本文關(guān)鍵詞：IGF-1基因轉(zhuǎn)染對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物活性的影響

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【摘要】：研究背景和目的： 背景： 間充質(zhì)干細(xì)胞作為一種具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn),其在細(xì)胞治療領(lǐng)域展現(xiàn)了良好的前景。而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cell，ADMSCs）由于具有來源廣泛，，取材方便，體外可大量擴(kuò)增等優(yōu)點(diǎn)而越來越被大家所接受。但是干細(xì)胞移植仍然面臨許多問題，其中之一為植入細(xì)胞滯留率和存活率低下。目前有許多手段可用于提高干細(xì)胞的活性及移植效應(yīng)，包括移植前預(yù)處理、改變移植途徑、基因修飾等。其中基因修飾引起了人們的興趣,通過促進(jìn)或抑制基因的表達(dá)進(jìn)一步提高干細(xì)胞的治療作用。然而可用于基因修飾的基因以及介導(dǎo)載體種類繁多，因此選擇合適的基因以及攜帶基因的載體成為了提高干細(xì)胞移植效應(yīng)亟待解決的問題。 目的： 研究IGF-1基因轉(zhuǎn)染對(duì)ADMSCs生物活性的影響，并對(duì)其凋亡機(jī)制做初步研究。旨在為提高ADMSCs的活力和治療效果，并最終應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 分離、培養(yǎng)并鑒定ADMSCs,用攜帶IGF-1基因的慢病毒載體感染ADMSCs。實(shí)驗(yàn)分為ADMSCs，ADMSCs-GFP，ADMSCs-IGF三組，于病毒感染后四天收集細(xì)胞上清液和蛋白，行ELISA和Western-blot,測(cè)定各組中上清液IGF-1的分泌情況以及蛋白中Akt和P-Akt的表達(dá)。用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并繪制生長(zhǎng)曲線，用annexin-V測(cè)定各組細(xì)胞凋亡。 結(jié)果： 成功分離、培養(yǎng)了大鼠ADMSCs，表型鑒定CD31、CD34、CD45表達(dá)陰性，CD29及CD90表達(dá)陽性。ADMSCs經(jīng)過誘導(dǎo)可以向骨，脂肪和心肌細(xì)胞分化。IGF慢病毒表達(dá)載體感染脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察到持續(xù)表達(dá)的綠色熒光。ADMSCs-GFP和ADMSCs-IGF組的凋亡率明顯高于ADMSCs組，而ADMSCs-GFP與ADMSCs-IGF相比，前者的凋亡率要高于后者。MTT法顯示ADMSCs-IGF可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，在第5,6天時(shí)顯著高于其他倆組。ADMSCs可以通過旁分泌的形式分泌IGF-1，而ADMSCs-IGF組進(jìn)一步促進(jìn)了IGF-1的分泌，并且與時(shí)間成正相關(guān)。AKT在三組均表達(dá)但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但ADMSCs-IGF促進(jìn)了P-Akt的表達(dá)水平，與其他組相比具有顯著性差異。 結(jié)論： 1.成功分離培養(yǎng)了ADMSCs，并用IGF-1慢病毒載體成功轉(zhuǎn)染ADMSCs； 2.IGF-1基因修飾ADMSCs可以使IGF-1持續(xù)穩(wěn)定分泌，并且ADMSCs可以通過、分泌的形式分泌IGF-1; 3.IGF-1基因修飾ADMSCs可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制細(xì)胞凋亡; 4.IGF-1基因修飾ADMSCs抑制干細(xì)胞凋亡可能是通過激活PI3K/Akt通路
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 慢病毒載體 IGF-1 PI3K/Akt通路
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2;R450
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-14
• 參考文獻(xiàn)12-14
• 第一部分 大鼠來源的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定14-24
• 材料14-16
• 方法16-17
• 結(jié)果17-20
• 討論20-21
• 結(jié)論21-22
• 參考文獻(xiàn)22-24
• 第二部分 IGF-1 基因轉(zhuǎn)染對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物活性的影響24-45
• 材料25-27
• 方法27-30
• 結(jié)果30-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 逆轉(zhuǎn)錄病毒類載體在基因治療中的發(fā)展和應(yīng)用45-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• MSCs 的生物學(xué)特征及在心血管疾病中的應(yīng)用進(jìn)展50-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文62-63
• 致謝63-64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 王毅,胡志前,徐學(xué)俊,王元和,王強(qiáng),孔憲濤;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的HSV-TK基因系統(tǒng)對(duì)人胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及殺傷作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年04期

2 王紅衛(wèi),薛京倫;VSV-G假型反轉(zhuǎn)錄病毒載體在基因治療中的應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2001年01期

3 胡成俊;卓儒紅;鄭勇;吳艷;;轉(zhuǎn)染胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)心肌梗死后心功能的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年04期

4 徐道華;周晨慧;劉鈺瑜;許碧蓮;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的定向誘導(dǎo)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年01期

5 張美;呂國(guó)楓;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨的誘導(dǎo)分化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年45期

6 唐東杰,代解杰,陳元鼎,董德祥;泡沫病毒的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志;1999年01期

7 王軒 ,劉福坤 ,黎介壽 ,李希 ,徐根興;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的人endostatin基因療法抗腫瘤作用研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年11期

8 程芮;王士雯;張友榮;孟玲;曹豐;徐勇;王韞芳;裴雪濤;;3種不同途徑移植自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性心肌梗死效果比較[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年12期

9 鄧進(jìn);彭吾訓(xùn);王蕾;李鵬;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞二維培養(yǎng)條件下向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年16期

本文編號(hào)：1083505