觀察骨結(jié)合情況。 4、每次免疫接種前收集血液,檢測血清中IgG抗體水平。 5、動物過量麻藥處死,將種植體及其周圍軟硬組織制作硬組織切片,亞甲基蘭染色,鏡下觀察并測量垂直性和水平性骨喪失程度。 結(jié)果： 1、各組動物種植體周探診深度在綁線后2周開始出現(xiàn)開始差異,4周時差異有統(tǒng)計學(xué)意義,B、C、D、E組較A組PPD值小(P0.05)。探診出血指數(shù)(BOP)在各組間有所不同,但無統(tǒng)計學(xué)意義的差別(P0.05)。 2、動物免疫結(jié)束后結(jié)果顯示,各組動物免疫后較免疫前IgG抗體水平均有增加,但B、C、D、E組動物IgG抗體較未免疫前明顯增高(P0.05),且較A組顯示出更高的抗體水平(P0.05),A組免疫后較免疫前無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。D、E組較B、C組抗體反應(yīng)更明顯(P0.05),且B組較C組、D組較E組各兩組間IgG抗體水平差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3、組織切片觀察在種植體周骨喪失區(qū)有炎性細(xì)胞浸潤,A組骨喪失較嚴(yán)重,B、C、D、E組綁線側(cè)種植體骨喪失較A組輕微,B、C骨喪失較D、E組明顯。 結(jié)論： Kgp、RgpA基因疫苗與IL-4聯(lián)合應(yīng)用可增強(qiáng)犬機(jī)體的免疫應(yīng)答,IL-4是有效的免疫佐劑。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R783.6;R392

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1 高玉杰;基因疫苗的應(yīng)用與研究進(jìn)展[J];沈陽大學(xué)學(xué)報;2003年02期

2 譚德明,劉雙虎,李聰智,劉國珍,燕美玉,孫科柱;乙型肝炎病毒全S基因疫苗誘導(dǎo)小鼠的特異性免疫應(yīng)答[J];中國病毒學(xué);2001年03期

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本文編號：1143559