本文關(guān)鍵詞：H-2K~b限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽的真核表達(dá)載體并檢測(cè)其在293T細(xì)胞中的表達(dá),并鑒定疫苗抗腫瘤效應(yīng)。方法篩選鑒定H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位9肽,設(shè)計(jì)并合成肽疫苗核酸序列,插入p UC57載體,經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定,亞克隆至真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)及p EGFP-N1載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,RT-PCR鑒定目的基因的轉(zhuǎn)錄,共聚焦顯微鏡鑒定目的基因的表達(dá)。構(gòu)建pc DNA3.1(+)-WT1免疫小鼠,取小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行體外特異CTL殺傷FBL3細(xì)胞試驗(yàn)。結(jié)果構(gòu)建的基因疫苗經(jīng)測(cè)序、雙酶切及PCR鑒定確認(rèn)無誤;其攜帶的目的基因可在293T細(xì)胞中表達(dá)。免疫小鼠后特異CTL對(duì)FBL3殺傷結(jié)果高于對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗,載體疫苗能在真核細(xì)胞中成功表達(dá),疫苗特異CTL具有體外殺傷腫瘤細(xì)胞功能,為提高WT1肽疫苗的抗腫瘤效應(yīng)提供了新思路。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué)微生物免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： H-Kb限制性 WT蛋白 CTL 肽表位 基因疫苗
【基金】：山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20140313011-18)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： Wilms瘤基因1(Wilms’tumor gene 1,WT1)首先在腎母細(xì)胞瘤中作為抑癌基因被克隆鑒定[1],隨后被證明在白血病和實(shí)體瘤中是癌基因。正如本課題組之前研究所述[2],WT1蛋白是廣譜性免疫治療惡性腫瘤很有前景的靶抗原。以WT1蛋白CTL表位肽為基礎(chǔ)的小鼠體內(nèi)[3],人體外[4]以及臨床試

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