本文關(guān)鍵詞：RNA氧化與線蟲衰老的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： RNA氧化 衰老 8-氧化鳥嘌呤 let-363 NDX-4

【摘要】：研究目的：探究RNA氧化與線蟲生命周期的相關(guān)性。 研究內(nèi)容：研究線蟲NDX-4蛋白的體外酶學(xué)活性；建立RNA氧化水平增加的線蟲模型；觀察RNA氧化水平增加后線蟲生命周期的改變,初步探討可能機(jī)制。 研究方法：體外表達(dá)NDX-4,采用HPLC-UV技術(shù)檢測其對8-oxodGTP和8-oxoGTP的酶學(xué)活性；對NDX-4基因缺陷線蟲進(jìn)行不同濃度的外源性底物刺激,采用質(zhì)譜技術(shù)檢測RNA氧化水平,以RNA中8-oxoG含量(每106個(gè)G中的個(gè)數(shù))表示,建立RNA氧化水平增加的線蟲模型；以KHB處理組為對照,觀察外源性底物刺激后線蟲生命周期的改變；采用質(zhì)譜技術(shù)分別檢測加壓后不同時(shí)間點(diǎn)0.5、1、2、4、8、12、16、20小時(shí)線蟲體內(nèi)的RNA氧化水平,觀察外源性底物刺激后線蟲體內(nèi)RNA氧化堿基代謝規(guī)律；建立檢測let-363表達(dá)的Real-time RT-PCR體系,并采用Real-time RT-PCR技術(shù),以KHB為對照,計(jì)算2-ΔΔCt值,檢測加壓后let-363基因隨時(shí)間的表達(dá)規(guī)律。 研究成果：HPLC-UV檢測顯示NDX-4蛋白能將8-oxodGTP和8-oxoGTP酶解為相應(yīng)的單磷酸和二磷酸形式；成功構(gòu)建RNA氧化水平增加的線蟲模型；與對照相比,RNA氧化水平增加的線蟲生命周期縮短；觀察外源性底物刺激后線蟲體內(nèi)RNA氧化堿基代謝規(guī)律：氧化加壓后4小時(shí)氧化堿基達(dá)最高水平,其后逐漸降低,8小時(shí)恢復(fù)至對照組水平；RNA氧化水平增加后,線蟲let-363mRNA含量改變。 結(jié)論：線蟲NDX-4蛋白對8-oxodGTP和8-oxoGTP均具有酶學(xué)活性；線蟲體內(nèi)RNA氧化水平增加后,其生命周期縮短；線蟲體內(nèi)RNA氧化水平增加引起let-363表達(dá)變化,是否與線蟲生命周期縮短相關(guān)需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：RNA氧化 衰老 8-氧化鳥嘌呤 let-363 NDX-4
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R339.38
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 NDX-4蛋白的體外表達(dá)及酶學(xué)活性研究13-30
• 一、材料與方法13-24
• 1. 材料13-16
• 2. 方法16-24
• 2.1 NDX-4的原核表達(dá)16-23
• 2.2 NDX-4的酶學(xué)活性研究23-24
• 二、結(jié)果24-28
• 三、討論28-29
• 四、結(jié)論29-30
• 第二部分 RNA氧化對線蟲壽命的影響30-59
• 一、材料與方法30-46
• 1. 材料30-33
• 2. 方法33-46
• 2.1 回交實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.2 8-oxoGTP加壓實(shí)驗(yàn)34-38
• 2.3 生命周期實(shí)驗(yàn)38-39
• 2.4 加壓后線蟲體內(nèi)RNA氧化堿基的代謝39-40
• 2.5 加壓后與壽命相關(guān)基因let-363的表達(dá)40-46
• 二、結(jié)果46-56
• 三、討論56-58
• 四、結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 致謝63-64
• 文獻(xiàn)綜述64-69
• 參考文獻(xiàn)67-69
• 已發(fā)表文章及首頁69-70
• 個(gè)人簡歷70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 孫秀秀;孫海燕;黃曉星;劉莉;;秀麗隱桿線蟲在衰老分子機(jī)制研究中的應(yīng)用[J];世界臨床藥物;2013年02期

2 王春霖,郭芳,王永利;自由基與衰老[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年04期

3 吳苗苗;苑玉和;陳乃宏;;mTOR信號通路與神經(jīng)退行性疾病研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2011年11期

4 宋曉寧;鄭君德;劉東戈;黑愛蓮;蔡劍平;;MTH2蛋白與8-氧鳥嘌呤脫氧核苷在阿爾茨海默病患者海馬組織中的表達(dá)變化[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào);2009年05期

5 鄭君德;宋曉寧;林靜;蔡劍平;;氧化應(yīng)激與老年性癡呆發(fā)病的相關(guān)性研究[J];中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2008年04期

6 蒙茗;黑愛蓮;姜平;蔡劍平;;MTH2和MTH3蛋白在快速老化模型鼠SAMP8胸腺中增齡性表達(dá)的比較研究[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2013年05期

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本文編號：1124040