發(fā)布時間：2017-11-02 19:00

  本文關(guān)鍵詞：貝伐單抗聯(lián)合5-FU瘤內(nèi)注射治療鼠結(jié)腸癌模型的觀察

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【摘要】：目的 1.觀察5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、貝伐單抗(bevacizumab,Bev)單用及兩者聯(lián)合瘤內(nèi)注射治療結(jié)腸癌的的抗腫瘤療效。 2.觀察5-氟尿嘧啶、貝伐單抗單用及兩者聯(lián)合局部給藥(瘤內(nèi)注射)對遠(yuǎn)處腫瘤的作用。 3.觀察5-氟尿嘧啶、貝伐單抗單用及兩者聯(lián)合的副作用。 方法 培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞,建立BALB/c裸鼠人結(jié)腸癌HT-29雙側(cè)脅腹部皮下移植瘤模型,一側(cè)為瘤內(nèi)注藥側(cè),另一側(cè)為非注藥側(cè),作為自身對照。根據(jù)起始給藥時瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤直徑的大小分為5mmm組及10mmm組,每組各16只裸鼠；5mm組、10mmm組又各分為4組：A組(對照組,瘤內(nèi)注射生理鹽水,50ul/次,每4天一次,共3次)、B組(5-氟尿嘧啶組,瘤內(nèi)注射5-FU,20mg/Kg,溶于0.9%生理鹽水,每4天一次,共3次)、C組(貝伐單抗組,瘤內(nèi)注射Bev,4mg/Kg,溶于0.9%生理鹽水,每4天一次,共3次)、D組(5-FU+Bev聯(lián)合組,瘤內(nèi)注射5-FU20mg/Kg (30ul)后15分鐘,瘤內(nèi)注射Bev4mg/Kg(20u1),每4天一次,共3次),每組各4只裸鼠,各組瘤內(nèi)注藥體積均為50ul。每2天觀察1次,以游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小,并記錄腫瘤體積(V=0.5×長×寬2)。觀察藥物對荷瘤鼠模型移植瘤生長的影響；比較給藥后第18天各組腫瘤生長抑制值(Tumor Grouth Inhibition,T/C值)；以瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤直徑達(dá)15mmm為觀察終點,比較腫瘤生長延緩值(Tumor Grouth Delay,T-C值)、腫瘤細(xì)胞對數(shù)殺滅值(Log cell kill,LCK);以及比較各組雙側(cè)移植瘤體積及濕重。同時觀察各組裸鼠肝臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移情況。評價藥物副作用：比較各組治療前一天、第三次給藥后第十天裸鼠白細(xì)胞計數(shù)變化；比較各組裸鼠皮膚破潰出血、體重增減情況。 結(jié)果 1.各組藥物對裸鼠荷瘤模型移植瘤生長的影響 繪制的荷瘤鼠移植瘤生長曲線圖表明,各實驗組瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤生長速度由快到慢依次為：對照組、Bev組、5-FU組、5-FU+Bev聯(lián)合組,且5mm組及10mm組中相應(yīng)各組瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤生長趨勢相同。各組非注藥側(cè)側(cè)移植瘤生長趨勢無明顯差異(數(shù)據(jù)未列出)。 2.各組藥物對腫瘤生長的抑制作用 計算給藥后第18天各組腫瘤生長抑制值(T/C值)。腫瘤生長抑制值(T/C值)=實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重×100%[39,40]。T/C值≤42%為藥物有抗腫瘤效應(yīng)的最低標(biāo)準(zhǔn)；T/C值10%為藥物有高度抗腫瘤活性的標(biāo)準(zhǔn)[39,401。5mm組中,各實驗組T/C值分別為：5-氟尿嘧啶組42%,貝伐單抗組85%,5-FU+Bev聯(lián)合組20%；10mm組中,各實驗組T/C值分別為：5-氟尿嘧啶組66%,貝伐單抗組98%,5-FU+Bev聯(lián)合組32%。 3.各組藥物延緩腫瘤生長的作用 以瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤直徑達(dá)15mm為標(biāo)準(zhǔn),T-C值為實驗組與對照組瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤直徑達(dá)15mm天數(shù)之差[39,401。5mm組中,5-氟尿嘧啶組、貝伐單抗組、5-FU+Bev聯(lián)合組T-C值分別為5.5,-2.5,14.5；10mm組中,5-氟尿嘧啶組、貝伐單抗組、5-FU+Bev聯(lián)合組T-C值分別為10.5,2,20.5。腫瘤體積倍增時間(Tumor-doubling Time,Td),為實驗組達(dá)標(biāo)天數(shù)與對照組達(dá)標(biāo)天數(shù)之比；LCK=T-C值/(Td×3.32)LCK1,表示藥物有抗腫瘤效果,LCK1,表示藥物無抗腫瘤效果,即腫瘤模型對藥物抵抗[39,40]。5mm組中,5-氟尿嘧啶組、貝伐單抗組、5-FU+Bev聯(lián)合組LCK值分別為1.24,-0.89,2.32；10mm組中,5-氟尿嘧啶組、貝伐單抗組、5-FU+Bev聯(lián)合組LCK值分別為1.09,0.44,1.31。 4.各組藥物使腫瘤體積縮小的作用 本實驗中觀察到5-FU+Bev聯(lián)合組瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤縮小,分別為：5mm組第6-14天,移植瘤體積由213.191mm3縮小至170.483mm3,腫瘤體積縮小20.03%；10mm組第4-6天,第12-14天兩度出現(xiàn)移植瘤體積縮小,分別由389.512mm3縮小至373.114mm3,腫瘤體積縮小4.21%,422.830mm3縮小至349.573mm3,腫瘤體積縮小17.33%。 5.各組藥物對遠(yuǎn)處腫瘤生長的影響 以單因素方差分析比較各組給藥后第18天雙側(cè)移植瘤體積,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,各實驗組瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤體積均顯著縮小(P0.05),而各組非注藥側(cè)移植瘤體積無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。以瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤直徑達(dá)15mmm為觀察終點,斷頸法處死裸鼠,剝離瘤體,測定濕重及瘤體積。各實驗組瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤直徑生長至15mm的天數(shù)分別為,5mm組：對照組24天,5-FU組32天,Bev組20天,5-FU+Bev聯(lián)合組40天；10mmm組：對照組18天,5-FU組24天,Bev組20天,5-FU+Bev聯(lián)合組36天。剝離的各組非注藥側(cè)移植瘤濕重(g)分別為：5mmm組：對照組0.85,5-FU組1.52,Bev組1.04,5-FU+Bev聯(lián)合組2.26；10mm組：劉照組0.84,5-FU組1.10,Bev組0.97,5-FU+Bev聯(lián)合組2.12；各組非注藥側(cè)瘤體積(mm3)分別為：5mm組：對照組880.52,5-FU組1525.88,Bev組1007.06,5-FU+Bev聯(lián)合組2283.10；l0mm組：對照組868.14,5-FU組1099.13,Bev組971.35,5-FU+Bev聯(lián)合組2105.39。以配對t檢驗比較各實驗組雙側(cè)移植瘤體積及濕重,除對照組外,5-氟尿嘧啶組、貝伐單抗組、5-FU+Bev聯(lián)合組瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤濕重較非注藥側(cè)明顯減輕(P0.05),瘤內(nèi)注藥側(cè)移植瘤體積較非注藥側(cè)明顯縮小(P0.05)。 6.各組藥物對裸鼠肝臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響 經(jīng)解剖檢查,各實驗組裸鼠肝臟、脾臟、肺臟均未見腫瘤轉(zhuǎn)移,各組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目分別為：對照組4.75,5-氟尿嘧啶組4.75,貝伐單抗組5.00,5-FU+Bev聯(lián)合組5.25；經(jīng)單因素方差分析,各組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05) 7.藥物副作用評價 與對照組相比,各治療組裸鼠均有皮膚破潰出血發(fā)生,經(jīng)安爾碘消毒處理后,潰瘍均能1天內(nèi)結(jié)痂,創(chuàng)面無滲血、感染等。5-FU+Bev聯(lián)合組裸鼠體重減輕量較對照組、5-氟尿嘧啶組、貝伐單抗組低(P0.05),而5-氟尿嘧啶組、貝伐單抗組與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。與各組相比,5-氟尿嘧啶組裸鼠白細(xì)胞計數(shù)明顯降低(P0.05)；貝伐單抗組、5-FU+Bev聯(lián)合組裸鼠白細(xì)胞計數(shù)與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論 1.5-氟尿嘧啶瘤內(nèi)注射可抑制結(jié)腸癌的生長,且抑瘤作用強于貝伐單抗；兩者聯(lián)合瘤內(nèi)注射有協(xié)同抑制裸鼠結(jié)腸癌移植瘤體積增長的作用。 2.5-氟尿嘧啶、貝伐單抗單用及兩者聯(lián)合瘤內(nèi)注射給藥,對遠(yuǎn)處(即非注藥側(cè))移植瘤生長無明顯抑制作用。 3.5-氟尿嘧啶、貝伐單抗聯(lián)合用藥能減輕5-氟尿嘧啶或貝伐單抗單用對荷瘤鼠的體重減輕、白細(xì)胞計數(shù)減少等副作用。
【關(guān)鍵詞】：裸鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型 5-氟尿嘧啶 貝伐單抗 聯(lián)合用藥 瘤內(nèi)注射 腫瘤轉(zhuǎn)移 副作用
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R735.35
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 英文~.略詞表15-16
• 第一章 前言16-21
• 第二章 材料與方法21-27
• 2.1 細(xì)胞株、裸鼠21
• 2.2 主要試劑及儀器21-22
• 2.3 方法22-27
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)22-23
• 2.3.2 裸鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型的制作23-24
• 2.3.3 動物分組24
• 2.3.4 給藥24-25
• 2.3.5 觀察指標(biāo)25-26
• 2.3.6 統(tǒng)計學(xué)處理26-27
• 第三章 結(jié)果27-39
• 3.1 各組藥物對裸鼠荷瘤模型移植瘤生長的影響27-31
• 3.2 各組藥物對荷瘤模型腫瘤生長的抑制作用31
• 3.3 各組藥物對荷瘤模型腫瘤生長的延緩作用31-32
• 3.4 各組藥物使腫瘤體積縮小的作用32-33
• 3.5 瘤內(nèi)注射各組藥物對遠(yuǎn)處腫瘤生長的影響33-37
• 3.6 各組藥物對裸鼠肝臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響37
• 3.7 藥物副作用評價37-39
• 3.7.1 荷瘤裸鼠消化系統(tǒng)、注藥部位、眼部副反應(yīng)發(fā)生率37-38
• 3.7.2 藥物對荷瘤裸鼠白細(xì)胞計數(shù)的影響38-39
• 第四章 討論39-46
• 第五章 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 綜述53-63
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1132728