本文關(guān)鍵詞：NF-κB參與枸櫞酸鐵銨過載誘導(dǎo)的人肝細(xì)胞hepcidin基因表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 核因子κB 染色質(zhì)免疫共沉淀 電泳遷移率實驗 雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng) 鐵調(diào)素

【摘要】：目的:研究核因子κB(NF-κB)在枸櫞酸鐵銨過載誘導(dǎo)人肝細(xì)胞鐵調(diào)素(hepcidin)基因表達(dá)中的調(diào)控作用。方法:依據(jù)前期不同濃度枸櫞酸鐵銨抑制人肝細(xì)胞HH4增殖實驗結(jié)果,選取0.1、1、5和10 mmol/L枸櫞酸鐵銨處理人肝細(xì)胞HH4 48 h,半定量PCR法檢測胞內(nèi)hepcidin的表達(dá)水平;利用染色質(zhì)免疫共沉淀(Ch IP)、電泳遷移率實驗(EMSA)和雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng),并結(jié)合胞內(nèi)NF-κB活性抑制實驗,確定NF-κB對人hepcidin轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果:5 mmol/L和10 mmol/L濃度的枸櫞酸鐵銨處理細(xì)胞后,hepcidin表達(dá)水平顯著增強;Ch IP和EMSA實驗證實NF-κB能夠與hepcidin基因啟動子結(jié)合;重組螢光素酶報告質(zhì)粒TOPFlash-p Hepcidin相對螢光素酶活性明顯高于對照組;與重組質(zhì)粒TOPFlash-p Hepcidin相比,突變重組螢光素酶報告質(zhì)粒TOPFlash-p Hepcidin-mut相對螢光素酶活性顯著降低;NF-κB抑制劑BAY 11-7082顯著降低了hepcidin基因的表達(dá)。結(jié)論:NF-κB參與了鐵過載誘導(dǎo)的人hepcidin基因表達(dá)。這為進一步深入研究肝細(xì)胞鐵過載模式下多因子協(xié)同調(diào)控hepcidin基因表達(dá)的具體分子機理奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 江南大學(xué)糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點實驗室;江南大學(xué)生物工程學(xué)院;江南大學(xué)無錫醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 核因子κB 染色質(zhì)免疫共沉淀 電泳遷移率實驗 雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng) 鐵調(diào)素
【分類號】：R363
【正文快照】： 鐵調(diào)素(hepcidin)是一種肝臟分泌的在維持機體鐵代謝平衡中起關(guān)鍵性調(diào)控作用的小分子多肽[1]。2001年,2個獨立的實驗室首先從人的血液和尿液中將hepcidin純化出來[2]。Hepcidin蛋白與十二指腸、巨噬細(xì)胞和肝細(xì)胞細(xì)胞膜上的鐵轉(zhuǎn)運蛋白(ferroport-in,FPN)結(jié)合,誘使FPN內(nèi)化和泛素

【參考文獻】

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1 錢忠明;康友敏;常彥忠;柯亞;;HFE蛋白與遺傳性血色病[J];中國病理生理雜志;2006年02期

2 張玉超;沈媛媛;晏向華;王福O，

本文編號：1050743