發(fā)布時(shí)間：2017-10-20 07:25

  本文關(guān)鍵詞：影響臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞活性的機(jī)制及其保護(hù)液的研究

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【摘要】：背景 間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs, mesenchymal stem cells),是一類具有自我更新,在一定條件下具有多向分化潛能的多能干細(xì)胞。臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)具有MSCs的全部特性,而且其具有來源更加廣泛、獲取容易、不涉及倫理等優(yōu)勢(shì),現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用到臨床試驗(yàn)階段。我們知道UC-MSCs在移植治療前,需進(jìn)行臍帶的采集預(yù)處理、間充質(zhì)細(xì)胞的純化、傳代培養(yǎng)、治療前UC-MSCs的消化、添加適當(dāng)?shù)谋４嬉杭凹?xì)胞運(yùn)輸?shù)榷鄠�(gè)處理環(huán)節(jié)。這些都會(huì)對(duì)UC-MSCs的質(zhì)量以及移植后的治療效果產(chǎn)生影響。在這些環(huán)節(jié)中, UC-MSCs的保存是對(duì)細(xì)胞質(zhì)量影響最大的一個(gè)因素,但是目前并沒有與其相關(guān)的系統(tǒng)研究。 UC-MSCs在臨床移植治療中,不能將新鮮分離的干細(xì)胞直接輸注于人體內(nèi),它需要先存放在可以輸注的保存液(如0.9%氯化鈉注射液)中一定時(shí)間,再輸注入體內(nèi)。目前臨床常用的保存液有0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液,1%人血白蛋白液等,但UC-MSCs在這些保存液中活性會(huì)下降,影響臨床的治療效果。但是目前尚未見到研究這些介質(zhì)影響UC-MSCs活性機(jī)理的研究報(bào)道。 綜上所述,本課題根據(jù)上述提出的問題,我們首先測(cè)試了目前臨床常用0.9%氯化鈉注射液,5%葡萄糖注射液,復(fù)方電解質(zhì)注射液(Plasmalyte A),1%人血白蛋白溶液,5%人血白蛋白溶液這五種溶液對(duì)UC-MSCs的影響,其次我們用不同濃度的人AB血清加入到保存液中,觀察血清對(duì)UC-MSCs的保護(hù)作用,最后我們根據(jù)血清的成分,在保存液中添加保護(hù)性因子,配制一種UC-MSCs的保護(hù)液,使保存液對(duì)細(xì)胞活性的傷害降到最低,為臨床UC-MSCs的移植治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的： 1.評(píng)價(jià)臨床常用的細(xì)胞移植保存液對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞活性的影響 2.研究不同濃度的人AB血清在UC-MSCs保存過程中對(duì)其影響 3.根據(jù)血清中的成分,添加細(xì)胞的保護(hù)性因子,配制成UC-MSCs保護(hù)液,提高保存效果。 方法： 1.常用移植保存液對(duì)UC-MSCs體外生物學(xué)特性影響的研究 將正常環(huán)境培養(yǎng)的UC-MSCs重懸于五種保存液中,即0.9%氯化鈉注射液,5%葡萄糖注射液,復(fù)方電解質(zhì)注射液(Plasmalyte A),1%人血白蛋白溶液,5%人血白蛋白溶液。在4℃或24℃條件下分別保存2,4,6h,用本文方法觀察UC-MSCs在上述溶液中保存后細(xì)胞的活性、細(xì)胞的凋亡／死亡率、以及細(xì)胞保存后細(xì)胞的貼壁能力、細(xì)胞的表面標(biāo)記和成骨成脂能力的影響。 2.不同濃度血清對(duì)UC-MSCs保存效果的研究 4℃條件下,在0.9%氯化鈉注射液加入不同濃度的人AB血清作UC-MSCs的移植保存液,保存6、9、12h。觀察UC-MSCs在上述溶液中保存后細(xì)胞的活性、細(xì)胞的凋亡/死亡率、以及細(xì)胞保存后細(xì)胞貼壁能力、細(xì)胞的表面標(biāo)記和成骨成脂能力的影響。 3.添加細(xì)胞的保護(hù)性因子自制成UC-MSCs保護(hù)液。 4℃條件,加入各種對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用的細(xì)胞因子,自制一種UC-MSCs的保護(hù)液,保存6、9、12h。觀察UC-MSCs在保護(hù)液中細(xì)胞的活性、細(xì)胞的凋亡/死亡率、以及細(xì)胞保存后細(xì)胞貼壁能力、細(xì)胞的表面標(biāo)記和成骨成脂能力的影響。 結(jié)果： 1.UC-MSCs保存于各種現(xiàn)行臨床常用保存液中,細(xì)胞活性及細(xì)胞的貼壁能力都隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降。保存6h,UC-MSCs的活性降至81～53%,細(xì)胞貼壁率降至72%-38%。但是細(xì)胞的多向分化能力、表面標(biāo)記檢測(cè)仍符合UC-MSCs的標(biāo)準(zhǔn)。 2.UC-MSCs保存于不同濃度的血清溶液中,保存6h,2.5%血清濃度中UC-MSCs活性為86%,保存9h,2.5%血清濃度中UC-MSCs活性雖降至78%,但這也遠(yuǎn)高于不加血清的0.9%氯化鈉溶液的保存效果。存活細(xì)胞有細(xì)胞貼壁能力,多向分化能,表面標(biāo)記檢測(cè)符合UC-MSCs的標(biāo)準(zhǔn)。 3.UC-MSCs在自制的保護(hù)液中保存6h,細(xì)胞活性在90%以上,保存9h,細(xì)胞活性仍在88%以上,在保存12h后,細(xì)胞活性下降明顯,在80%左右,存活細(xì)胞仍有貼壁能力、多向分化能力,表面標(biāo)記檢測(cè)符合UC-MSCs的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)論： 1.UC-MSCs在臨床常用的保存液保存6h,細(xì)胞出現(xiàn)大量死亡,細(xì)胞活性與貼壁能力下降明顯。 2. UC-MSCs保存于不同濃度的血清溶液中,2.5%血清濃度對(duì)細(xì)胞保護(hù)效果明顯,由于血清中有許多未知成分,可能對(duì)細(xì)胞有毒性,細(xì)胞的活性隨血清濃度的增加而顯著下降。 3.自制的細(xì)胞保護(hù)液能夠有效改善UC-MSCs保存后的細(xì)胞活性,維持細(xì)胞穩(wěn)定,為臨床UC-MSCs的移植治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：臍帶間充質(zhì)細(xì)胞 移植保存液 細(xì)胞保護(hù)液 人AB血清
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 臨床常用保存介質(zhì)對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響14-33
• 前言14
• 1.實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 2.實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-29
• 4.實(shí)驗(yàn)討論29-33
• 第二部分 不同血清濃度的移植保存液對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響33-40
• 前言33
• 1.實(shí)驗(yàn)材料、主要實(shí)驗(yàn)器材與耗材33-34
• 2.實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-38
• 4.實(shí)驗(yàn)討論38-40
• 第三部分 自制臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植保護(hù)液的研究40-48
• 前言40-41
• 1.實(shí)驗(yàn)材料、主要實(shí)驗(yàn)器材與耗材41
• 2.實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-45
• 4.實(shí)驗(yàn)討論45-48
• 參考文獻(xiàn)48-58
• 綜述58-67
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況67-68
• 致謝68-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)介69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號(hào)：1066017