本文關(guān)鍵詞：LPS長(zhǎng)期刺激巨噬細(xì)胞引起適應(yīng)性免疫應(yīng)答受損

  更多相關(guān)文章： 巨噬細(xì)胞 脂多糖 免疫抑制表型 Toll樣受體4信號(hào)通路

【摘要】：巨噬細(xì)胞是一種多功能的細(xì)胞，在不同的環(huán)境下可分化成不同的表型。脂多糖（Lippolysaccharide,LPS）通常被公認(rèn)為一種巨噬細(xì)胞的激活劑。本研究分別用LPS短時(shí)間(4h)刺激和長(zhǎng)時(shí)間(48h)刺激人外周血單核細(xì)胞來(lái)源的巨噬細(xì)胞，觀察LPS對(duì)巨噬細(xì)胞表型和功能所變化產(chǎn)生的影響。目的：體外建立巨噬細(xì)胞模型，研究LPS作用48h后巨噬細(xì)胞表型的改變，闡述表型變化機(jī)制。 方法：蔗糖密度梯度離心法從全血中分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞，結(jié)合磁珠細(xì)胞分選技術(shù)把單核細(xì)胞分選出來(lái)，體外誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，以未處理或IFN-γ處理為對(duì)照，對(duì)LPS處理48h的巨噬細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，細(xì)胞表面分子（HLA-DR/CD14/CCR7/HLA-ABC/CD40）的表達(dá)檢測(cè)，以及細(xì)胞因子（IL-10/IL-12/IL-6/TNF-α）分泌水平的檢測(cè)。同時(shí)把巨噬細(xì)胞與CD3~+T細(xì)胞進(jìn)行異體共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步觀察巨噬細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞增殖能力的影響。用熒光定量PCR在RNA水平驗(yàn)證TLR-4信號(hào)通路中的非MyD88依賴型途徑相關(guān)分子的表達(dá)水平。 結(jié)果：LPS處理48h的巨噬細(xì)胞，抗原遞呈能力（HLA-DR）下降，免疫抑制細(xì)胞因子IL-10升高，把LPS-M與異體T細(xì)胞共培養(yǎng)6天，其促進(jìn)CD8~+T細(xì)胞的增殖的能力較弱。定量PCR結(jié)果顯示LPS-M條件下的TRIF、IRF3、CIITA均呈下調(diào)狀態(tài)。 結(jié)論：短時(shí)間的LPS刺激可以迅速激活巨噬細(xì)胞，，但是LPS處理巨噬細(xì)胞48h后，巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)一種免疫抑制的狀態(tài)。且刺激CD8~+T細(xì)胞增殖的能力減弱。非MyD88依賴型TLR-4信號(hào)通路受損。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細(xì)胞 脂多糖 免疫抑制表型 Toll樣受體4信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 前言7-13
• 1.1 研究背景8-13
• 1.1.1 單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（MPS）的分化8
• 1.1.2 TLR-4信號(hào)通路8-9
• 1.1.3 M1和M2型巨噬細(xì)胞9-10
• 1.1.4 巨噬細(xì)胞的可塑性與T淋巴細(xì)胞10-11
• 1.1.5 固有免疫與適應(yīng)性免疫11
• 1.1.6 抗原遞呈11-13
• 第二章 技術(shù)路線13-14
• 第三章 材料與方法14-25
• 3.1 主要材料14-16
• 3.1.1 細(xì)胞和樣本14
• 3.1.2 主要試劑14-15
• 3.1.3 主要儀器15-16
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法16-25
• 3.2.1 從人的外周血中分離單個(gè)核細(xì)胞16
• 3.2.2 從單個(gè)核細(xì)胞中用磁珠分選monocyte（負(fù)選）16-17
• 3.2.3 體外誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化成巨噬細(xì)胞17
• 3.2.4 體外誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化成DC17-18
• 3.2.5 CD3~+T細(xì)胞磁珠分選（正選）18
• 3.2.6 CFSE染色18
• 3.2.7 巨噬細(xì)胞與異體淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)18-19
• 3.2.8 AnnexinV-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)19
• 3.2.9 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-1019-20
• 3.2.10 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子IL-6（減步法）20-21
• 3.2.11 流式檢測(cè)細(xì)胞表面抗體21
• 3.2.12 微量總RNA的提取21
• 3.2.13 總RNA逆轉(zhuǎn)錄21-22
• 3.2.14 熒光定量PCR（SYBRGreenAssay）22-24
• 3.2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理24-25
• 第四章 結(jié)果25-34
• 4.1 從人外周血中分離得到純度較高的單核細(xì)胞25
• 4.2 LPS刺激巨噬細(xì)胞48小時(shí)后抗原遞呈能力下降25-27
• 4.3 LPS長(zhǎng)時(shí)間刺激的巨噬細(xì)胞無(wú)凋亡發(fā)生27
• 4.4 LPS刺激巨噬細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化27-30
• 4.4.1 不同刺激的時(shí)間點(diǎn)下LPS-M的HLA-DR和CCR7動(dòng)態(tài)變化27-28
• 4.4.2 不同刺激的時(shí)間點(diǎn)下LPS-M分泌的細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化28-29
• 4.4.3 排除IL-10自分泌引起HLA-DR的高表達(dá)29-30
• 4.5 從人外周血分離得到純度較高的CD~3S+T細(xì)胞30-31
• 4.6 異體混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)31-32
• 4.7 TLR-4信號(hào)通路關(guān)鍵調(diào)控基因表達(dá)受損32-34
• 第五章 討論與結(jié)論34-36
• 第六章 總結(jié)36-37
• 第七章 本文的創(chuàng)新之處37-38
• 第八章 展望38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 附錄43-44
• 在學(xué)期間發(fā)表文章44-45
• 致謝45

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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本文編號(hào)：1085908