本文關(guān)鍵詞：犬博卡病毒非結(jié)構(gòu)基因NP1多克隆抗體的制備與鑒定

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【摘要】：目的:制備犬博卡病毒(MVC)的非結(jié)構(gòu)基因NP1的兔多克隆抗體,并進(jìn)行特異性鑒定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC為模板,構(gòu)建NP1基因的原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-3-NP1,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21后,在異巰基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)誘導(dǎo)下,表達(dá)谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)-NP1蛋白。用親和層析純化的融合蛋白免疫大白兔,制備NP1抗血清并用ELISA法測定抗血清效價。采用Western blotting和免疫熒光法檢測NP1抗血清的特性。結(jié)果:成功構(gòu)建MVC NP1基因的原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-3-NP1,在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化后得到高純度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔獲得NP1多抗血清,ELISA法檢測效價達(dá)到1∶400 000。Western blotting法及免疫熒光檢測,所得抗血清具有較高的效價及特異性。結(jié)論:本研究利用原核表達(dá)的MVC GST-NP1融合蛋白制備的NP1抗血清效價高、特異性高,為進(jìn)一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子機(jī)制中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 犬博卡病毒 NP基因 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(81060130)
【分類號】：R392
【正文快照】： of MVC infection.呼吸道感染是威脅人類健康的重要疾病,90%以上的急性呼吸道感染由病毒引起,如流感病毒、甲型禽流感病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒等[1]。2005年9月瑞典學(xué)者Allander等[2]報道在呼吸道感染者的呼吸道分泌物中發(fā)現(xiàn)新的細(xì)小病毒,被命名為人博卡病毒(human b

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