本文關(guān)鍵詞：NPY-PLGA緩釋微球與人脂肪來(lái)源干細(xì)胞相容性的研究

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【摘要】：目的：(1)從人大網(wǎng)膜脂肪組織中分離提取hADSCs,進(jìn)行傳代培養(yǎng)及成脂成骨化誘導(dǎo),探討其特性及作為脂肪組織工程理想種子細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)；(2)通過(guò)體外成功構(gòu)建NPY-PLGA微球緩釋系統(tǒng),檢測(cè)其釋放特性,以確定其具有緩釋性能；(3)檢測(cè)NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs毒性和凋亡的影響,分析NPY-PLGA緩釋微球的細(xì)胞相容性,初步探討其應(yīng)用于脂肪組織工程研究的可行性。 材料與方法：(1) hADSCs的體外分離培養(yǎng)及成脂成骨化鑒定。收集手術(shù)病人大網(wǎng)膜的脂肪組織,經(jīng)Ⅰ型膠原酶消化、過(guò)濾、離心、鋪皿后進(jìn)行原代培養(yǎng),觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。取第3代的hADSCs用于實(shí)驗(yàn)研究。用細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制hADSCs增殖曲線,計(jì)算處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的倍增時(shí)間。用相應(yīng)的定向誘導(dǎo)液誘導(dǎo)hADSCs向脂肪細(xì)胞及骨細(xì)胞方向分化,并用油紅O、茜素紅染色進(jìn)行鑒定。(2)體外構(gòu)建NPY-PLGA緩釋微球,并對(duì)其性能進(jìn)行檢測(cè)。體外用超聲乳化的方法制備NPY-PLGA緩釋微球,掃描電鏡觀察微球形態(tài)并測(cè)量直徑；檢測(cè)微球產(chǎn)率、載藥量及包封率；通過(guò)ELISA試劑盒檢測(cè)NPY-PLGA體外緩釋性能,檢測(cè)25d。(3)檢測(cè)NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs毒性和凋亡的影響。體外將NPY-PLGA緩釋微球的浸漬液加入hADSCs培養(yǎng)液中,用MTT法檢測(cè)其對(duì)hADSCs進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)；通過(guò)Annexin V-FITC凋亡試劑盒檢測(cè)NPY-PLGA緩釋微球影響下的hADSCs凋亡情況。 結(jié)果：(1)從手術(shù)患者大網(wǎng)膜脂肪組織中成功分離hADSCs,貼壁生長(zhǎng)的hADSCs為長(zhǎng)梭形,形態(tài)類似成纖維細(xì)胞。用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力并根據(jù)不同培養(yǎng)天數(shù)繪制hADSCs生長(zhǎng)曲線,曲線呈S形,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期hADSCs的倍增時(shí)間為45.90h。hADSCs經(jīng)成脂、成骨定向分化誘導(dǎo)液分別誘導(dǎo)2、3周后,分別用油紅O、茜素紅染色呈陽(yáng)性反應(yīng)。(2)體外成功構(gòu)建NPY-PLGA緩釋微球,微球表面光滑、球體大小均勻、形態(tài)飽滿；微球直徑(284.30±36.50)μm；微球的產(chǎn)率為(20.16±1.45)%,微球樣品包封率為(11.61±0.81)%,計(jì)算樣品的載藥量為：{(2.21±0.09)×10-3}%；通過(guò)ELISA方法檢測(cè)微球緩釋特性,25d內(nèi)微球可緩慢釋放NPY,首次釋放率為10.70%,第25d累計(jì)釋藥率為81.80%。(3)MTT法檢測(cè)NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs的毒性評(píng)價(jià)值為0級(jí)。Annexin V-FITC凋亡試劑盒檢測(cè)緩釋微球?qū)ADSCs的影響,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：(1)利用原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)成功地從人大網(wǎng)膜脂肪組織中分離提取目的細(xì)胞,經(jīng)形態(tài)學(xué)及成脂成骨化能力的鑒定證實(shí)為hADSCs。該細(xì)胞易獲取、傳代穩(wěn)定,可作為脂肪組織工程理想的種子細(xì)胞。(2)體外超聲乳化法成功構(gòu)建NPY-PLGA緩釋微球,緩釋性能良好。(3) NPY-PLGA緩釋微球與hADSCs相容性良好。
【關(guān)鍵詞】：hADSCs 緩釋微球 NPY NPY-PLGA PVA 增殖
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-11
• 本文主要的英漢縮略詞名對(duì)照表11-12
• 1 前言12-15
• 2 材料與方法15-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-19
• 2.1.1 脂肪組織來(lái)源15
• 2.1.2 主要的試劑與實(shí)驗(yàn)用品(表2-1)15-16
• 2.1.3 主要的儀器與設(shè)備(表2-2)16-18
• 2.1.4 試劑的配置18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 2.2.1 hADSCs的提取與培養(yǎng)步驟19
• 2.2.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定hADSCs的生長(zhǎng)曲線19
• 2.2.3 hADSCs成脂誘導(dǎo)并行油紅O染色19-20
• 2.2.4 hADSCs成骨誘導(dǎo)并行茜素紅染色20
• 2.2.5 NPY-PLGA緩釋微球的制備方法20
• 2.2.6 NPY-PLGA緩釋微球的產(chǎn)率、載藥量及包封率測(cè)定20
• 2.2.7 NPY-PLGA緩釋微球的體外緩釋實(shí)驗(yàn)20-21
• 2.2.8 MTT法檢測(cè)NPY-PLGA緩釋微球浸提液對(duì)hADSCs的毒性評(píng)價(jià)21
• 2.2.9 Annexin V-FITC檢測(cè)NPY-PLGA浸提液對(duì)hADSCs凋亡的影響21-22
• 2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)及畫(huà)圖處理22-23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-37
• 3.1 hADSCs的形態(tài)、增殖及成脂成骨化鑒定23-29
• 3.1.1 hADSCs的形態(tài)學(xué)觀察23-25
• 3.1.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)hADSCs的生長(zhǎng)增殖能力及繪制生長(zhǎng)曲線25-26
• 3.1.3 hADSCs成脂誘導(dǎo)分化和油紅O染色鑒定26-28
• 3.1.4 hADSCs成骨誘導(dǎo)分化和茜素紅染色鑒定28-29
• 3.2 NPY-PLGA緩釋微球的制備及性能檢測(cè)29-33
• 3.2.1 NPY-PLGA緩釋微球的制備及形態(tài)觀察29
• 3.2.2 NPY-PLGA緩釋微球的產(chǎn)率、載藥量及包封率檢測(cè)29-30
• 3.2.3 NPY-PLGA緩釋微球的累積釋放及曲線30-33
• 3.3 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs毒性及凋亡的影響33-37
• 3.3.1 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs的毒性評(píng)級(jí)33-35
• 3.3.2 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs凋亡的影響35-37
• 4 討論37-42
• 4.1 hADSCs的提取、增殖及成脂成骨化鑒定37-39
• 4.2 NPY-PLGA緩釋微球的制備及性能39-40
• 4.3 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs的毒性、凋亡影響40-42
• 5 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述48-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果59-60
• 致謝60

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 劉蘋(píng);史春夢(mèng);胡玲莉;張波;王正國(guó);;脂肪源性干細(xì)胞無(wú)酶分離培養(yǎng)方法的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年10期

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6 田義;趙螢;陳慧;杜靜;陳永進(jìn);張e，

本文編號(hào)：1006264