本文關(guān)鍵詞：SPAG6基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)SKM-1細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建SPAG6-shRNA慢病毒載體靶向沉默SPAG6基因,探討SPAG6基因沉默對(duì)人骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome,MDS)細(xì)胞株SKM-1細(xì)胞增殖及凋亡的影響。方法設(shè)計(jì)并構(gòu)建3條針對(duì)SPAG6基因的shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體,共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后得到可表達(dá)SPAG6基因RNAi的慢病毒載體。轉(zhuǎn)染SKM-1細(xì)胞,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,qRT-PCR及Western blot驗(yàn)證SPAG6基因干擾效果,篩選最佳靶點(diǎn)。CCK-8法檢測(cè)SPAG6基因沉默對(duì)SKM-1細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果成功構(gòu)建SPAG6-shRNA慢病毒載體,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率均在60%以上。qRT-PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示SPAG6-shRNA3慢病毒載體敲除效率最高,為最佳靶點(diǎn)。SPAG6基因干擾后,干擾組SKM-1細(xì)胞的增殖明顯受抑,抑制率為(60.18±0.37)%,與陰性對(duì)照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。干擾組SKM-1細(xì)胞凋亡率為(16.32±5.80)%,顯著高于陰性對(duì)照組[(4.28±0.88)%,P=0.024]及空白對(duì)照組[(3.08±1.50)%,P=0.019]。結(jié)論 SPAG6-shRNA慢病毒載體能有效降低SPAG6基因表達(dá)水平,抑制SKM-1細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： SPAG基因 慢病毒 RNA干擾 骨髓增殖異常綜合征
【基金】：重慶市自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(CSTC2013jj B0145)~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一組起源于多能造血干/祖細(xì)胞的惡性克隆性疾病,以無(wú)效造血、難治性血細(xì)胞減少及高風(fēng)險(xiǎn)向急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)轉(zhuǎn)化為特征[1]。目前該病發(fā)病機(jī)制尚不清楚,治療上采取與白血病相似的治療手段,但療效

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1105488