本文關(guān)鍵詞：家蠅熱休克蛋白HSP20基因克隆、表達(dá)和序列分析

  更多相關(guān)文章： 家蠅 熱休克蛋白(HSP) 克隆 表達(dá) 序列分析

【摘要】：目的對家蠅熱休克蛋白20(HSP20)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并進(jìn)行克隆、表達(dá)研究。方法利用美國國家生物技術(shù)信息中心和瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)中有關(guān)基因和蛋白序列的分析工具,結(jié)合其他生物信息學(xué)分析軟件包,從Gen Bank上家蠅基因組序列識別出編碼HSP20的基因,分析預(yù)測該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能;設(shè)計引物PCR擴(kuò)增HSP20基因,將其克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒PEASY-E1中,重組質(zhì)粒在大腸桿菌Origmi B/DE3中經(jīng)用異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)鑒定。結(jié)果 HSP20基因序列全長865bp,最大開放閱讀框(ORF)為567bp,編碼188個氨基酸,理論分子量為21443.2 Da,等電點(diǎn)為5.96;所構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、雙酶切及測序鑒定成功;SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒在Origmi B/DE3中表達(dá)并純化,得到的融合蛋白相對分子質(zhì)量約為21443.2 Da,誘導(dǎo)12 h蛋白表達(dá)量最高,SDS-PAGE法得到的蛋白條帶與目的蛋白大小相符。結(jié)論成功構(gòu)建PEASY-E1-HSP20重組原核表達(dá)質(zhì)粒并表達(dá)出融合HSP20蛋白,為進(jìn)一步研究該蛋白的功能奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;皖北礦務(wù)局煤電集團(tuán)總醫(yī)院普外科;貴州省疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 家蠅 熱休克蛋白(HSP) 克隆 表達(dá) 序列分析
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81360254;81160204) 國家科技支撐計劃課題(2011BAC06B12)
【分類號】：R384
【正文快照】： 熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)是生物體在高溫或者其他類型的脅迫誘導(dǎo)細(xì)胞合成或表達(dá)量改變的一類蛋白,最早是由Ritossa對果蠅進(jìn)行熱誘導(dǎo)時發(fā)現(xiàn)的[1],能起到穩(wěn)定和保護(hù)其他蛋白質(zhì)“分子伴侶”的作用[2]。HSP根據(jù)分子量的大小分為不同的亞型,分子量介于12~43 k Da的HSP被，

本文編號：1039559