本文關(guān)鍵詞：Integrinα9在人ADSCs向LECs分化過程中表達(dá)變化的相關(guān)研究

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【摘要】：目的從人體脂肪組織中分離培養(yǎng)出脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)，誘導(dǎo)其向淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(Lymphatic endothelial cells, LECs)分化，同時探討分化過程中整合蛋白α9(integrinα9)表達(dá)的變化，旨在尋找淋巴水腫分子治療靶點(diǎn)，為ADSCs應(yīng)用于淋巴水腫的分子治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法 ①從吸脂術(shù)后廢棄的人體脂肪組織中分離培養(yǎng)出ADSCs，倒置相差顯微鏡觀察原代及傳代細(xì)胞的形態(tài)特征。 ②流式細(xì)胞儀（FCM）檢測第三代ADSCs表面特征性抗原的表達(dá)，達(dá)到鑒定ADSCs的目的；MTT法繪制生長曲線，明確傳代過程中細(xì)胞生長情況是否發(fā)生改變。 ③用人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)、人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子A（VEGF-A）、血小板源性生長因子BB（PDGF-BB）誘導(dǎo)其向LECs方向分化，同時以人LECs作為陽性對照組。 ④Western Blot檢測各組細(xì)胞LECs表面特征性抗原淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞透明質(zhì)酸受體-1(LYVE-1)、血管內(nèi)皮細(xì)胞特征性抗原CD34及integrinα9的表達(dá)，明確實(shí)驗(yàn)組向LECs的分化，同時探討integrinα9在誘導(dǎo)前后表達(dá)的變化。 ⑤流式細(xì)胞儀（FCM）檢測各組細(xì)胞周期，分析分化前后細(xì)胞周期的改變，使用SPSS17.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 ①ADSCs貼壁生長，呈長梭形，對密度的依賴性較高，傳代后細(xì)胞生長速度明顯增快，第1、3、5代細(xì)胞生長曲線均為典型的“S”形。 ②FCM檢測抗原結(jié)果：CD29、CD90陽性表達(dá)， CD34、CD45陰性表達(dá)，與MSCs的特性相符合。 ③Western Blot結(jié)果顯示：陽性對照組中LECs表面特征性抗原LYVE-1的表達(dá)為陽性，血管內(nèi)皮細(xì)胞表面特征性抗原CD34為陰性表達(dá)，而integrinα9的表達(dá)與LYVE-1的表達(dá)趨勢一致，亦為陽性表達(dá)；實(shí)驗(yàn)組LYVE-1亦為陽性表達(dá)、且CD34為陰性表達(dá)，明確了LECs的生成，integrinα9為陽性表達(dá)，同時LYVE-1及integrinα9的表達(dá)水平低于二者在陽性對照組中的表達(dá)；陰性對照組中LYVE-1、integrinα9及CD34的表達(dá)均為陰性。 ④FCM檢測各組細(xì)胞周期，分析各組細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例，其中實(shí)驗(yàn)組（65.462.73）%、陽性對照組（62.350.50）%明顯小于陰性對照組（88.791.53）%，使用方差分析比較三組細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例的差異（F=186.77，P㩳0.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SNK法進(jìn)行兩兩比較，實(shí)驗(yàn)組G0/G1期百分比顯著小于陰性對照組（q=22.06，P㩳0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；陽性對照組G0/G1期百分比顯著小于陰性對照組（q=25.01，，P㩳0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與陽性對照組之間G0/G1期百分比無明顯差異(q=2.94，P=0.083㧐0.05)結(jié)論 ①ADSCs貼壁生長、長梭形，原代培養(yǎng)時細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的集落生長趨勢，且對密度的依賴性高，傳代后細(xì)胞增殖速率明顯增強(qiáng)，傳代后細(xì)胞的形態(tài)及生長情況不發(fā)生明顯改變，傳代后細(xì)胞的純度較高可用于ADSCs向LECs分化的研究。 ②使用VEGF-A、VEGF-C及PDGF-BB可成功將ADSCs誘導(dǎo)分化為LECs（LYVE-1表達(dá)陽性、CD34表達(dá)陰性，證實(shí)了LECs的 生成），ADSCs具有向LECs分化的潛能，在對各組細(xì)胞周期進(jìn)行檢測的時候我們發(fā)現(xiàn)，分化前后細(xì)胞的周期發(fā)生了改變，處于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯減少。 ③Integrinα9在LECs中的表達(dá)趨勢與LYVE-1的表達(dá)相一致，作為prox1基因下游調(diào)節(jié)關(guān)鍵因子，其在LECs的形成過程中可能發(fā)揮著極其重要的作用，該分子有望在淋巴水腫的再生治療中成為重要的分子靶點(diǎn)之一，但Prox1-integrinα9信號通路的具體調(diào)節(jié)機(jī)制目前還并不清楚，有待進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞 淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C 淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞透明質(zhì)酸受體-1 整合蛋白α9
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 第一部分 人 ADSCs 的分離、培養(yǎng)及鑒定14-20
• 前言14
• 1、材料與方法14-16
• 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-17
• 3、討論17-18
• 4、結(jié)論18-20
• 第二部分 ADSCs 向 LECs 分化的相關(guān)研究20-30
• 前言20-21
• 1、材料與方法21-26
• 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 3、討論27-29
• 4、結(jié)論29-30
• 全文小結(jié)30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 附圖（Figures）35-38
• 文獻(xiàn)綜述38-48
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文49-50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 白英偉;田興松;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分化潛能[J];中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2011年05期

2 王剛;周廣東;蔣朝華;曹衛(wèi)剛;;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞參與鼠尾淋巴水腫阻塞區(qū)淋巴管再生的研究[J];組織工程與重建外科雜志;2011年01期

本文編號：1047887