本文關(guān)鍵詞：腦缺血預(yù)處理對(duì)PPARγ信號(hào)通路及GLT-1表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：過氧化物酶增殖物激活受體（peroxisome prolifer atoractivatedreceptors, PPAR)是一種配體激活型轉(zhuǎn)錄因子，其包括α、β、γ三種亞型。PPARγ作為PPAR家族中的一種亞型，參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與糖代謝、脂肪細(xì)胞分化、能量平衡、炎癥反應(yīng)等體內(nèi)多種生理和病理生理過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ激活后能夠保護(hù)腦組織對(duì)抗缺血性損傷作用。目前，神經(jīng)系統(tǒng)疾病中最常見的疾病之一是缺血性腦血管病。嚴(yán)重的腦缺血常引起細(xì)胞、組織的不可逆性損傷。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，預(yù)先的短暫、輕度、不至于引起神經(jīng)元損傷的適當(dāng)缺血刺激可有效激發(fā)機(jī)體的內(nèi)在保護(hù)機(jī)制，保護(hù)機(jī)體使其能夠耐受隨后的嚴(yán)重?fù)p傷性缺血，從而提高腦組織對(duì)缺血的耐受能力。預(yù)先的適當(dāng)缺血刺激被稱為腦缺血預(yù)處理（cerebral ischemicpreconditioning, CIP）。自Kitagawa在1990年首次提出這一現(xiàn)象以來，大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了此現(xiàn)象的存在。本教研室前期實(shí)驗(yàn)觀察到，腦缺血預(yù)處理引起膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(glial glutamate transporter-1, GLT-1)的大量表達(dá)而誘導(dǎo)腦缺血耐受。腦缺血預(yù)處理是否通過PPARγ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)GLT-1大量表達(dá)目前未見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察在大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ的表達(dá)及其對(duì)GLT-1蛋白表達(dá)的相關(guān)影響，為將來腦缺血性疾病的防治提供理論依據(jù)。 方法：采用四血管閉塞法(Four-vessel occlusion,4VO)制造大鼠全腦缺血模型，選用健康雄性Wister大鼠（280-320g）240只。隨機(jī)分為以下兩部分： 1在腦缺血耐受誘導(dǎo)過程中，大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ蛋白的表達(dá) 首先永久凝閉大鼠椎動(dòng)脈，恢復(fù)2天后，進(jìn)行全腦缺血，然后恢復(fù)血流再灌注，具體分組如下（n=45）：①假手術(shù)（sham）組：只暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不阻斷血流；②C IP組：夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈3min；③損傷性缺血（ischemic insult, Ⅱ）組：夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈8min；④C IP+Ⅱ組：夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈3min作為腦缺血預(yù)處理，再灌2天后，再次夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈8min作為損傷性缺血。每個(gè)組均分為9個(gè)時(shí)間點(diǎn)，即假手術(shù)處理后或末次缺血后0min、15min、30min、3h、6h、1d、2d、4d和7d（每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n=5）。 在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)，斷頭取海馬CA1區(qū)腦組織，應(yīng)用Western blot方法觀察PPARγ蛋白的表達(dá)。 2PPARγ的特異性抑制劑GW9662對(duì)GLT-1蛋白表達(dá)的影響 具體分組如下：①3%DMSO+CIP+Ⅱ組（n=30）；②GW9662+CIP+Ⅱ（n=30）。CIP前30分鐘在側(cè)腦室分別注射3%DMSO或GW9662（劑量為5nmol)，然后同CIP+Ⅱ組。于末次缺血后即刻（0min）、3h、6h、1d、4d、7d時(shí)取海馬CA1區(qū)腦組織，，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只，應(yīng)用western blot法觀察GLT-1蛋白的表達(dá)，探討抑制PPARγ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)GLT-1蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1在腦缺血耐受誘導(dǎo)過程中，大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ蛋白的表達(dá) Western blot分析顯示，sham組大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ蛋白的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均無顯著差異(P＞0.05)。 在腦缺血預(yù)處理組，與即刻時(shí)間點(diǎn)相比，經(jīng)腦缺血預(yù)處理后，PPARγ蛋白的表達(dá)在30min時(shí)間點(diǎn)明顯升高，于3h時(shí)間點(diǎn)表達(dá)達(dá)到高峰，其積分光密度高達(dá)即刻時(shí)間點(diǎn)的2.5倍；從6h時(shí)間點(diǎn)開始，恢復(fù)至即刻時(shí)間點(diǎn)水平。 損傷性缺血組，經(jīng)8min全腦缺血打擊后，PPARγ蛋白的表達(dá)與即刻時(shí)間點(diǎn)相比于15min時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P0.05)；在30min、3h、6h時(shí)間點(diǎn)升高更為顯著(P0.01)，其積分光密度高達(dá)即刻時(shí)間點(diǎn)的10倍；在1d、2d、4d時(shí)間點(diǎn)雖有所回落，但仍處于較高水平(P0.05)；7d時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步下降，但仍明顯高于即刻時(shí)間點(diǎn)(P0.05)。上述結(jié)果表明，嚴(yán)重缺血打擊組8min全腦缺血后PPARγ蛋白的表達(dá)明顯升高。 在腦缺血預(yù)處理+損傷性缺血組（CIP+Ⅱ組）中，PPARγ蛋白的表達(dá)與即刻時(shí)間相比，在6h時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P0.05)，IOD值為即刻時(shí)間點(diǎn)的1.35倍；自2d時(shí)間點(diǎn)開始直至7d時(shí)間點(diǎn)PPARγ蛋白的表達(dá)均明顯下降(P0.05)；其余時(shí)間點(diǎn)均無顯著差異(P＞0.05)。 2PPARγ的特異性抑制劑GW9662對(duì)GLT-1蛋白表達(dá)的影響 DMSO+CIP+Ⅱ組，在即刻、3h、6h、1d、4d、7d總共六個(gè)時(shí)間點(diǎn)的GLT-1的蛋白表達(dá)均較高。與DMSO+CIP+Ⅱ組的各個(gè)相對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)相比較，5nmol GW9662+CIP+Ⅱ組GLT-1蛋白的表達(dá)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均顯著降低(P0.05)。 小結(jié)： 1CIP引起PPARγ蛋白的適度上調(diào)；損傷性缺血引起PPARγ蛋白的持久而強(qiáng)烈上調(diào)；提前2天進(jìn)行的3min腦缺血預(yù)處理，明顯抑制了8min損傷性缺血引起PPARγ蛋白的持久而強(qiáng)烈上調(diào)。 2PPARγ的特異性抑制劑GW9662阻斷腦缺血耐受誘導(dǎo)過程中GLT-1蛋白表達(dá)的上調(diào)。 結(jié)論：腦缺血預(yù)處理通過PPARγ調(diào)節(jié)GLT-1蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血預(yù)處理 腦缺血耐受 PPARγ GLT-1 Western blot 大鼠
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-28
• 討論28-30
• 小結(jié)30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 綜述 PPARγ及其配體在腦缺血耐受誘導(dǎo)過程中的作用研究33-45
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 致謝45-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 耿進(jìn)霞;張敏;李文斌;郭莉華;李清君;羨曉輝;;凝閉雙側(cè)椎動(dòng)脈預(yù)處理對(duì)大鼠全腦缺血損傷的防護(hù)作用[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2007年01期

2 葛恒,王長謙;PPAR配體作用機(jī)制及新配體篩選研究進(jìn)展[J];中國藥學(xué)雜志;2004年03期

本文編號(hào)：1064661