本文關鍵詞：腦缺血預處理對PPARγ信號通路及GLT-1表達的影響

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【摘要】：目的：過氧化物酶增殖物激活受體（peroxisome prolifer atoractivatedreceptors, PPAR)是一種配體激活型轉(zhuǎn)錄因子，其包括α、β、γ三種亞型。PPARγ作為PPAR家族中的一種亞型，參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與糖代謝、脂肪細胞分化、能量平衡、炎癥反應等體內(nèi)多種生理和病理生理過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ激活后能夠保護腦組織對抗缺血性損傷作用。目前，神經(jīng)系統(tǒng)疾病中最常見的疾病之一是缺血性腦血管病。嚴重的腦缺血常引起細胞、組織的不可逆性損傷。大量的動物實驗證實，預先的短暫、輕度、不至于引起神經(jīng)元損傷的適當缺血刺激可有效激發(fā)機體的內(nèi)在保護機制，保護機體使其能夠耐受隨后的嚴重損傷性缺血，從而提高腦組織對缺血的耐受能力。預先的適當缺血刺激被稱為腦缺血預處理（cerebral ischemicpreconditioning, CIP）。自Kitagawa在1990年首次提出這一現(xiàn)象以來，大量的動物實驗證實了此現(xiàn)象的存在。本教研室前期實驗觀察到，腦缺血預處理引起膠質(zhì)細胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體-1(glial glutamate transporter-1, GLT-1)的大量表達而誘導腦缺血耐受。腦缺血預處理是否通過PPARγ信號轉(zhuǎn)導通路誘導GLT-1大量表達目前未見相關報道。本實驗旨在觀察在大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ的表達及其對GLT-1蛋白表達的相關影響，為將來腦缺血性疾病的防治提供理論依據(jù)。 方法：采用四血管閉塞法(Four-vessel occlusion,4VO)制造大鼠全腦缺血模型，選用健康雄性Wister大鼠（280-320g）240只。隨機分為以下兩部分： 1在腦缺血耐受誘導過程中，大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ蛋白的表達 首先永久凝閉大鼠椎動脈，恢復2天后，進行全腦缺血，然后恢復血流再灌注，具體分組如下（n=45）：①假手術（sham）組：只暴露雙側(cè)頸總動脈，不阻斷血流；②C IP組：夾閉雙側(cè)頸總動脈3min；③損傷性缺血（ischemic insult, Ⅱ）組：夾閉雙側(cè)頸總動脈8min；④C IP+Ⅱ組：夾閉雙側(cè)頸總動脈3min作為腦缺血預處理，再灌2天后，再次夾閉雙側(cè)頸總動脈8min作為損傷性缺血。每個組均分為9個時間點，即假手術處理后或末次缺血后0min、15min、30min、3h、6h、1d、2d、4d和7d（每個時間點n=5）。 在規(guī)定的時間點，斷頭取海馬CA1區(qū)腦組織，應用Western blot方法觀察PPARγ蛋白的表達。 2PPARγ的特異性抑制劑GW9662對GLT-1蛋白表達的影響 具體分組如下：①3%DMSO+CIP+Ⅱ組（n=30）；②GW9662+CIP+Ⅱ（n=30）。CIP前30分鐘在側(cè)腦室分別注射3%DMSO或GW9662（劑量為5nmol)，然后同CIP+Ⅱ組。于末次缺血后即刻（0min）、3h、6h、1d、4d、7d時取海馬CA1區(qū)腦組織，，每個時間點5只，應用western blot法觀察GLT-1蛋白的表達，探討抑制PPARγ信號轉(zhuǎn)導通路對GLT-1蛋白表達的影響。 結(jié)果： 1在腦缺血耐受誘導過程中，大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ蛋白的表達 Western blot分析顯示，sham組大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ蛋白的表達在各時間點均無顯著差異(P＞0.05)。 在腦缺血預處理組，與即刻時間點相比，經(jīng)腦缺血預處理后，PPARγ蛋白的表達在30min時間點明顯升高，于3h時間點表達達到高峰，其積分光密度高達即刻時間點的2.5倍；從6h時間點開始，恢復至即刻時間點水平。 損傷性缺血組，經(jīng)8min全腦缺血打擊后，PPARγ蛋白的表達與即刻時間點相比于15min時間點明顯升高(P0.05)；在30min、3h、6h時間點升高更為顯著(P0.01)，其積分光密度高達即刻時間點的10倍；在1d、2d、4d時間點雖有所回落，但仍處于較高水平(P0.05)；7d時間點進一步下降，但仍明顯高于即刻時間點(P0.05)。上述結(jié)果表明，嚴重缺血打擊組8min全腦缺血后PPARγ蛋白的表達明顯升高。 在腦缺血預處理+損傷性缺血組（CIP+Ⅱ組）中，PPARγ蛋白的表達與即刻時間相比，在6h時間點明顯升高(P0.05)，IOD值為即刻時間點的1.35倍；自2d時間點開始直至7d時間點PPARγ蛋白的表達均明顯下降(P0.05)；其余時間點均無顯著差異(P＞0.05)。 2PPARγ的特異性抑制劑GW9662對GLT-1蛋白表達的影響 DMSO+CIP+Ⅱ組，在即刻、3h、6h、1d、4d、7d總共六個時間點的GLT-1的蛋白表達均較高。與DMSO+CIP+Ⅱ組的各個相對應的時間點相比較，5nmol GW9662+CIP+Ⅱ組GLT-1蛋白的表達在各個時間點均顯著降低(P0.05)。 小結(jié)： 1CIP引起PPARγ蛋白的適度上調(diào)；損傷性缺血引起PPARγ蛋白的持久而強烈上調(diào)；提前2天進行的3min腦缺血預處理，明顯抑制了8min損傷性缺血引起PPARγ蛋白的持久而強烈上調(diào)。 2PPARγ的特異性抑制劑GW9662阻斷腦缺血耐受誘導過程中GLT-1蛋白表達的上調(diào)。 結(jié)論：腦缺血預處理通過PPARγ調(diào)節(jié)GLT-1蛋白的表達。
【關鍵詞】：腦缺血預處理 腦缺血耐受 PPARγ GLT-1 Western blot 大鼠
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-28
• 討論28-30
• 小結(jié)30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-33
• 綜述 PPARγ及其配體在腦缺血耐受誘導過程中的作用研究33-45
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【參考文獻】

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1 耿進霞;張敏;李文斌;郭莉華;李清君;羨曉輝;;凝閉雙側(cè)椎動脈預處理對大鼠全腦缺血損傷的防護作用[J];中國應用生理學雜志;2007年01期

2 葛恒,王長謙;PPAR配體作用機制及新配體篩選研究進展[J];中國藥學雜志;2004年03期

本文編號：1064661