本文關(guān)鍵詞：NPY-PLGA緩釋微球與人脂肪來源干細胞相容性的研究

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【摘要】：目的：(1)從人大網(wǎng)膜脂肪組織中分離提取hADSCs,進行傳代培養(yǎng)及成脂成骨化誘導,探討其特性及作為脂肪組織工程理想種子細胞的優(yōu)勢；(2)通過體外成功構(gòu)建NPY-PLGA微球緩釋系統(tǒng),檢測其釋放特性,以確定其具有緩釋性能；(3)檢測NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs毒性和凋亡的影響,分析NPY-PLGA緩釋微球的細胞相容性,初步探討其應(yīng)用于脂肪組織工程研究的可行性。 材料與方法：(1) hADSCs的體外分離培養(yǎng)及成脂成骨化鑒定。收集手術(shù)病人大網(wǎng)膜的脂肪組織,經(jīng)Ⅰ型膠原酶消化、過濾、離心、鋪皿后進行原代培養(yǎng),觀察細胞生長狀態(tài)。取第3代的hADSCs用于實驗研究。用細胞計數(shù)法繪制hADSCs增殖曲線,計算處于對數(shù)生長期的倍增時間。用相應(yīng)的定向誘導液誘導hADSCs向脂肪細胞及骨細胞方向分化,并用油紅O、茜素紅染色進行鑒定。(2)體外構(gòu)建NPY-PLGA緩釋微球,并對其性能進行檢測。體外用超聲乳化的方法制備NPY-PLGA緩釋微球,掃描電鏡觀察微球形態(tài)并測量直徑；檢測微球產(chǎn)率、載藥量及包封率；通過ELISA試劑盒檢測NPY-PLGA體外緩釋性能,檢測25d。(3)檢測NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs毒性和凋亡的影響。體外將NPY-PLGA緩釋微球的浸漬液加入hADSCs培養(yǎng)液中,用MTT法檢測其對hADSCs進行毒性評價；通過Annexin V-FITC凋亡試劑盒檢測NPY-PLGA緩釋微球影響下的hADSCs凋亡情況。 結(jié)果：(1)從手術(shù)患者大網(wǎng)膜脂肪組織中成功分離hADSCs,貼壁生長的hADSCs為長梭形,形態(tài)類似成纖維細胞。用細胞計數(shù)法檢測細胞生長增殖能力并根據(jù)不同培養(yǎng)天數(shù)繪制hADSCs生長曲線,曲線呈S形,對數(shù)生長期hADSCs的倍增時間為45.90h。hADSCs經(jīng)成脂、成骨定向分化誘導液分別誘導2、3周后,分別用油紅O、茜素紅染色呈陽性反應(yīng)。(2)體外成功構(gòu)建NPY-PLGA緩釋微球,微球表面光滑、球體大小均勻、形態(tài)飽滿；微球直徑(284.30±36.50)μm；微球的產(chǎn)率為(20.16±1.45)%,微球樣品包封率為(11.61±0.81)%,計算樣品的載藥量為：{(2.21±0.09)×10-3}%；通過ELISA方法檢測微球緩釋特性,25d內(nèi)微球可緩慢釋放NPY,首次釋放率為10.70%,第25d累計釋藥率為81.80%。(3)MTT法檢測NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs的毒性評價值為0級。Annexin V-FITC凋亡試劑盒檢測緩釋微球?qū)ADSCs的影響,實驗組與對照組比較,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論：(1)利用原代細胞培養(yǎng)技術(shù)成功地從人大網(wǎng)膜脂肪組織中分離提取目的細胞,經(jīng)形態(tài)學及成脂成骨化能力的鑒定證實為hADSCs。該細胞易獲取、傳代穩(wěn)定,可作為脂肪組織工程理想的種子細胞。(2)體外超聲乳化法成功構(gòu)建NPY-PLGA緩釋微球,緩釋性能良好。(3) NPY-PLGA緩釋微球與hADSCs相容性良好。
【關(guān)鍵詞】：hADSCs 緩釋微球 NPY NPY-PLGA PVA 增殖
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-11
• 本文主要的英漢縮略詞名對照表11-12
• 1 前言12-15
• 2 材料與方法15-23
• 2.1 實驗材料15-19
• 2.1.1 脂肪組織來源15
• 2.1.2 主要的試劑與實驗用品(表2-1)15-16
• 2.1.3 主要的儀器與設(shè)備(表2-2)16-18
• 2.1.4 試劑的配置18-19
• 2.2 實驗方法19-23
• 2.2.1 hADSCs的提取與培養(yǎng)步驟19
• 2.2.2 細胞計數(shù)法測定hADSCs的生長曲線19
• 2.2.3 hADSCs成脂誘導并行油紅O染色19-20
• 2.2.4 hADSCs成骨誘導并行茜素紅染色20
• 2.2.5 NPY-PLGA緩釋微球的制備方法20
• 2.2.6 NPY-PLGA緩釋微球的產(chǎn)率、載藥量及包封率測定20
• 2.2.7 NPY-PLGA緩釋微球的體外緩釋實驗20-21
• 2.2.8 MTT法檢測NPY-PLGA緩釋微球浸提液對hADSCs的毒性評價21
• 2.2.9 Annexin V-FITC檢測NPY-PLGA浸提液對hADSCs凋亡的影響21-22
• 2.2.10 統(tǒng)計學及畫圖處理22-23
• 3 實驗結(jié)果23-37
• 3.1 hADSCs的形態(tài)、增殖及成脂成骨化鑒定23-29
• 3.1.1 hADSCs的形態(tài)學觀察23-25
• 3.1.2 細胞計數(shù)法檢測hADSCs的生長增殖能力及繪制生長曲線25-26
• 3.1.3 hADSCs成脂誘導分化和油紅O染色鑒定26-28
• 3.1.4 hADSCs成骨誘導分化和茜素紅染色鑒定28-29
• 3.2 NPY-PLGA緩釋微球的制備及性能檢測29-33
• 3.2.1 NPY-PLGA緩釋微球的制備及形態(tài)觀察29
• 3.2.2 NPY-PLGA緩釋微球的產(chǎn)率、載藥量及包封率檢測29-30
• 3.2.3 NPY-PLGA緩釋微球的累積釋放及曲線30-33
• 3.3 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs毒性及凋亡的影響33-37
• 3.3.1 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs的毒性評級33-35
• 3.3.2 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs凋亡的影響35-37
• 4 討論37-42
• 4.1 hADSCs的提取、增殖及成脂成骨化鑒定37-39
• 4.2 NPY-PLGA緩釋微球的制備及性能39-40
• 4.3 NPY-PLGA緩釋微球?qū)ADSCs的毒性、凋亡影響40-42
• 5 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-48
• 綜述48-59
• 參考文獻54-59
• 攻讀碩士學位期間主要研究成果59-60
• 致謝60

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：1006264