本文關鍵詞：剛地弓形蟲RH株ROP18基因真核表達載體的構建

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【摘要】：目的 PCR擴增剛地弓形蟲(Toxplasma gondii)棒狀體蛋白18(ROP18)基因,構建真核表達載體pVAX1-ROP18,并檢驗其在真核細胞中的表達。方法 ROP18基因和質粒pVAX1分別經(jīng)HindⅢ和BamHⅠ雙酶切,在T4連接酶作用下連接過夜,將連接產物轉化至大腸埃希菌E.coil XL1-Blue感受態(tài)細胞,經(jīng)菌落PCR、雙酶切及測序正確的重組質粒pVAX1-ROP18轉染至HeLa細胞內。試驗設空白對照組和pVAX1空質粒對照。提取各組HeLa細胞的總RNA并將其逆轉錄成cDNA,分別進行管家基因β-actin和ROP18基因的RT-PCR擴增;采用Western blot法檢測轉染后各組細胞ROP18蛋白的表達情況。結果經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測,ROP18基因的RT-PCR擴增片段大小為1 665bp,與預期值相符;ROP18基因重組質粒轉化菌菌落PCR產物經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,大小為1 665bp,與預期值相符;雙酶切重組質粒得到預期酶切片段;重組質粒的目的基因序列與弓形蟲RH株ROP18基因(登錄號AM075204.1)序列比對完全一致。脂質體轉染后各組β-actin的RT-PCR擴增目的片段均為613bp,與預期值相符;pVAX1-ROP18重組質粒轉染組的ROP18的RT-PCR擴增目的片段大小為1 665bp,而其他組無該目的基因條帶。Western blot檢測重組質粒pVAX1-ROP18能夠在HeLa細胞內表達ROP18蛋白。結論成功構建了真核表達載體pVAX1-ROP18,且該重組質粒能夠在真核細胞內表達ROP18蛋白。
【作者單位】： 河北北方學院病原生物與免疫學研究所;
【關鍵詞】： 剛地弓形蟲 棒狀體蛋白 重組質粒 真核表達
【基金】：河北省自然科學基金項目(No.H2013405091) 河北北方學院校級重大課題(No.ZD201312)
【分類號】：R382.5
【正文快照】： ***剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)具有廣泛的宿主群,可引起弓形蟲病[1]。在多數(shù)情況下,弓形蟲感染呈隱性感染;在免疫力低下時可呈急性感染而出現(xiàn)嚴重異常[2-3]。妊娠期感染弓形蟲可引起流產,死胎等[4-6]。目前,弓形蟲病的防治措施多局限于藥物治療,療效差。弓形蟲疫苗的研究

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 蔣華,何深一;弓形蟲疫苗研究新進展[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2004年06期

2 吳彬;曹利利;姚新華;任科研;苑淑賢;趙權;;弓形蟲疫苗研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2013年01期

3 徐穎;高琦;徐前明;朱興全;;弓形蟲棒狀體頸部蛋白及棒狀體蛋白研究的新進展[J];中國人獸共患病學報;2013年12期

4 趙煥閣;韋yN;黃用豪;梁麗娟;林映瑩;譚光宏;;弓形蟲ROP18基因原核表達載體的構建及表達[J];中國病原生物學雜志;2013年06期

5 郭玲玲;張曉磊;張進順;賈曉暉;姜文靜;王春苗;劉楠;朱曉波;;剛地弓形蟲ROP18基因的克隆及生物信息學分析[J];中國病原生物學雜志;2015年05期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 江濤;陳芳;聶浩;方瑞;姚寶安;趙俊龍;;弓形蟲微線體蛋白MIC3基因的細胞免疫研究[J];安徽農業(yè)科學;2007年18期

2 劉俠;闞松鶴;林青;;弓形蟲病研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2015年01期

3 唐媛媛;莫緒維;陳鶴;李群;蔡亦紅;沈繼龍;;Chinese1基因型弓形蟲棒狀體蛋白ROP16的基因克隆表達及生物信息學分析[J];安徽醫(yī)藥;2015年04期

4 江濤;周艷琴;聶浩;陳聲國;方瑞;姚寶安;趙俊龍;;γ-干擾素對弓形蟲MIC3的基因免疫效果研究[J];華中農業(yè)大學學報;2007年04期

5 江濤;馬立安;趙俊龍;;弓形蟲MIC3蛋白質的二級結構及B細胞抗原表位預測[J];長江大學學報(自科版)醫(yī)學卷;2007年01期

6 殷國榮;孟曉麗;王海龍;石蓉;劉娟娟;管志玉;;弓形蟲復合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠誘導的腸IEL持續(xù)性免疫應答[J];熱帶醫(yī)學雜志;2006年02期

7 段志強;嵇辛勤;;弓形蟲微線體蛋白MIC3及其構建的核酸疫苗研究進展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2010年02期

8 江濤;張東林;聶浩;姚寶安;趙俊龍;;弓形蟲MIC3基因真核表達質粒的構建及在IBRS-2細胞內的表達[J];畜牧獸醫(yī)學報;2007年08期

9 張曉文;惠清法;;弓形蟲疫苗的研究進展[J];延安大學學報(自然科學版);2007年04期

10 張燕麗;曹麗艷;蘆峗;茍惠天;王艷華;付寶權;李文卉;張德林;;剛地弓形蟲GJS株微線體蛋白3基因真核表達質粒的構建及在BHK-21細胞中的表達[J];中國獸醫(yī)科學;2009年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 汪明;;重視人畜共患寄生蟲病,保護人類健康[A];全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王洪法;弓形蟲ROP2基因在大腸桿菌和卡介苗中的表達及免疫原性的研究[D];吉林大學;2005年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊歡歡;弓形蟲SAG1轉基因蜥蜴利什曼原蟲的構建及鑒定[D];吉林農業(yè)大學;2011年

2 孟曉麗;STAg和霍亂毒素滴鼻免疫小鼠誘導的弓形蟲特異性黏膜及系統(tǒng)免疫應答[D];山西醫(yī)科大學;2005年

3 劉娟娟;弓形蟲排泄—分泌抗原（ESA）鼻內免疫小鼠誘導的免疫應答的觀察[D];山西醫(yī)科大學;2006年

4 管志玉;ESA聯(lián)合STAg滴鼻免疫小鼠誘導的弓形蟲特異性黏膜及系統(tǒng)免疫應答[D];山西醫(yī)科大學;2006年

5 祁光宇;弓形蟲自然弱毒株（QHO）棒狀蛋白2基因片段的克隆、表達及鑒定[D];甘肅農業(yè)大學;2007年

6 喬增培;弓形蟲SAG5B和SAG1基因的克隆表達及其對小鼠免疫保護性研究[D];安徽醫(yī)科大學;2008年

7 田小東;弓形蟲SAG1、MIC3單基因及SAG1-MIC3融合基因真核表達載體的構建與鑒定[D];山東大學;2008年

8 姜麗;表達弓形蟲SAG1偽狂犬病病毒的構建及免疫研究[D];吉林農業(yè)大學;2008年

9 張燕麗;弓形蟲GJS株微線體蛋白3基因真核表達質粒的構建及表達[D];甘肅農業(yè)大學;2009年

10 其木格;弓形蟲RH株ROP4基因的原核表達及重組蛋白的免疫原性分析[D];延邊大學;2010年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙宏;焦順昌;張國慶;吳亮亮;;不同年齡、性別的健康成年人21項淋巴細胞亞群分析[J];標記免疫分析與臨床;2011年02期

2 金春梅;張厚雙;薛書江;權根花;崔金偉;王興貴;;弓形蟲AMA1蛋白真核表達載體的構建及免疫活性檢測[J];安徽農業(yè)科學;2010年29期

3 李大江;劉焱斌;劉凱;;生物信息學在未來感染病學教學中的地位和作用[J];華西醫(yī)學;2006年03期

4 周永華;范紅結;王春莉;高琪;;弓形蟲感染對大鼠T細胞免疫功能的影響[J];江蘇農業(yè)學報;2007年04期

5 呂燕波,萬瑛,吳玉章;SARS病毒基因組所編碼的E蛋白的二級結構和B細胞表位預測[J];免疫學雜志;2003年06期

6 陳海峰,鄭煥欽,徐勁,高世同,李華文,郭虹,周永安,陳觀今;SAG1和ROP1混合基因真核表達質粒接種小鼠誘導產生拮抗致死性弓形蟲感染的保護性免疫[J];熱帶醫(yī)學雜志;2003年01期

7 劉成芳;殷國榮;趙云鶴;張衛(wèi)國;劉紅麗;;不同佐劑的復合黏膜疫苗鼻內免疫小鼠抗弓形蟲感染的保護作用[J];熱帶醫(yī)學雜志;2009年07期

8 古欽民,王偉,卞繼峰,叢華,胡海燕,何深一,李瑛;弓形蟲表面抗原P22、P30復合基因在原核細胞中表達的研究[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2002年02期

9 譚逵;張瓊;范久波;謝榮華;蔣立平;吳翔;舒衡平;;弓形蟲新基因wx2表位疫苗免疫小鼠的保護研究[J];生物化學與生物物理進展;2008年09期

10 謝榮華;范久波;;幾種化學合成免疫調節(jié)劑免疫小鼠誘導的抗弓形蟲感染研究[J];中國熱帶醫(yī)學;2010年11期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐大為;剛地弓形蟲的嘧啶補救途徑[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1993年05期

2 申川軍;阿聯(lián)酋主要地區(qū)兒童剛地弓形蟲病流行情況的血清學調查[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2003年06期

3 彭鴻娟;;剛地弓形蟲納蟲泡的形成機制及其作用[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2010年05期

4 吳松霏;金炫佚;陳蓉;史俊巖;;剛地弓形蟲分子生物學檢測技術應用研究進展[J];中國病原生物學雜志;2012年10期

5 王林;沈繼龍;;剛地弓形蟲基因型和與基因型相關的致病機制研究進展[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2013年04期

6 吳增強;;剛地弓形蟲包囊的優(yōu)勢抗原鑒定[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1991年03期

7 姜昌斌;35株剛地弓形蟲分離株同工酶分析及其生物學和流行病學意義[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1993年04期

8 鄧艷琴;感染剛地弓形蟲豬體內抗體水平與所分離蟲株致病性的關系[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1995年02期

9 王海龍;李潤花;殷麗天;孟曉麗;劉紅麗;張鐵娥;關麗;殷國榮;;剛地弓形蟲蛋白質二硫鍵異構酶基因的克隆及原核表達[J];環(huán)境與健康雜志;2013年10期

10 王建成;用自然感染的人血清鑒別剛地弓形蟲重組核苷三磷酸水解酶同工酶[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2000年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 楊瑞;侯玉英;趙晉英;劉智深;饒華祥;張淑萍;徐秀文;祝壽芬;郭劍津;;剛地弓形蟲感染對雄性小鼠性激素分泌和睪丸激素受體的影響[A];中華醫(yī)學會熱帶病與寄生蟲學分會機會性感染學術研討會論文匯編[C];2007年

2 侯玉英;楊瑞;趙晉英;劉智深;張淑萍;徐秀文;饒華祥;郭劍津;祝壽芬;;剛地弓形蟲感染對小鼠生精細胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學會熱帶病與寄生蟲學分會機會性感染學術研討會論文匯編[C];2007年

3 劉麗麗;;概述弓形蟲病及其研究進展[A];中華醫(yī)學會第八次全國檢驗醫(yī)學學術會議暨中華醫(yī)學會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

4 張理航;邵國青;劉茂軍;呂芳;李賀俠;吳敘蘇;馮志新;;剛地弓形蟲NT株P30基因的克隆與表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十次學術研討會論文集[C];2009年

5 吳q;陳曉光;彭鴻娟;李華;;剛地弓形蟲SAG1基因的克隆及在大腸桿菌中的初步表達[A];中國動物學會第七屆全國青年寄生蟲學工作者學術討論會論文摘要集[C];2002年

6 張理航;劉茂軍;呂芳;李賀俠;吳敘蘇;馮志新;邵國青;;剛地弓形蟲NT株P30基因的克隆與表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第三屆豬病防控學術研討會論文集[C];2008年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 付永鋒;抗剛地弓形蟲特異性人源抗體Fab片段的制備和研究[D];復旦大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫敏;剛地弓形蟲14-3-3蛋白真核表達載體的構建與表達[D];山東大學;2013年

2 王芬;剛地弓形蟲磷酸甘油酸變位酶2基因的生物信息學分析、克隆表達及免疫保護性研究[D];山西醫(yī)科大學;2011年

3 岳紅霞;長春地區(qū)孕婦弓形蟲感染蟲株的基因分型[D];吉林大學;2011年

4 孔t，

本文編號：1060411