本文關(guān)鍵詞：近交系五指山小型豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及生物特性

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【摘要】：目的:建立近交系五指山小型豬(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)體外分離培養(yǎng)和鑒定方法,比較我國不同種系豬來源BM-MSCs的生物學(xué)特性,為下一步研究BM-MSC對ILMW單側(cè)輸尿管梗阻所致腎損傷的修復(fù)機制提供細(xì)胞來源。方法:選取4月齡及10月齡健康ILMW各4頭,從距髂骨翼邊緣1 cm處穿刺,抽出骨髓約5 m L;經(jīng)密度梯度法分離單個核細(xì)胞,分別用含10%,12%和15%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的完全培養(yǎng)基于體外培養(yǎng);并取第1代、第3代、第5代、第11代細(xì)胞分別行細(xì)胞形態(tài)學(xué)、表型、分化能力、生長曲線、細(xì)胞周期等檢測。結(jié)果:分離培養(yǎng)的BM-MSCs在體外貼壁,呈成纖維樣或旋渦狀生長;原代細(xì)胞18 h出現(xiàn)貼壁,第6天進入對數(shù)增長期,約9 d后80%融合,傳代后細(xì)胞狀態(tài)未出現(xiàn)明顯異常。細(xì)胞表面抗原檢測顯示CD29,CD44,CD90表達(dá)呈陽性;CD34和CD45表達(dá)呈陰性;且各代間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。成骨誘導(dǎo)18 d后,茜素紅染色陽性;成軟骨誘導(dǎo)21 d后,阿利新藍(lán)染色陽性。細(xì)胞周期檢測顯示G0/G1的細(xì)胞百分比約為81.45%。結(jié)論:ILMW的BM-MSCs貼壁時間早,細(xì)胞增殖活躍,傳代周期短,傳代后仍能保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性,是中國大陸地區(qū)豬來源BM-MSC的最佳選擇之一。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院泌尿外科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬�？卺t(yī)院中心實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 豬 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 生物學(xué)特性 慢性腎損傷
【基金】：海南省重大科技項目(2013-SZK-01-039~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 第一作者(First author):向楊,Email:Xiangyang200611@126.com;邢健生為并列第一作者,Email:947871212@qq.comureteral obstruction.慢性腎病(chronic kidney failure,CKD)已逐漸成為影響公眾健康的社會問題,且患病率和病死率不斷升高。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-drivedme

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本文編號：1010071