本文關(guān)鍵詞：亞精胺誘導(dǎo)Hela細(xì)胞自噬與降低細(xì)胞活力關(guān)系的研究

  更多相關(guān)文章： 亞精胺 細(xì)胞自噬 細(xì)胞活力 活性氧自由基 Hela細(xì)胞

【摘要】：亞精胺是廣泛分布于生物體內(nèi)的一種多胺類物質(zhì),在細(xì)胞增殖、機體衰老等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用,其在誘導(dǎo)自噬方面的作用成為近年來的研究熱點。研究表明,外源性亞精胺可誘導(dǎo)細(xì)胞自噬、抑制細(xì)胞增殖,但其是否能降低癌細(xì)胞活力及其誘導(dǎo)的自噬與降低癌細(xì)胞活力之間是否具有相關(guān)性的研究還未見報道。本文旨在研究亞精胺誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬及其誘導(dǎo)的自噬對細(xì)胞活力的影響,探究亞精胺誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬與活性氧自由基(ROS)的調(diào)控關(guān)系,探討線粒體在亞精胺誘導(dǎo)的癌細(xì)胞自噬以及對細(xì)胞活力影響中的作用。 本研究以人宮頸癌Hela細(xì)胞為實驗材料,以亞精胺為處理藥物,結(jié)合自噬抑制劑三甲基腺嘌呤進(jìn)行了以下研究：用噻唑藍(lán)比色法檢測亞精胺及其誘導(dǎo)的自噬對細(xì)胞活力的影響；用透射電子顯微鏡觀察亞精胺誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)形成自噬體或自噬溶酶體的情況；用蛋白質(zhì)免疫印記技術(shù)檢測亞精胺對細(xì)胞內(nèi)自噬標(biāo)志性分子LC3蛋白表達(dá)的變化；用流式細(xì)胞術(shù)檢測亞精胺誘導(dǎo)的自噬對細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基的影響及細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化。 通過研究,得到以下實驗結(jié)果：不同濃度亞精胺(0、0.1、0.5、1.0mM)處理Hela細(xì)胞8h后均顯著抑制了Hela細(xì)胞的活力(p0.05),0.5mM亞精胺使細(xì)胞活力下降至對照組的65.45%;0.5mM亞精胺處理Hela細(xì)胞8h后,在透射電鏡下觀察到自噬體和自噬溶酶體形成,自噬標(biāo)志性蛋白LC3的表達(dá)變化(LC3-II/LC3-I)為對照組的1.83倍(p0.05)；0.5mM亞精胺與自噬抑制劑聯(lián)合處理Hela細(xì)胞8h,細(xì)胞活力顯著上升了9.75%(p0.05)；0.5mM和1.0mM亞精胺處理Hela細(xì)胞8h,細(xì)胞內(nèi)ROS含量分別顯著下降14.18%和15.36%(p0.05),亞精胺與自噬抑制劑聯(lián)合處理細(xì)胞后,ROS水平顯著升高(p0.05),但不能完全恢復(fù)：0.5mM和1.0mM亞精胺連續(xù)處理細(xì)胞8h后,線粒體膜電位均分別顯著下降至對照組的62.59%和61.90%(p0.05)。 綜上所述,本研究證明了亞精胺誘導(dǎo)Hela細(xì)胞發(fā)生的自噬性死亡為降低細(xì)胞活力的原因之一,其誘導(dǎo)自噬可調(diào)控細(xì)胞內(nèi)部分ROS,而亞精胺造成的線粒體膜電位急劇下降可能介導(dǎo)了對細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)和對細(xì)胞活力的影響。
【關(guān)鍵詞】：亞精胺 細(xì)胞自噬 細(xì)胞活力 活性氧自由基 Hela細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 前言8-18
• 1.1 亞精胺8-10
• 1.2 自噬10-15
• 1.2.1 自噬的簡介10-14
• 1.2.2 自噬與ROS14-15
• 1.3 亞精胺、自噬與腫瘤15-17
• 1.3.1 亞精胺與腫瘤細(xì)胞增殖15-16
• 1.3.2 自噬與腫瘤細(xì)胞增殖16-17
• 1.4 研究目的和意義17-18
• 第二章 實驗材料與方法18-27
• 2.1 實驗材料18-20
• 2.1.1 細(xì)胞系18
• 2.1.2 試劑與材料18-19
• 2.1.3 主要溶液配制19-20
• 2.1.4 主要實驗儀器20
• 2.2 實驗方法20-26
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)20-21
• 2.2.2 細(xì)胞活力的檢測21-22
• 2.2.3 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變的觀察22
• 2.2.4 細(xì)胞內(nèi)LC3蛋白表達(dá)變化的檢測22-24
• 2.2.5 自噬對細(xì)胞活力影響的檢測24
• 2.2.6 細(xì)胞內(nèi)ROS的檢測24-25
• 2.2.7 線粒體膜電位的檢測25-26
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析26-27
• 第三章 實驗結(jié)果27-34
• 3.1 亞精胺對Hela細(xì)胞活力的影響27
• 3.2 亞精胺對Hela細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)27-30
• 3.2.1 亞精胺誘導(dǎo)Hela細(xì)胞自噬的形態(tài)學(xué)觀察28
• 3.2.2 亞精胺誘導(dǎo)Hela自噬的標(biāo)志性蛋白的檢測28-30
• 3.3 亞精胺誘導(dǎo)Hela細(xì)胞自噬對細(xì)胞活力的影響30-31
• 3.4 亞精胺誘導(dǎo)Hela細(xì)胞自噬對ROS的影響31-32
• 3.5 亞精胺對線粒體膜電位的影響32-34
• 第四章 討論34-38
• 4.1 亞精胺誘導(dǎo)Hela細(xì)胞自噬對細(xì)胞活力的影響34-36
• 4.2 亞精胺誘導(dǎo)Hela細(xì)胞自噬對ROS的影響36
• 4.3 亞精胺對線粒體膜電位的影響36-38
• 第五章 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 在學(xué)期間的研究成果44-45
• 致謝45

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1008379