本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞定向分化研究

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【摘要】：背景 隨著對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mysenchymal stem cells, HUCMSCs)的研究深入,越來越多的結(jié)果證明,]HUCMSCs能夠成功分化為神經(jīng)樣細(xì)胞,并且在神經(jīng)系統(tǒng)動(dòng)物模型中具有很好的修復(fù)作用。但其中存在很多問題：HUCMSCs的生物學(xué)特性還不甚清楚；向神經(jīng)元樣細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化,雖然各種方法都可以成功獲得神經(jīng)元樣細(xì)胞,但誘導(dǎo)效率并不高,并且不能有效的獲得單一種類的神經(jīng)元細(xì)胞,這給臨床應(yīng)用造成很大的不便；成功誘導(dǎo)HUCMSCs為神經(jīng)元樣細(xì)胞的機(jī)制還不清楚,干細(xì)胞治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病還處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段,缺乏臨床證據(jù)。 目的 本文從人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的多潛能特性出發(fā),探討不同方法誘導(dǎo)HUCMSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞(Neuron-like cells)分化的可行性,為進(jìn)一步研究HUCMSCs分化機(jī)制及在治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面提供理論依據(jù)。 方法 1.細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：HUCMSCs采用低糖DMEM+10%FBS進(jìn)行培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到80-90%時(shí),按照1：2或者1：3的比例進(jìn)行傳代。采用流式細(xì)胞儀(Flow cytometry, FCM)對(duì)HUCMSCs進(jìn)行表型鑒定。 2.細(xì)胞誘導(dǎo)：采用以下三種方法對(duì)HUCMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)：①低糖DMEM+10%胎牛血清(Fetal bovine serum, FBS)+20%胎兒腦組織勻漿(Human fetal brain tissue extracts, HFBTE)②ovine neuronal stem cell culture medium (Beijing huasen biotechnology, co. Ltd.)+20%HFBTE;③低糖DMEM+10%FBS+bFGF+DMSO+insulin+EGF。 3.采用免疫熒光、RT-PCR和Western blotting進(jìn)行神經(jīng)標(biāo)志物NSE、GFAP、 β3-tubulir等和神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、GDNF、VEGF等鑒定。 結(jié)果 1.FCM鑒定結(jié)果顯示,HUCMSCs表達(dá)CD73、CD90、CD105為陽性(95%),CD14、CD34、CD45、CD79a和HLA-DR表達(dá)為陰性(2%)。 2.RT-PCR和Western blotting檢測結(jié)果顯示,]HUCMSCs能夠表達(dá)神經(jīng)標(biāo)志物NSE、GFAP和多巴胺神經(jīng)元轉(zhuǎn)錄因Nurr1、Wnt-1和En-1。 3. RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),HUCMSCs能夠表達(dá)神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、GDNF、VEGF、 LIF、NGF和NT-3。 4. Western blotting檢測顯示,和未誘導(dǎo)干細(xì)胞組(對(duì)照組)相比,低糖DMEM+10%FBS+20%HFBTE誘導(dǎo)HUCMSCs3天和5天后,神經(jīng)標(biāo)志物NSE、GFAP、β3-tubulin、DAT和TH明顯上調(diào)；免疫熒光(]mmunofluorescence Staining,IF)結(jié)果顯示,20%腦組織勻漿誘導(dǎo)3天,各個(gè)神經(jīng)標(biāo)志物陽性率分別是NSE18.32±4.07%,GFAP16.94±7.56%, Nestin14.47±3.20%,LMXlB7.17±3.28%,DBH1.81±1.07%,DAT5.65±0.93%；誘導(dǎo)5天后,陽性率分別為NSE22.08±2.75%,GFAP17.83±5.55%, Nestin23.82±6.05%, LMX1B11.98±2.71%, DBH11.83±2.75%,DAT13.86±5.50%。 5. RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示,bovine neuronal stem cell culture medium+20%HFBTE誘導(dǎo)3天和5天后,HUCMSCs神經(jīng)標(biāo)志物(Nestin. NSE、S100B、En-1)和神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF、GDNF、VEGF、LIF、NGF和NT-3)明顯上調(diào)； 6.同樣,低糖DMEM+10%FBS+bFGF+DMSO+insulin+EGF處理HUCMSCs7天后,HUCMSCs神經(jīng)標(biāo)志物(GBX2、GFAP和DAT)和神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF、GDNF、 VEGF、LIF、NGF和PNT-3)明顯上調(diào)。結(jié)論 低糖DMEM+10%FBS+20%HFBTE、bovine neuronal stem cell culture medium+20%HFBTE和低糖DMEM+10%FBS+bFGF+DMSO+insulin+EGF均能誘導(dǎo)HUCMSCs分化為神經(jīng)樣細(xì)胞,為進(jìn)一步臨床試驗(yàn)打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 神經(jīng)樣細(xì)胞 胎兒腦組織勻漿 誘導(dǎo) 分化
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 實(shí)驗(yàn)方法16-21
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-39
• 討論39-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 綜述44-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況56-57
• 致謝57-58
• 個(gè)人簡歷58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 段軼捚;喬鑫;稅青林;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化的研究進(jìn)展[J];西南軍醫(yī);2009年05期

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5 黃偉;苗宗寧;陳鐳;張學(xué)光;;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子和睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子單獨(dú)或聯(lián)合體外誘導(dǎo)人臍帶血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年19期

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本文編號(hào)：1072944