本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌TRAP蛋白及VraX蛋白的生物學(xué)功能研究

  更多相關(guān)文章： 金黃色葡萄球菌 亞油酸 TRAP FadD 天然耐藥 VraX RNaseⅢ

【摘要】：1. TRAP蛋白參與長鏈不飽和脂肪酸殺傷金黃色葡萄球菌的機(jī)制研究； 2.假定蛋白VrX參與金黃色葡萄球菌天然耐藥的機(jī)制研究 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,金葡菌)是一種常見的革蘭氏陽性致病菌,廣泛分布于自然界中,通過飛沫、接觸等途徑傳播并引起多種疾病。當(dāng)金葡菌侵入機(jī)體時(shí),機(jī)體會(huì)通過補(bǔ)體系統(tǒng)、吞噬細(xì)胞、不飽和脂肪酸等多種防御系統(tǒng)清除入侵細(xì)菌。同時(shí)金葡菌自身在感染機(jī)體的過程中,也會(huì)表達(dá)多種分子對抗機(jī)體的清除作用。近年來由于抗生素濫用,導(dǎo)致了多種耐藥性金葡菌的出現(xiàn),耐藥金葡菌引發(fā)的感染是臨床面臨的棘手難題。 本論文主要針對以下兩個(gè)內(nèi)容展開了相關(guān)的研究,具體如下：①TRAP蛋白參與長鏈不飽和脂肪酸殺傷金葡菌的機(jī)制研究；②假定蛋白VraX參與金葡菌天然耐藥的機(jī)制研究。 本研究的第一部分為TRAP蛋白參與長鏈不飽和脂肪酸殺傷金黃色葡萄球菌的機(jī)制研究。長鏈不飽和脂肪酸一般指≥C16,含有一個(gè)以上雙鍵的脂肪酸。相關(guān)研究表明,該類脂肪酸是天然免疫系統(tǒng)中重要的組成成分,具有抗金葡菌感染的能力。TRAP是金葡菌致病性相關(guān)的蛋白分子,目前關(guān)于它的生物學(xué)功能存在爭議,其確切功能尚不清楚。該部分內(nèi)容具體如下： 1.△traP對亞油酸的敏感性檢測：我們實(shí)驗(yàn)室前期通過基因同源重組的方法獲得了traP基因的缺失突變株(△traP),當(dāng)其與亞油酸進(jìn)行共孵育培養(yǎng)時(shí),與野生型菌株相比,其存活率明顯降低。通過基因芯片對比分析我們發(fā)現(xiàn)在△traP中與脂代謝相關(guān)聯(lián)的基因fadD的mRNA水平明顯降低。 1.AfadD對亞油酸的敏感性檢測：我們通過基因同源重組的方法獲得了fadD基因缺失突變株(△fadD).進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),△fadD對亞油酸敏感性也明顯增強(qiáng)。我們在△traP中回復(fù)fadD的水平,但其對亞油酸的敏感性未得到回復(fù)。 3.TRAP蛋白通過與FadD蛋白相互作用參與亞油酸殺傷金葡菌的過程：通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)及質(zhì)譜鑒定的方法,我們發(fā)現(xiàn)FadB和FadD可能是TRAP的結(jié)合蛋白。進(jìn)一步的ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明只有FadD蛋白能夠特異與TRAP蛋白結(jié)合。這表明TRAP蛋白通過與FadD蛋白相互作是其影響亞油酸對金葡菌殺傷的主要機(jī)制。 本論文的第二部分為假定蛋白VraX參與金黃色葡萄球菌天然耐藥的機(jī)制研究。天然耐藥是指在抗生素作用下,抗生素敏感細(xì)菌中的一部分可以存活和繁殖,成為接收外來耐藥基因的載體。研究表明抗生素作用下,金葡菌中的多種分子異常表達(dá)對抗藥物的殺傷作用。通過文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn),多種抗生素處理后金葡菌假定蛋白VraX的水平明顯升高(20倍)。本部分研究中,我們主要探索VraX參與金葡菌天然耐藥的機(jī)制研究,具體內(nèi)容如下： 1.VraX蛋白與金葡菌的天然耐藥明顯相關(guān)：我們通過基因同源重組的方法獲得了vraX基因的缺失突變株(△vrax)。藥物敏感性檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明△vraX對多種抗生素敏感。 2. RNaseⅢ調(diào)控金葡菌中vraX的水平：我們通過RNA-pulldown實(shí)驗(yàn)中證實(shí)RNaseⅢ能夠結(jié)合vraX,基因芯片對比分析發(fā)現(xiàn)△RNaseⅢ中vraX的水平明顯升高,我們利用RT-PCR及qRT-PCR驗(yàn)證這一結(jié)果。進(jìn)一步的凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)證實(shí)RNaseⅢ可以特異的結(jié)合vraX。同時(shí)降解實(shí)驗(yàn)表明,在Mg2+存在的條件下vraX可以被RNaseⅢ特異的降解。我們的結(jié)果提示RNaseⅢ能夠結(jié)合并降解vraX。 綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)金葡菌中的TRAP蛋白可以通過與FadD蛋白相互作用參與亞油酸對金葡菌的殺傷。同時(shí),我們的研究結(jié)果表明VraX蛋白可能參與了金葡菌的天然耐藥,并且RNaseⅢ可以影響其水平。以上研究將為抗金葡菌感染研究提供可能的藥物靶點(diǎn)以及新的理論基礎(chǔ)。本文圖87幅,表2個(gè),參考文獻(xiàn)61篇。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 亞油酸 TRAP FadD 天然耐藥 VraX RNaseⅢ
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：Q51;R378.11
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-12
• 1 前言12-20
• 2 TRAP蛋白參與長鏈不飽和脂肪酸殺傷金黃色葡萄球菌的機(jī)制研究20-56
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-55
• 2.4 討論55-56
• 3 假定蛋白VraX參與金黃色葡萄球菌天然耐藥的機(jī)制研究56-74
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料56
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法56-61
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-73
• 3.4 討論73-74
• 4 結(jié)論74-76
• 參考文獻(xiàn)76-82
• 攻讀學(xué)位期間主要研究成果目錄82-84
• 致謝84-86
• 個(gè)人簡歷86

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 呂星;郭文學(xué);王淑香;宋詩鐸;;天津市某醫(yī)院2002-2003年臨床分離金黃色葡萄球菌耐藥譜及MRSA流行趨勢分析[J];中國感染控制雜志;2006年02期

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本文編號：1010251