本文關(guān)鍵詞：大鼠腎組織干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定

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【摘要】：目的分離培養(yǎng)及穩(wěn)定擴(kuò)增大鼠腎組織干細(xì)胞(kidney stem cell,KSC),并鑒定其生物學(xué)特征及干細(xì)胞特性。方法從4周齡雄性SD大鼠雙腎腎乳頭處分離培養(yǎng)KSC,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)特征,通過流式細(xì)胞、免疫熒光技術(shù)鑒定KSC的表型特征,通過成骨、成脂誘導(dǎo)分化鑒定其分化能力,并通過實(shí)時(shí)定量熒光PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)比較KSC與大鼠腎小管上皮細(xì)胞(renal tubular epithelial cell,RTEC)基因表達(dá)的差異。結(jié)果 KSC呈紡錘形或樹枝狀生長;免疫熒光結(jié)果顯示KSC可表達(dá)平滑肌肌動蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、神經(jīng)鈣粘蛋白(N-Cadherin)、神經(jīng)巢蛋白(Nestin)、CD133,不表達(dá)鈣粘蛋白-E(E-Cadherin)、細(xì)胞角蛋白(cytokeratin-18,CK-18)、緊密連接蛋白(zona occludens protein-1,ZO-1);細(xì)胞流式結(jié)果顯示,CD29、CD90、CD73表達(dá)比率分別為99.0%、95.8%和99.9%,CD45陽性率為3.4%;干細(xì)胞標(biāo)記CD133和Nestin陽性率分別為33.2%和70.2%,雙陽性率為31.4%;成脂誘導(dǎo)后油紅O染色呈紅色,成骨誘導(dǎo)后早期成骨細(xì)胞分化標(biāo)志茜素紅染色呈橙紅色;qRT-PCR結(jié)果顯示,與RTEC相比,原始胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物Nanog、Oct4/pou5f1、Sox2/sry-box-2的mRNA表達(dá)量在KSC中增高(P0.01),間質(zhì)標(biāo)記物α-SMA、Vimentin mRNA表達(dá)量在KSC中增高(P0.01),而成熟的上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-Cadherin、CK18mRNA表達(dá)量在KSC中降低(P0.01)。結(jié)論腎乳頭部位可以分離培養(yǎng)并穩(wěn)定擴(kuò)增出具有間充質(zhì)干細(xì)胞特性的KSC。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院南樓腎臟病科腎臟疾病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 腎組織干細(xì)胞 分離培養(yǎng) 腎乳頭 大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81170312;No.30772296) 北京市自然科學(xué)基金(No.7122163) 解放軍總醫(yī)院扶持基金(No.2012FCCXYY-4005)資助
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 干細(xì)胞廣泛存在于人體各個(gè)組織臟器中,如大腦、腸道、肝臟、皮膚等均發(fā)現(xiàn)有干細(xì)胞存在[1-4],這些干細(xì)胞被稱為組織特異性干細(xì)胞,腎臟中也同樣存在這一類干細(xì)胞,2004年Oliver等[5]首次提出腎組織干細(xì)胞(kidney stem cell,KSC)存在于腎乳頭的干細(xì)胞壁龕中,并證實(shí)了存在于此處的K

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本文編號：1091633