本文關(guān)鍵詞：大鼠pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒表達載體的構(gòu)建與包裝

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【摘要】：目的構(gòu)建大鼠少突膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)錄因子1(Olig1)的慢病毒表達載體,并進行鑒定和包裝。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR),分別以大鼠pEGFP-N3-Olig1表達質(zhì)粒和pDsRed-monomer-N1為模板,擴增獲得大鼠Olig1片段和紅色熒光蛋白(RFP)片段。將兩者進行PCR拼接獲得Olig1-RFP片段,并與pLenti6.3-MCS-DEST載體連接,構(gòu)建獲得pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒表達載體,并進行酶切鑒定、測序。然后,將其與包裝質(zhì)�；旌虾蠊厕D(zhuǎn)染HEK293T細胞進行包裝獲得慢病毒顆粒。結(jié)果通過酶切鑒定、測序,證明pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒表達載體構(gòu)建成功,且能夠被高效地包裝為病毒顆粒。結(jié)論成功建立大鼠pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒表達系統(tǒng),為進一步研究Olig1的生物學(xué)作用提供了實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學(xué)院科研中心組織移植安徽省重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 少突膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)錄因子 慢病毒表達載體 包裝 聚合酶鏈反應(yīng) 大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81071268,81171465,81271363)
【分類號】：R373
【正文快照】： 少突膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)錄因子1(oligodendrocytetranscription factor 1,Olig1)屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basic-helix-loop-helix,bHLH)轉(zhuǎn)錄因子超家族,是近年來備受關(guān)注的一個轉(zhuǎn)錄因子,與少突膠質(zhì)細胞的分化和成熟有關(guān),在神經(jīng)膠質(zhì)細胞分化發(fā)育過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用[1]。在前期的研

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