本文關(guān)鍵詞：登革熱抗體依賴性感染增強(qiáng)（ADE）的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：研究異型登革熱病毒(DENV)-抗體復(fù)合物感染K562細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體依賴感染增強(qiáng)作用(ADE)機(jī)制。方法：將梯度稀釋的II型登革熱膜前蛋白抗-PrM單克隆抗體與Ⅲ型登革熱病毒(MOI=3)于37℃,5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)孵育90min形成抗體-病毒復(fù)合物后感染K562細(xì)胞,通過間接免疫熒光染色,Real-Time PCR檢測DENV抗原在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)增強(qiáng),然后通過蛋白組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)ADE過程中K562細(xì)胞蛋白表達(dá)的差異,并通過G-O軟件對差異蛋白進(jìn)行歸類分析揭示其亞細(xì)胞定位和分子功能。然后選擇差異顯著的蛋白進(jìn)行Western Blot驗(yàn)證其在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)增強(qiáng),最后通過RNA干擾,Real-Time PCR研究該蛋白能否降低ADE過程中登革熱病毒的表達(dá)量。結(jié)果：抗體依賴增強(qiáng)作用(ADE)的效果取決于抗體濃度。稀釋度為1/2560的抗體與DENV結(jié)合共同感染K562后,細(xì)胞內(nèi)登革熱病毒抗原的免疫熒光染色結(jié)果有明顯增強(qiáng),Real-Time PCR檢測的結(jié)果也證實(shí)了該稀釋度的抗體病毒復(fù)合物感染K562細(xì)胞后登革熱病毒數(shù)量顯著增加。2-D及質(zhì)譜分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)ADE過程中有15個表達(dá)差異顯著的蛋白,GO分類分析發(fā)現(xiàn)差異蛋白主要與蛋白折疊,細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu),肌動蛋白微絲進(jìn)程,調(diào)節(jié)ATP酶的活性,調(diào)節(jié)橫紋肌,心肌收縮等生物過程相關(guān)。其中PFDN1和MYL3蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng), Western Blot結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。最后選擇RNA干擾PFDN1蛋白的表達(dá),Real-Time PCR檢測的結(jié)果顯示干擾PFDN1的表達(dá)后在ADE過程中登革熱病毒量明顯降低。結(jié)論：成功建立了登革熱病毒的抗體依賴感染增強(qiáng)作用的體外研究模型,發(fā)現(xiàn)了ADE過程中病毒表達(dá)增強(qiáng)相關(guān)的蛋白,為進(jìn)一步的ADE作用機(jī)制的研究及疫苗研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：登革熱 抗體依賴性感染增強(qiáng)作用(ADE) 差異蛋白質(zhì)組學(xué) RNA干擾
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 前言6-14
• (一) 登革熱病毒概況6-9
• (二) 登革熱ADE簡介9-10
• (三) 登革熱疫苗研究進(jìn)展10-12
• (四) 全球登革熱流行統(tǒng)計(jì)12-13
• (五) 課題研究目的及意義13-14
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法14-30
• (一) 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• (二) 實(shí)驗(yàn)方法17-30
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-40
• 1. 病毒滴度CCID50測定30
• 2. 病毒感染細(xì)胞的免疫熒光染色30
• 3. 體外ADE的間接免疫熒光染色結(jié)果30-31
• 4. Real-Time PCR31-32
• 5. 二維凝膠電泳結(jié)果32
• 6. 質(zhì)譜分析結(jié)果32-33
• 7. 差異蛋白質(zhì)的GO注釋和分析33-37
• 8. Western Blot37-38
• 9. RNA干擾PFDN1在K562細(xì)胞中的表達(dá)38-39
• 10. PFDN1干擾后登革熱病毒量的表達(dá)39-40
• 11. CCID 50值驗(yàn)證siRNA干擾后ADE效果40
• 三、討論40-44
• 小結(jié)展望44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 附錄Ⅰ 縮略詞50-51
• 附錄Ⅱ 溶液配制51-53
• 致謝53-54
• 個人簡介54
• 研究生期間參與的課題54-55
• 已發(fā)表的文章55-56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：1092014