本文關(guān)鍵詞：TEA阻斷BKCa離子通道對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及機制的研究

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【摘要】：目的： 觀察TEA阻斷BKCa離子通道后對體外培養(yǎng)兔主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖以及Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK信號途徑的影響。 方法： 體外培養(yǎng)家兔胸主動脈平滑肌細(xì)胞(VSMC),分別加入濃度為0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的tetraethyl-ammonium(TEA)干預(yù)VSMC生長24、48、72小時。采用噻唑藍(lán)比色法(MTT)測定不同濃度TEA作用不同時間后的吸光度值并計算細(xì)胞抑制率；免疫組織化學(xué)法檢查增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)蛋白的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry/financal capacity model FCM)測定細(xì)胞周期；蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)法檢測細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(P-ERK1/2)水平的變化。 結(jié)果： 1.平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)：典型的VSMC呈梭形,有典型的“峰谷樣”生長,α-actin免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈陽性。2.MTT檢測對VSMC活性的影響：MTT法檢測表明,在不同濃度TEA處理不同時間下,各組血管平滑肌細(xì)胞吸光度值與正常組相比明顯降低(P0.01),并隨TEA濃度的增加以及作用時間的延長,吸光度值逐漸減少(P0.01),細(xì)胞抑制率逐漸上升(P0.01)。3.免疫組化檢查細(xì)胞PCNA蛋白表達(dá)：同正常對照組比較,經(jīng)TEA處理后的VSMC PCNA蛋白陽性表達(dá)率下降,且隨濃度的增加表達(dá)率逐漸下降(P0.01)。4.流式細(xì)胞術(shù)分選結(jié)果分析細(xì)胞周期：VSMC經(jīng)不同濃度TEA處理24小時后,與正常組比較,各組G1期所占的百分比升高,而S期、G2期細(xì)胞所占百分比下降(P0.01),且隨著濃度的增加差異更加明顯(P0.01)。5.蛋白質(zhì)印跡(western blot)法檢測ERKl/2、P-ERK1/2蛋白的表達(dá)：與對照組比較,實驗組的ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達(dá)未見明顯減少(P0.05)。結(jié)論： 1、TEA可呈濃度依賴性抑制VSMC的增殖； 2、TEA可呈濃度依賴性阻滯VSMC由G0/G1向S期推進(jìn)； 3、TEA阻斷BKCa抑制VSMC增殖不經(jīng)由Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK信號途徑。
【關(guān)鍵詞】：四乙胺 BKCa離子通道 動脈血管平滑肌細(xì)胞 增殖 信號傳導(dǎo)通道
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中英文對照及英文縮略表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-13
• 實驗材料13-15
• 1 實驗動物13
• 2 主要試劑13-14
• 3 實驗設(shè)備14-15
• 實驗方法15-24
• 1 兔VSMC分離和培養(yǎng)15
• 2 兔VSMC鑒定15-16
• 3 實驗分組及其處理16-17
• 4 四唑鹽(MTT)比色實驗測細(xì)胞活性17
• 5 免疫組化測PCNA17-18
• 6 流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞周期18-19
• 7 免疫印跡法測ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表達(dá)19-23
• 8 統(tǒng)計方法23-24
• 實驗結(jié)果24-29
• 1 顯微鏡下VSMC形態(tài)及免疫組化鑒定24
• 2 MTT法測定經(jīng)TEA作用后VSMC增殖變化24-25
• 3 FCM測定不同濃度TEA作用下對VSMC的細(xì)胞周期的影響25-27
• 4 細(xì)胞免疫組化PCNA結(jié)果27
• 5 Wlestern Blot法測定VSMC ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達(dá)27-29
• 討論29-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 全文小結(jié)35-36
• 綜述 BKCa對VSMC增殖及AS形成的作用36-48
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 致謝48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：1103407