本文關鍵詞：亞精胺誘導Hela細胞自噬與降低細胞活力關系的研究

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【摘要】：亞精胺是廣泛分布于生物體內的一種多胺類物質,在細胞增殖、機體衰老等生物學過程中發(fā)揮重要作用,其在誘導自噬方面的作用成為近年來的研究熱點。研究表明,外源性亞精胺可誘導細胞自噬、抑制細胞增殖,但其是否能降低癌細胞活力及其誘導的自噬與降低癌細胞活力之間是否具有相關性的研究還未見報道。本文旨在研究亞精胺誘導癌細胞自噬及其誘導的自噬對細胞活力的影響,探究亞精胺誘導癌細胞自噬與活性氧自由基(ROS)的調控關系,探討線粒體在亞精胺誘導的癌細胞自噬以及對細胞活力影響中的作用。 本研究以人宮頸癌Hela細胞為實驗材料,以亞精胺為處理藥物,結合自噬抑制劑三甲基腺嘌呤進行了以下研究：用噻唑藍比色法檢測亞精胺及其誘導的自噬對細胞活力的影響；用透射電子顯微鏡觀察亞精胺誘導細胞內形成自噬體或自噬溶酶體的情況；用蛋白質免疫印記技術檢測亞精胺對細胞內自噬標志性分子LC3蛋白表達的變化；用流式細胞術檢測亞精胺誘導的自噬對細胞內活性氧自由基的影響及細胞內線粒體膜電位的變化。 通過研究,得到以下實驗結果：不同濃度亞精胺(0、0.1、0.5、1.0mM)處理Hela細胞8h后均顯著抑制了Hela細胞的活力(p0.05),0.5mM亞精胺使細胞活力下降至對照組的65.45%;0.5mM亞精胺處理Hela細胞8h后,在透射電鏡下觀察到自噬體和自噬溶酶體形成,自噬標志性蛋白LC3的表達變化(LC3-II/LC3-I)為對照組的1.83倍(p0.05)；0.5mM亞精胺與自噬抑制劑聯(lián)合處理Hela細胞8h,細胞活力顯著上升了9.75%(p0.05)；0.5mM和1.0mM亞精胺處理Hela細胞8h,細胞內ROS含量分別顯著下降14.18%和15.36%(p0.05),亞精胺與自噬抑制劑聯(lián)合處理細胞后,ROS水平顯著升高(p0.05),但不能完全恢復：0.5mM和1.0mM亞精胺連續(xù)處理細胞8h后,線粒體膜電位均分別顯著下降至對照組的62.59%和61.90%(p0.05)。 綜上所述,本研究證明了亞精胺誘導Hela細胞發(fā)生的自噬性死亡為降低細胞活力的原因之一,其誘導自噬可調控細胞內部分ROS,而亞精胺造成的線粒體膜電位急劇下降可能介導了對細胞自噬的誘導和對細胞活力的影響。
【關鍵詞】：亞精胺 細胞自噬 細胞活力 活性氧自由基 Hela細胞
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 前言8-18
• 1.1 亞精胺8-10
• 1.2 自噬10-15
• 1.2.1 自噬的簡介10-14
• 1.2.2 自噬與ROS14-15
• 1.3 亞精胺、自噬與腫瘤15-17
• 1.3.1 亞精胺與腫瘤細胞增殖15-16
• 1.3.2 自噬與腫瘤細胞增殖16-17
• 1.4 研究目的和意義17-18
• 第二章 實驗材料與方法18-27
• 2.1 實驗材料18-20
• 2.1.1 細胞系18
• 2.1.2 試劑與材料18-19
• 2.1.3 主要溶液配制19-20
• 2.1.4 主要實驗儀器20
• 2.2 實驗方法20-26
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)20-21
• 2.2.2 細胞活力的檢測21-22
• 2.2.3 細胞超微結構改變的觀察22
• 2.2.4 細胞內LC3蛋白表達變化的檢測22-24
• 2.2.5 自噬對細胞活力影響的檢測24
• 2.2.6 細胞內ROS的檢測24-25
• 2.2.7 線粒體膜電位的檢測25-26
• 2.3 統(tǒng)計學分析26-27
• 第三章 實驗結果27-34
• 3.1 亞精胺對Hela細胞活力的影響27
• 3.2 亞精胺對Hela細胞自噬的誘導27-30
• 3.2.1 亞精胺誘導Hela細胞自噬的形態(tài)學觀察28
• 3.2.2 亞精胺誘導Hela自噬的標志性蛋白的檢測28-30
• 3.3 亞精胺誘導Hela細胞自噬對細胞活力的影響30-31
• 3.4 亞精胺誘導Hela細胞自噬對ROS的影響31-32
• 3.5 亞精胺對線粒體膜電位的影響32-34
• 第四章 討論34-38
• 4.1 亞精胺誘導Hela細胞自噬對細胞活力的影響34-36
• 4.2 亞精胺誘導Hela細胞自噬對ROS的影響36
• 4.3 亞精胺對線粒體膜電位的影響36-38
• 第五章 結論38-39
• 參考文獻39-44
• 在學期間的研究成果44-45
• 致謝45

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 楊筱珍,陳耀星,佘銳萍,王子旭;多胺與細胞凋亡[J];動物醫(yī)學進展;2004年02期

2 王海杰;譚玉珍;;細胞自噬研究技術進展及其應用[J];中國細胞生物學學報;2011年07期

3 易同寅,董惠芬,蔣明森,明珍平,鐘沁萍;亞精胺對日本血吸蟲成蟲培養(yǎng)細胞SDH的影響[J];中國寄生蟲病防治雜志;2005年05期

中國博士學位論文全文數據庫 前2條

1 王建紅;多胺綴合物的合成及抗腫瘤活性研究[D];河南大學;2008年

2 張文雅;三氧化二砷（As_2O_3）對小鼠卵母細胞線粒體DNA的損傷機制研究[D];蘭州大學;2012年

中國碩士學位論文全文數據庫 前2條

1 易同寅;亞精胺對日本血吸蟲培養(yǎng)細胞影響的研究[D];武漢大學;2004年

2 陳景紅;ATM磷酸化PTEN介導拓撲替康誘導腫瘤細胞自噬及其分子機制[D];暨南大學;2012年

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本文編號：1008379