本文關(guān)鍵詞：HSF1對(duì)Dp71表達(dá)的調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 熱休克因子1(HSF1) 表達(dá)調(diào)控 Dp71

【摘要】：Dp71是抗肌萎縮蛋白(dystrophin)基因家族在諸多組織均有表達(dá)的一個(gè)具有多種功能的同源異構(gòu)體蛋白。近年來(lái)的一系列研究表明：該蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育,神經(jīng)系統(tǒng)功能的維護(hù)以及神經(jīng)細(xì)胞的黏附和增殖過(guò)程起著重要的作用。作為介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)中熱休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)產(chǎn)生的重要轉(zhuǎn)錄因子,熱休克因子1(heat shock factor1,HSF1)還能通過(guò)結(jié)合其他基因(如iNOS、Fas)啟動(dòng)子區(qū)的HSE影響其mRNA和蛋白水平表達(dá)來(lái)發(fā)揮其他生物學(xué)功能。生物信息學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn)小鼠和人的Dp71啟動(dòng)子區(qū)含有一個(gè)熱休克元件(HSE),表明Dp71的表達(dá)可能受到HSF1的調(diào)控。本課題主要是研究HSF1對(duì)Dp71基因的表達(dá)的影響,從而探討Dp71作為HSF1可能的下游調(diào)節(jié)產(chǎn)物,最終導(dǎo)致HSF1基因敲除小鼠產(chǎn)生一系列神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。 本課題主要采取以下方法：1、取野生型小鼠和HSF1敲除小鼠的大腦、肺、肝臟、腎臟、脾臟等組織,提取蛋白和mRNA做Western-blot和Real time RT-PCR,在整體動(dòng)物上檢測(cè)HSF1敲除對(duì)DP71在非肌肉組織中表達(dá)水平的影響；2、人肺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染HSF1真核表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒,Western-blot和Real time RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中HSF1表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)對(duì)DP71的]mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響；3、EMS A和雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)從分子水平驗(yàn)證HSF1與Dp71基因啟動(dòng)子區(qū)HSE的結(jié)合。 結(jié)果顯示：(1)和野生型小鼠相比,HSF1敲除小鼠非肌肉組織中Dp71的mRNA和蛋白表達(dá)水平下降,其中腦組織和肺組織中表達(dá)有差異,其差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(2)A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染HSF1真核表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒明顯升高和降低A549細(xì)胞Dp71的mRNA和蛋白表達(dá)水平(3)EMSA和熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)HSF1能與Dp71基因啟動(dòng)子區(qū)的HSE直接結(jié)合。以上結(jié)果表明：整體動(dòng)物中HSF1缺失可使Dp71在非肌肉組織中表達(dá)降低；HSF1過(guò)表達(dá)和表達(dá)抑制使得A549細(xì)胞中Dp71基礎(chǔ)表達(dá)分別升高和降低；分子水平證實(shí)HSF1直接結(jié)合Dp71基因啟動(dòng)子區(qū)的HSE。圖16幅,表2個(gè),參考文獻(xiàn)58篇
【關(guān)鍵詞】：熱休克因子1(HSF1) 表達(dá)調(diào)控 Dp71
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 目錄8-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 第一章 前言11-15
• 第二章 材料與方法15-32
• 2.1 材料15-19
• 2.1.1 動(dòng)物15
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞、菌株、質(zhì)粒15
• 2.1.3 主要試劑15-16
• 2.1.4 主要儀器16-17
• 2.1.5 引物以及探針序列17
• 2.1.6 主要溶液的配置17-19
• 2.2 方法19-31
• 2.2.1 整體表達(dá)譜的研究19-22
• 2.2.2 細(xì)胞水平HSF1對(duì)Dp71調(diào)控的驗(yàn)證22-23
• 2.2.3 調(diào)控機(jī)制的研究23-31
• 2.3 數(shù)據(jù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31-32
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-40
• 3.1 HSF1敲除對(duì)小鼠腦、肺、腎、肝、脾組織DP71表達(dá)的影響32-33
• 3.1.1 HSF1基因敲除(HSF1-/-)小鼠和野生型(HSF1+/)小鼠Dp71mRNA表達(dá)譜32
• 3.1.2 HSF1基因敲除(HSF1-/-)小鼠和野生型(HSF1+/+)小鼠Dp71蛋白表達(dá)譜32-33
• 3.2 HSF1過(guò)表達(dá)與表達(dá)抑制對(duì)DP71 MRNA與蛋白表達(dá)的影響33-36
• 3.2.1 過(guò)表達(dá)HSF1對(duì)Dp71 mRNA與蛋白表達(dá)的影響33-35
• 3.2.2 抑制A549細(xì)胞HSF1表達(dá)對(duì)Dp71 mRNA與蛋白表達(dá)的影響35-36
• 3.3 HSF1對(duì)DP71表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制研究36-40
• 3.3.1 EMSA檢測(cè)HSF1與Dp71基因啟動(dòng)子區(qū)HSE的結(jié)合情況36-37
• 3.3.2 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)探討HSF1過(guò)表達(dá)對(duì)Dp71啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響37-40
• 第四章 討論40-42
• 第五章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述48-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 附錄56-59
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果59-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黎青;李少英;胡冬貴;孫筱放;陳敦金;張成;蔣瑋瑩;;假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥的產(chǎn)前基因診斷(英文)[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

2 梁穎茵;張成;陳松林;馮善偉;;3號(hào)外顯子缺失后dystrophin蛋白空間結(jié)構(gòu)和功能改變[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

3 許弘飛;李永宏;陳陽(yáng);程利寶;;病毒性心肌炎和擴(kuò)張性心肌病中Dystrophin蛋白的表達(dá)[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

4 朱海燕;鄔玲仟;梁德生;夏家輝;;DMD基因突變及突變檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年11期

5 王偉文;廖曉陽(yáng);吳渝憲;王慶松;;抗肌萎縮蛋白在不同類型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥中表達(dá)的研究[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2010年03期

6 岳俊杰,汪莉,王月蘭,李北平,梁龍,俞煒源,黃培堂;SARS病毒S蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)[J];生物技術(shù)通訊;2003年05期

7 朱熊兆;程明;彭敏;姚樹(shù)橋;;雄性HSF1基因缺陷小鼠的行為改變[J];心理學(xué)報(bào);2007年02期

8 周暢;張成;;反義寡核苷酸干預(yù)剪接治療Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良[J];中華神經(jīng)科雜志;2006年08期

9 張成,馮慧宇,黃紹良,方建培,肖露露,姚曉黎,陳純,葉欣,曾纓,盧錫林,文劍明,張為西,李中,馮善偉,徐宏貴,黃科,周敦華,陳維,謝有梅,席靜,張萌,黎陽(yáng),劉穎;臍血干細(xì)胞移植治療假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2005年04期

10 李惠英;周紅雨;;Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良肌肉病變機(jī)制研究[J];中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2008年02期

，

本文編號(hào)：1119314