本文關(guān)鍵詞：沉默PPARγ2對(duì)BMP9介導(dǎo)的C2C12細(xì)胞成骨分化的影響

  更多相關(guān)文章： 沉默PPARγ2 C2C12細(xì)胞 成骨分化 BMP9 成脂分化

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 研究沉默PPARγ2在BMP9介導(dǎo)的C2C12細(xì)胞成骨分化的影響及可能機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法： 采用化學(xué)發(fā)光測(cè)定法、組織化學(xué)染色、PCR、Western blotting、螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒等技術(shù)，，研究沉默PPARγ2在BMP9誘導(dǎo)的小鼠C2C12細(xì)胞成骨分化的影響。具體方法如下： 1．檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2、AdBMP9后，C2C12細(xì)胞早期成骨指標(biāo)堿性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）的活性變化。 2．從基因表達(dá)水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后,C2C12細(xì)胞早期成骨指標(biāo)的表達(dá)情況 3．檢測(cè)AdSimPPARγ2和/或AdBMP9對(duì)C2C12細(xì)胞成脂分化轉(zhuǎn)錄因子C/EBP的影響。 4．檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后，晚期骨鈣蛋白（OCN）的表達(dá)及礦化基質(zhì)沉積的變化。 5．利用報(bào)告質(zhì)粒及Western blotting，檢測(cè)使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對(duì)BMPR-Smad信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。 6．利用Western blot，檢測(cè)使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對(duì)PTEN信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。 7.利用RT-PCR，檢測(cè)使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對(duì)IGF1細(xì)胞因子的影響，利用條件培養(yǎng)基，過表達(dá)IGF1，比較IGF1與AdSimPPARγ2對(duì)細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1．AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用增強(qiáng)早期C2C12細(xì)胞ALP活性。 2．AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用增加AdBMP9誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞早期成骨轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。 3．AdSimPPARγ2和BMP9聯(lián)合應(yīng)用能抑制AdBMP9誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞成脂分化因子C/EBP的表達(dá)。 4． AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用抑制AdBMP9誘導(dǎo)的晚期骨鈣素的表達(dá)并減弱C2C12細(xì)胞礦化基質(zhì)沉積。 5． AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用僅能在早期激活BMPR-Smad信號(hào)通路。 6．AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應(yīng)用能抑制AdBMP9誘導(dǎo)的PTEN信號(hào)通路。 7. AdSimPPARγ2促進(jìn)AdBMP9誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞早期成骨中IGF1基因表達(dá)，從而增強(qiáng)早期成骨分化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 沉默PPARγ2能明顯增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞的早期成骨分化，但抑制了晚期的成骨分化。早期的增強(qiáng)作用可能與增強(qiáng)BMPR-Smad信號(hào)轉(zhuǎn)錄活性、抑制PTEN信號(hào)轉(zhuǎn)錄活性及上調(diào)IGF1細(xì)胞因子的表達(dá)的有關(guān)，而晚期的抑制可能與BMPR-Smad信號(hào)轉(zhuǎn)錄活性逐漸減弱有關(guān)，晚期成骨受抑制的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：沉默PPARγ2 C2C12細(xì)胞 成骨分化 BMP9 成脂分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分:沉默 PPARγ2 對(duì) BMP9 誘導(dǎo)的 C2C12 細(xì)胞成骨分化及相關(guān)信號(hào)分子的影響15-28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和方法15-22
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-27
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論27-28
• 第二部分: 沉默 PPARγ2 促進(jìn) BMP9 介導(dǎo)的 C2C12 細(xì)胞成骨分化機(jī)制的初步研究28-36
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和方法28-30
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論35-36
• 討論36-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士期間在國內(nèi)外雜志發(fā)表文章情況53-54

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳慧瑩;袁慧書;;磁共振脂肪定量技術(shù)在骨骼疾病中的應(yīng)用與展望[J];磁共振成像;2014年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐鋒鵬;運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)紅細(xì)胞參數(shù)的影響[D];上海體育學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉姚;青錢柳多糖對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞的細(xì)胞增殖及脂肪代謝的影響[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 于波;地塞米松誘導(dǎo)1周齡SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡的拉曼光譜研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號(hào)：1112273