本文關(guān)鍵詞：過表達缺氧誘導(dǎo)因子-1α的結(jié)直腸癌裸鼠可視化模型的建立

  更多相關(guān)文章： 結(jié)直腸癌 移植瘤模型 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 慢病毒 缺氧誘導(dǎo)因子-α 綠色熒光蛋白

【摘要】：目的:建立一種熒光可視化顯像且穩(wěn)定過表達缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的裸鼠結(jié)直腸癌移植瘤模型。方法:對不同的人結(jié)直癌細胞系(SW480、SW620、LOVO及HCT116細胞)用缺氧誘導(dǎo)劑Co Cl2處理,根據(jù)HIF-1α被誘導(dǎo)表達的情況選擇合適的靶細胞;將HIF-1α的c DNA序列克隆至慢病毒表達質(zhì)粒p LV-TRC-EGFP,構(gòu)建p LVHIF1α-EGFP慢病毒表達質(zhì)粒,并包裝過表達HIF-1α的慢病毒顆粒Lenti-HIF1α-EGFP。將Lenti-HIF1α-EGFP感染SW480細胞,嘌呤霉素篩選穩(wěn)定過表達HIF-1α的細胞株SW480HIF-1α,Western blotting檢測SW480HIF-1α細胞內(nèi)HIF-1α及其下游蛋白VEGF、M1型丙酮酸激酶(pyruvate kinase expression M1,PKM1)的表達情況,Transwell實驗檢測其遷移能力。裸鼠腹腔注射SW480HIF-1α建立結(jié)直腸癌移植瘤模型,倒置熒光顯微鏡觀察裸鼠腹腔移植瘤結(jié)節(jié)。結(jié)果:常氧條件下4種結(jié)直腸癌細胞均不表達HIF-1α,經(jīng)Co Cl2誘導(dǎo)后,除SW480細胞系以外的細胞均可被誘導(dǎo)表達HIF-1α,故選擇SW480細胞作為研究靶細胞。成功構(gòu)建穩(wěn)定過表達HIF-1α的細胞株SW480HIF-1α,SW480HIF-1α細胞內(nèi)HIF-1α、VEGF和PKM1的表達水平均高于野生型SW480細胞,其遷移能力較野生型SW480細胞顯著增強[觀察視野內(nèi)遷移細胞數(shù):(250±11)vs(50±5)個,P0.01]。SW480HIF-1α組裸鼠腸壁形成腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量顯著多于SW480組[(15±4)vs(4±1)個,P0.05]。結(jié)論:成功建立了高表達HIF-1α的熒光可視化裸鼠移植瘤模型,為進一步的相關(guān)功能學(xué)研究以及藥物篩選提供條件。
【作者單位】： 同濟大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院甲狀腺乳腺外科;寧波市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所藥物與藥理研究室;第二軍醫(yī)大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀中心醫(yī)院普通外科;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)直腸癌 移植瘤模型 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 慢病毒 缺氧誘導(dǎo)因子-α 綠色熒光蛋白
【基金】：上海市科學(xué)技術(shù)委員會專項基金資助項目(No.12140902302)~~
【分類號】：R735.34;R-332
【正文快照】： [Chin J Cancer Biother,2015,22(2):246-251]結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是常見的消化道惡性腫瘤,世界范圍內(nèi)其平均發(fā)病率居男性第3位、女性第2位。在北美、新西蘭、西歐和日本(男性)等經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)其發(fā)病率高居第1、2位,我國結(jié)直腸癌發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年上升的趨勢,是臨床

【共引文獻】

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本文編號：1086592