本文關鍵詞：雌激素受體S309位點基因替代鼠的建立及該位點磷酸化在小鼠乳腺發(fā)育中的作用

  更多相關文章： 雌激素受體 雌激素 乳腺 基因替代鼠

【摘要】：研究背景： 雌激素及其受體（Estrogen Receptor，ER）信號系統(tǒng)在乳腺的發(fā)育和功能分化，以及疾病過程中有著非常重要的作用。乳腺的良惡性病變如乳腺囊性增生病、乳腺癌等都與ER信號系統(tǒng)的失調有關。自上個世紀六十年代Elwood V Jensen首次從理論上證實雌激素受體的存在以來，對于ER的研究一直沒有間斷過。雌激素受體有五個結構域，其激活途徑主要有三種，包括經(jīng)典的配體激活途徑、非經(jīng)典激活途徑及磷酸化激活途徑。ER與雌激素結合后形成配體-受體復合物，引發(fā)雌激素受體的構象改變形成二聚體并向細胞核內轉位，并與靶基因上的作用元件ERE結合激活其轉錄；另外ER還可與AP1、SP1等結合激活相應的靶基因轉錄。除了配體結合激活途徑外，ER還有多個磷酸化位點。這些位點大多位于AF1區(qū)，例如305位絲氨酸的磷酸化可使ER在未與配體結合狀態(tài)下激活。但目前對于雌激素受體磷酸化位點與乳腺的發(fā)育、癌變等關系研究并不透徹。 基因替代鼠（Knockin mice）是研究基因/蛋白特定位點功能的非常有效的途徑和工具，可以建立人類疾病相關的動物模型，在研究探討疾病的發(fā)病機制、相關基因分析、疾病預防等方面起到重要作用；也可以作為新藥研發(fā)的重要評價體系。因此，基因替代鼠不僅有利于帶動生命科學的前沿發(fā)展，也在醫(yī)學研究中起到先導作用。 王瑞安等人前期發(fā)現(xiàn)ER的305位絲氨酸（ER-S305）是一磷酸化位點。Pak1激酶和PKA激酶均可磷酸化這一位點。該位點的磷酸化可使ER在不與配體結合的狀態(tài)下激活，因而可能參與乳腺的癌變并與乳腺癌對抗雌激素療法的耐藥性有關。 本實驗擬建立與人ER-S305位點同位的ER-S309A基因突變鼠，觀察該磷酸化位點的消失對乳腺發(fā)育和癌變的影響，闡明ER在體內的調節(jié)機制，并進一步探討該位點做為乳腺癌化學預防、治療潛在靶點的可能性提供相關依據(jù)。 目的 通過建立ER S309A基因替代鼠，研究將該位點的絲氨酸突變?yōu)楸彼崾ミ@一磷酸化位點后小鼠的乳腺發(fā)育情況。通過觀察純合型替代鼠的乳腺發(fā)育情況、動情周期的變化，及給予雌激素后乳腺發(fā)育和動情周期的改變，分析ER-S309位點的磷酸化及能夠磷酸化這一位點的激酶分子在生殖功能和乳腺發(fā)育中的作用。 方法 1.建立ER-S309A基因替代鼠。剪尾提取總DNA，PCR擴增相應基因改變片段經(jīng)基因測序確定替代鼠的建立是否成功。 2.將雜合子小鼠相互交配。用PCR結合酶切分析鑒定基因型。分析子代小鼠的比例是否符合孟德爾遺傳規(guī)律。并觀察純合型雌性小鼠及雄性小鼠是否具有繁育能力，如能繁育則觀測雌性小鼠的哺育能力。 3.分別測定純合型與野生型雌性小鼠血中雌二醇的濃度。 4.分別取6、9、12周齡的純合型和野生型雌性小鼠的第3、4對乳腺卡紅整裝染色觀察發(fā)育情況、HE染色觀察動情周期的變化。 5.野生型小鼠三周齡時行雙側卵巢去勢手術后，分為給予雌激素組和對照組；純合型突變小鼠三周齡開始給予雌激素，分別觀察補充激素組和對照組小鼠第6、9、12周第4對乳腺卡紅染色觀察發(fā)育情況，HE染色觀察動情周期變化。 6.純合型和野生型雌性替代鼠，取其雙側卵巢、輸卵管HE染色，，觀察是否有形態(tài)學改變。 結果 1.基因測序結果顯示309位的絲氨酸被丙氨酸所替代，表明我們成功建立了ER-S309A基因替代鼠。 2.純合型雄性小鼠不具有生育能力。雌性純合型小鼠具有生育能力，但每窩的鼠仔數(shù)量較野生型雌性小鼠的每窩鼠仔數(shù)量有明顯減少，表明生殖力降低。 3.純合型雌性小鼠血中雌二醇濃度同野生型雌性小鼠血中雌二醇濃度相比沒有明顯差異。 4.純合型雌性小鼠的乳腺發(fā)育較正常野生型小鼠慢，導管生長緩慢、分支減少，乳腺腺泡數(shù)目減少，終末蕾的數(shù)量和面積減少；純合型小鼠的動情周期紊亂，角化細胞數(shù)量減少。 5.野生型雌性小鼠去勢后給予雌激素組乳腺可以正常生長，動情周期中出現(xiàn)明顯的角化細胞；未給予雌激素的對照組乳腺卡紅染色沒有明顯的導管生成，沒有動情周期出現(xiàn)。純合型雌性小鼠三周開始給予雌激素后導管生長速度加快、分支多，終末蕾的數(shù)量、面積增多；動情周期可見多量角化細胞。 6.純合型雌性小鼠卵巢和輸卵管沒有明顯的形態(tài)學改變。 結論 1.ERS309A基因替代鼠的建立成功； 2.失去ERS309A磷酸化位點后，雌激素受體功能降低，雄性小鼠喪失生殖功能；雌性小鼠生殖能力降低。 3.純合替代鼠血中雌二醇含量正常。 4.動情周期中S309A替代鼠由于ER功能下降，陰道上皮角化細胞數(shù)量減少，給予雌激素后角化恢復； 5.乳腺發(fā)育中S309A替代鼠乳腺導管由于ER功能下降，生長速度減慢、發(fā)育受阻。在高水平雌激素作用下，導管的發(fā)育缺陷可被糾正。
【關鍵詞】：雌激素受體 雌激素 乳腺 基因替代鼠
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-15
• 文獻回顧15-25
• 1. 雌激素受體15-18
• 2. 雌激素受體的激活途徑18-20
• 3. 雌激素受體在機體發(fā)育中的作用20-21
• 4. 雌激素受體在腫瘤中的作用21-22
• 5. 人體正常乳腺發(fā)育與乳腺癌22-23
• 6. 小鼠乳腺發(fā)育23-24
• 7. 基因替代鼠24-25
• 第一部分 ER S309A 基因替代鼠的建立25-41
• 引言25-26
• 1. 實驗材料26-28
• 1.1 實驗動物26
• 1.2 主要試劑和儀器26-28
• 2. 方法28-35
• 2.1 S309 基因替代鼠的構建28-29
• 2.2 純合型小鼠基因測序29-32
• 2.3 S309 基因替代鼠基因型鑒定32-35
• 3. 結果35-40
• 4. 討論40-41
• 第二部分 ER S309A 基因替代鼠的表型分析41-81
• 引言41-42
• 1. 實驗材料42-45
• 1.1 實驗動物42-43
• 1.2 組織標本43
• 1.3 所用儀器和試劑43-45
• 2. 方法45-52
• 2.1 S309 基因替代鼠基因型鑒定45-48
• 2.2 ER S309 基因替代鼠繁育能力48
• 2.3 ER S309 基因替代鼠生殖口與陰道之間距離48
• 2.4 血清中雌二醇含量測定48-49
• 2.5 S309 基因替代鼠乳腺發(fā)育情況49
• 2.6 S309 基因替代鼠表型分析:49-51
• 2.7 基因替代鼠卵巢、輸卵管 HE 染色51-52
• 3. 結果52-79
• 4. 討論79-81
• 小結81-82
• 參考文獻82-88
• 個人簡歷和研究成果88-89
• 致謝89

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于學文;雌激素受體的作用[J];國外醫(yī)學.婦幼保健分冊;2002年02期

2 黃靈芝;;線粒體雌激素受體的新功能[J];國際藥學研究雜志;2007年04期

3 孟萌;夏雅娟;李建云;;雌激素受體與癌癥的研究進展[J];內蒙古醫(yī)學雜志;2008年07期

4 張吉強;蔡文琴;;腦內雌激素受體的研究進展[J];局解手術學雜志;2009年01期

5 丁秀敏;何振祥;張克勤;;鉬離子在雌激素受體測定中的作用[J];中國腫瘤臨床;1989年01期

6 白玉興,羅頌椒;下頜髁突軟骨雌激素受體的測定[J];北京口腔醫(yī)學;2000年04期

7 許勇,杜寧;骨中的雌激素受體[J];中國中醫(yī)骨傷科雜志;2000年06期

8 郭宗儒,易翔,徐志斌;雌激素受體和選擇性雌激素受體調節(jié)劑相互作用的分子模擬(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;2002年03期

9 李連香;雌激素受體和絕經(jīng)的研究進展[J];國外醫(yī)學.婦幼保健分冊;2003年04期

10 貴春山,沈建華,羅小民,朱維良,沈旭,蔣華良;雌激素受體和選擇性雌激素受體調節(jié)劑的研究進展[J];中國藥物化學雜志;2005年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王東;劉振明;金宏威;張亮仁;;雌激素受體36亞型的同源模建以及配體設計[A];第十屆全國計算(機)化學學術會議論文摘要集[C];2009年

2 張孝斌;饒婷;程帆;;雌激素對雌鼠下尿路組織中雌激素受體表達的影響[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

3 易忠勝;莫凌云;劉紅艷;張愛茜;;植物性雌激素與雌激素受體作用的對接研究[A];第六屆全國環(huán)境化學大會暨環(huán)境科學儀器與分析儀器展覽會摘要集[C];2011年

4 向若蘭;侯林浦;馬旭;;快速檢測雌激素受體基因多態(tài)性方法的建立[A];第五屆全國優(yōu)生科學大會論文匯編[C];2000年

5 許丹寧;川允波;;雌激素受體及其在乳腺癌中的作用研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)產科學分會第五屆全體會議第十次學術研討會論文集[C];2009年

6 陳小武;祝善樂;范玉華;趙小明;殷樹儀;;大鼠心內神經(jīng)節(jié)中雌激素受體免疫反應陽性神經(jīng)元的研究[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

7 張愛茜;高常安;王連生;;基于受體結構的污染物雌激素受體親合力快速判別[A];中國化學會第26屆學術年會環(huán)境化學分會場論文集[C];2008年

8 胡禮宏;郭建榮;;雌激素與雌激素受體在大鼠肝臟缺血再灌注損傷中作用機制的研究[A];2009年浙江省麻醉學學術會議論文匯編[C];2009年

9 胡禮宏;郭建榮;;雌激素受體在大鼠肝臟缺血再灌注損傷的表達和意義[A];2009年浙江省麻醉學學術會議論文匯編[C];2009年

10 黃曼婷;林守清;沙桂華;;不同濃度的17-β雌二醇作用下骨膜來源的成骨細胞雌激素受體及雌激素相關受體基因的表達[A];第八次全國婦產科學學術會議論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 記者 何屹;雌激素受體可抑制暴飲暴食[N];科技日報;2014年

2 熊昌彪;北京s虐祿酒蓋牘手壹用誦亂┭蟹N];中國醫(yī)藥報;2008年

3 江西醫(yī)學院一附院腫瘤科 副主任醫(yī)師 熊建萍;怎樣合理地治療乳腺癌[N];家庭醫(yī)生報;2003年

4 劉燕玲;中美合作推進抗乳癌藥物研發(fā)[N];科技日報;2008年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丁國乾;食管腺癌細胞雌激素受體表達與化療敏感性的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

2 王彥林;CDK11相關蛋白通過泛素—蛋白酶體途徑抑制雌激素受體功能的研究[D];復旦大學;2008年

3 陳小寧;雌激素受體和視黃酸受體對促腎上腺皮質激素釋放激素的調控[D];中國科學技術大學;2009年

4 仇瑋yN;雌激素受體共調節(jié)因子RSRC1的生物學功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2009年

5 翁春艷;雌激素受體配體對二氫睪酮誘導的內皮細胞保護效應的影響及機制探討[D];中南大學;2012年

6 張力;雌激素受體及雌激素合成和代謝基因多態(tài)性與妊娠期肝內膽汁淤積癥相關性的研究[D];四川大學;2005年

7 曹猛;牙周膜中成纖維細胞雌激素受體的表達及雌激素對細胞骨分化能力影響的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2007年

8 熊志紅;與雌激素受體相互作用蛋白FHL2的功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2007年

9 袁瑞;子宮內膜雌激素受體a基因多態(tài)性及表達與原因不明月經(jīng)過少的關系研究[D];重慶醫(yī)科大學;2007年

10 劉旺根;雌激素受體-α 36過表達對人乳腺癌細胞MCF-7生物學行為的影響[D];鄭州大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓帥;利用神經(jīng)細胞損傷模型研究新型雌激素受體ER-α36在雌激素神經(jīng)保護中的作用及相關機制[D];山東大學;2015年

2 趙延芳;雌激素受體在青海地區(qū)胃癌組織中的表達及臨床意義[D];青海大學;2016年

3 李紅;雌激素受體在金錢魚生殖調節(jié)中的作用研究[D];上海海洋大學;2016年

4 李淑亞;寧夏部分城市社區(qū)中老年人群雌激素及雌激素受體基因多態(tài)性與血脂的關聯(lián)性研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2016年

5 朱焱;新型雌激素受體ERα36與窖蛋白-1在皮膚組織細胞中的表達和分布特征[D];遼寧師范大學;2012年

6 寧萌萌;基于雌激素受體和過氧化物酶體增殖子激活受體的藥物篩選及藥理學研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2006年

7 王冰;三氧化二砷誘導雌激素受體表達的體外研究[D];鄭州大學;2006年

8 梁正儀;雌激素受體基因多態(tài)性與妊娠期肝內膽汁淤積癥相關關系的研究[D];南昌大學;2006年

9 鄭紅梅;雌激素受體基因多態(tài)性與女性冠狀動脈粥樣硬化及脂質代謝的關系[D];河北醫(yī)科大學;2002年

10 楊柳;雌激素受體基因多態(tài)性與原發(fā)性膽汁性肝硬化的相關性研究[D];吉林大學;2010年

本文編號：1125261