本文關(guān)鍵詞：MiR-214通過(guò)下調(diào)Osterix的表達(dá)而抑制小鼠多潛能成肌細(xì)胞C2C12向成骨細(xì)胞分化

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【摘要】：Osterix(Osx)是近年發(fā)現(xiàn)的成骨細(xì)胞分化和骨形成過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)控因子。Osx基因敲除的小鼠因成骨細(xì)胞分化受阻和骨發(fā)育的完全缺失在出生后不久就因呼吸困難而死亡。目前,對(duì)Osx表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究還比較薄弱。MicroRNA(miRNA)是一類包含19-24個(gè)核苷酸的非編碼小分子RNA,它在包括生物發(fā)育、細(xì)胞分化、增殖、生存和腫瘤形成等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。在本研究中,我們旨在探討mi RNAs對(duì)Osx的調(diào)控作用,從而進(jìn)一步理解成骨細(xì)胞分化的分子機(jī)制。我們首先通過(guò)生物信息學(xué)對(duì)Osx的3'UTR進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Osx 3'UTR上存在兩個(gè)miR-214的結(jié)合位點(diǎn),于是推測(cè)miR-214是Osx的一個(gè)潛在調(diào)控因子。接著我們分別構(gòu)建了含有全長(zhǎng)Osx 3'UTR和刪除了miR-214結(jié)合位點(diǎn)的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,然后將miR-214 mimic與Osx 3'UTR的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞,通過(guò)熒光素酶活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染Osx 3'UTR全長(zhǎng)的細(xì)胞的熒光素酶活性明顯降低,而轉(zhuǎn)染刪除了miR-214結(jié)合位點(diǎn)的質(zhì)粒的細(xì)胞的熒光素酶活性無(wú)明顯變化,從而證實(shí)了miR-214與Osx 3'UTR的結(jié)合。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn),在人骨肉瘤細(xì)胞Saos-2和U2OS中,miR-214的表達(dá)和Osx的表達(dá)呈反相平行關(guān)系,且miR-214對(duì)Osx的調(diào)控發(fā)生在翻譯水平。將214 mimic轉(zhuǎn)染高表達(dá)Osx的Saos-2細(xì)胞,通過(guò)western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),mi R-214能顯著下調(diào)Osx蛋白的表達(dá)。Real-time PCR的結(jié)果表明,在C2C12向成骨細(xì)胞分化的過(guò)程中,miR-214的表達(dá)下降。抑制miR-214表達(dá)后,C2C12細(xì)胞中成骨細(xì)胞分化標(biāo)志物ALP(alkaline phosphatase,ALP)、Col1a1(collagen type I,Col1a1)和OC(osteocalcin,OC)的表達(dá)顯著增強(qiáng)。ALP和ARS染色實(shí)驗(yàn)也表明,抑制miR-214表達(dá)后,C2C12細(xì)胞的ALP活性和礦化水平明顯升高。因此,本研究首次證明miR-214是Osx的一個(gè)新的調(diào)控因子,且miR-214通過(guò)下調(diào)Osx的表達(dá)而抑制C2C12細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化。本研究結(jié)果進(jìn)一步豐富了成骨細(xì)胞分化關(guān)鍵調(diào)控因子Osx表達(dá)調(diào)控機(jī)制的內(nèi)容,同時(shí)揭示了miR-214是成骨細(xì)胞分化的抑制因子,從而為闡明骨代謝過(guò)程,特別是為骨質(zhì)疏松及其它骨病的治療提供幫助。
【關(guān)鍵詞】：miR-214 Osterix 成骨分化 C2C12
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 材料和方法13-26
• 結(jié)果26-36
• 討論36-38
• 小結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 綜述45-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 附錄1:文章發(fā)表情況56-58
• 致謝58

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本文編號(hào)：1060565