本文關(guān)鍵詞：微鈣化動(dòng)脈粥樣硬化斑塊兔模型建立與染色方法的比較

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【摘要】：研究背景 盡管目前冠心病的診療措施取得較大的進(jìn)展,冠心病仍然是世界范圍內(nèi)發(fā)病和死亡的主要原因之一。2010年我國(guó)有近360萬(wàn)人死于心血管疾病,平均每天逾9,800人死于心血管病。急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)為冠心病急癥,其包括不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗死、心性猝死等一系列臨床病理生理狀態(tài)。易損斑塊破裂、繼發(fā)血栓形成,使血流急劇減少或者完全阻斷,是ACS的主要病理生理基礎(chǔ)。一般認(rèn)為易損斑塊的形態(tài)學(xué)特征包括：薄纖維帽(65μ m)、大脂質(zhì)核心、大量激活巨噬細(xì)胞及炎癥浸潤(rùn)。目前認(rèn)為導(dǎo)致易損斑塊破裂的原因有脂質(zhì)核心的擴(kuò)大、斑塊內(nèi)炎癥、細(xì)胞外基質(zhì)合成減少及降解增加,局部應(yīng)力增加等。雖然關(guān)于易損斑塊破裂的機(jī)制研究取得重大進(jìn)展,但易損斑塊破裂的機(jī)制尚不完全清楚,仍存在一些矛盾的地方,需進(jìn)一步識(shí)別影響斑塊穩(wěn)定性的其他因素,促使其向穩(wěn)定方向轉(zhuǎn)化,對(duì)于預(yù)防急性心血管事件的發(fā)生具有重要意義,也是臨床上目前需要急待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。 鈣化是動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)顯著特征。與之前的體積較大的鈣化不同,近期利用高分辨率的激光共聚焦顯微鏡和micro-ct發(fā)現(xiàn)一種直徑在微米水平的點(diǎn)狀鈣化,稱(chēng)為微鈣化。微鈣化在斑塊內(nèi)分布廣泛,纖維帽、脂質(zhì)核心中均可發(fā)現(xiàn)微鈣化。微鈣化對(duì)斑塊穩(wěn)定性的影響愈發(fā)受到關(guān)注。Vengrenyuk等首次利用Goodier數(shù)學(xué)模型證實(shí)薄纖維帽處(65μm)的微鈣化可使其周?chē)膽?yīng)力加倍,引起界面分離,導(dǎo)致斑塊破裂。隨后學(xué)者又利用數(shù)學(xué)模型證實(shí)微鈣化的空間位置及形態(tài)影響其對(duì)斑塊穩(wěn)定性的作用。狹長(zhǎng)形微鈣化比球形微鈣化增加的應(yīng)力更多。微鈣化能解釋某些目前解釋不清的斑塊破裂,成為新的重要的影響斑塊穩(wěn)定性的因素。但目前仍存在一些問(wèn)題,對(duì)微鈣化的研究都是基于三維模擬及數(shù)學(xué)模型分析,它的準(zhǔn)確性尚需進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。相關(guān)的微鈣化動(dòng)物模型缺乏,限制微鈣化的體內(nèi)研究。因此建立微鈣化動(dòng)脈粥樣硬化斑塊動(dòng)物模型及可識(shí)別微鈣化的病理學(xué)染色方法成為體內(nèi)驗(yàn)證、進(jìn)一步研究微鈣化的關(guān)鍵。 動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與局部的血流動(dòng)力學(xué)因素密切相關(guān)。血流與內(nèi)皮細(xì)胞表面摩擦產(chǎn)生的剪切力在內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙及動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中作用重大。低剪切力和振蕩剪切力是造成動(dòng)脈粥樣硬化病變非隨機(jī)灶性分布的主要因素。內(nèi)皮細(xì)胞膜表面的力學(xué)敏感受體識(shí)別剪切力信號(hào)并將其轉(zhuǎn)化為細(xì)胞內(nèi)的生化信號(hào),引起內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。低剪切力、振蕩剪切力作用下,內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)細(xì)胞粘附分子、活性氧產(chǎn)生增多,促進(jìn)單核細(xì)胞粘附、低密度脂蛋白氧化修飾,加速動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生。血流剪切力的變化不僅參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生,且與斑塊內(nèi)鈣化密切相關(guān)。Stefan等通過(guò)血管內(nèi)超聲及虛擬組織顯像技術(shù)分析冠狀動(dòng)脈分支處斑塊負(fù)荷及組織成份,發(fā)現(xiàn)在分支的對(duì)側(cè)壁,即一般認(rèn)為的低剪切力區(qū),斑塊負(fù)荷大且鈣化嚴(yán)重。利用符合流體力學(xué)原理的套管可實(shí)現(xiàn)同時(shí)模擬不同形式的剪切力。 目前兔腹主動(dòng)脈內(nèi)皮球囊機(jī)械性損傷加高脂飼料喂養(yǎng)是復(fù)制動(dòng)脈粥樣硬化的傳統(tǒng)模型。在該模型中,可見(jiàn)斑塊內(nèi)富含脂質(zhì)、膠原,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)亦可在該類(lèi)動(dòng)物模型中得以復(fù)制,但鈣化發(fā)生較少。為建立合適的微鈣化動(dòng)脈粥樣硬化兔模型,需對(duì)傳統(tǒng)模型加以改進(jìn)。鑒于血流剪切力對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化及鈣化的影響,本實(shí)驗(yàn)意在傳統(tǒng)模型的基礎(chǔ)上引入腹主動(dòng)脈套管縮窄術(shù),模擬不同形式的剪切力,在內(nèi)皮損傷炎癥、高脂環(huán)境、血流剪切力三重因素作用下,以期建立微鈣化動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型,使微鈣化的體內(nèi)驗(yàn)證成為可能。 茜素紅S (Alizarin red s)和馮·科薩(Von kossa)染色是組織學(xué)上常用的鈣質(zhì)染色技術(shù)。二者的原理不同,馮·科薩染色利用硝酸銀溶液與鈣鹽的磷酸根或碳酸根反應(yīng)生成相應(yīng)的磷酸銀或碳酸銀,后者可被日光或者紫外線還原為黑灰或黑色的金屬銀；茜素紅S通過(guò)結(jié)構(gòu)中的硫酸基團(tuán)及羥基基團(tuán)與鈣離子反應(yīng)形成粉紅色或紅色鈣鹽。茜素紅S染料具有熒光活性,染色結(jié)果可利用分辨率高的激光共聚焦顯微鏡觀察。利用本實(shí)驗(yàn)建立的微鈣化動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型對(duì)比茜素紅S和馮·科薩這兩種常用的鈣質(zhì)染色技術(shù)用于微鈣化染色的可行性和異同點(diǎn),為日后進(jìn)一步研究微鈣化提供技術(shù)支持。 研究?jī)?nèi)容 (1)建立微鈣化動(dòng)脈粥樣硬化斑塊兔模型 (2)比較茜素紅s和馮·科薩染色用于微鈣化染色的可行性和異同點(diǎn) 研究方法 30只雄性新西蘭兔,在高脂飼料喂養(yǎng)和腹主動(dòng)脈內(nèi)皮球囊損傷基礎(chǔ)上,隨機(jī)分為套管組(給予腹主動(dòng)脈雙楔形套管縮窄)和非套管組,每組各15只,喂養(yǎng)12周。應(yīng)用體表超聲檢查兩組術(shù)前及術(shù)后12周腹主動(dòng)脈的平均血流速度、舒張末期內(nèi)徑,同時(shí)檢測(cè)血液粘滯度,計(jì)算術(shù)前及術(shù)后12周的血流剪切力。安樂(lè)死動(dòng)物后,取兩組相對(duì)應(yīng)的腹主動(dòng)脈為組織標(biāo)本,制成石蠟、冰凍切片。通過(guò)常規(guī)的病理學(xué)染色及免疫組織化學(xué)測(cè)定斑塊內(nèi)脂質(zhì)、膠原、平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的含量。對(duì)連續(xù)的石蠟切片分別進(jìn)行茜素紅S和馮·科薩染色,染色結(jié)果在普通光學(xué)顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡下觀察。 研究結(jié)果 (1)套管組和非套管組均形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。 (2)套管組微鈣化發(fā)生率和鈣化面積高于非套管組(P0.05)。 (3)茜素紅s和馮·科薩染色識(shí)別微鈣化的敏感性相同,前者具有熒光活性的優(yōu)勢(shì),但對(duì)于微鈣化的定位準(zhǔn)確性遜于后者。 結(jié)論 (1)在腹主動(dòng)脈內(nèi)皮球囊損傷加高脂飼料喂養(yǎng)的傳統(tǒng)模型基礎(chǔ)上引入腹主動(dòng)脈套管縮窄,成功建立了微鈣化動(dòng)脈粥樣硬化斑塊兔模型。 (2)茜素紅s和馮·科薩染色均能較好的識(shí)別微鈣化。
【關(guān)鍵詞】：微鈣化 動(dòng)脈粥樣硬化 茜素紅S染色 馮·科薩染色 動(dòng)物模型
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-14
• 前言14-16
• 1 資料與方法16-24
• 2 結(jié)果24-26
• 3 討論26-32
• 4 結(jié)論32-33
• 5 附表附圖33-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述43-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 讀研期間發(fā)表的論文54-55
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 仲琳,張運(yùn),張梅,季嘵平,陳文強(qiáng),姚桂華,丁士芳,張鵬飛;兔動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊模型的建立[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年04期

2 張美玲;王茁伉;彭成;;動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];四川動(dòng)物;2009年05期

3 何學(xué)令;尹海林;;動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型研究的現(xiàn)狀及存在的問(wèn)題[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;2006年04期

4 隋世燕;呂則剛;;實(shí)驗(yàn)兔動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜禽種業(yè);2009年04期

5 戴毅,顧玲,步宏;激光掃描共聚焦顯微鏡在缺血性心臟病研究中的應(yīng)用[J];中國(guó)病理生理雜志;2001年10期

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本文編號(hào)：1003283