本文關(guān)鍵詞：P120ctn在沖擊流場引發(fā)血管內(nèi)皮損傷中的作用

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【摘要】：目的:顱內(nèi)動脈瘤的形成機制目前仍不清楚。我們前期研究發(fā)現(xiàn)表明血流動力學改變所致的血管內(nèi)皮損傷所致的血管壁重構(gòu)是顱內(nèi)動脈瘤形成的主要病理生理環(huán)節(jié),且在動脈瘤的形成過程中VE-cadherin與P120 catenin(P120ctn)在血管內(nèi)膜的表達進行性下降。本課題通過體外培養(yǎng)的細胞在沖擊流場作用下,檢測血流動力學因素對P120 ctn及相關(guān)蛋白表達的影響,探討血流動力學因素參與顱內(nèi)動脈瘤形成的可能。方法:自行設(shè)計的T型流室系統(tǒng)可模擬血管分叉處的血流環(huán)境,并通過提供不同流速的沖擊流體,在流室內(nèi)創(chuàng)造不同條件的血流動力學環(huán)境。體外培養(yǎng)人類臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)及運用Si RNA干擾技術(shù)敲除P120ctn基因片段后的HUVEC。將細胞種植在22×50mm的載玻片上,待細胞匯合度達到85-95%后將載玻片置入流室,在250ml/min和500ml/min的流速作用下,觀察3小時、6小時和12小時處理后,HUVEC細胞形態(tài)、生長方式,及P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso、MMP-2、α-catenin和β-catenin的表達情況。結(jié)果:正常HUVEC在沖擊流作用12小時后仍可維持正常貼壁生長。加載250ml/min的流速,作用12小時后沖擊點及其周圍的細胞仍維持著多邊形,細胞分布未見明顯改變。加載流速500ml/min,6小時后沖擊點及其周圍的細胞仍維持著多邊形,細胞分布未見明顯改變。12小時后,可見沖擊點處的細胞過度融合,細胞間隙變窄。高切應(yīng)力(WSS)和高切應(yīng)力梯度(WSSG)區(qū)的細胞密度下降且形態(tài)被拉長,部分細胞向下游遷徙,排列與沖擊流方向平行一致。兩種流速加載12小時后,P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso和α-catenin表達下降,β-catenin表達未見明顯變化,MMP-2表達升高;其中P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2的變化具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。P120ctn敲除后的HUVEC在流室內(nèi)生長時間短于正常HUVEC。加載250ml/min的流速,1小時以內(nèi)沖擊點及其周圍的細胞仍維持著多邊形,但高WSS及高WSSG區(qū)域部分細胞開始向下游移動并聚集,細胞排列方式部分隨流體方向排列。加載500ml/min時,30分鐘以內(nèi)沖擊點及其周圍的細胞仍維持著多邊形,細胞分布未見明顯改變。1小時后,可見高切應(yīng)力(WSS)和高切應(yīng)力梯度(WSSG)區(qū)的細胞密度明顯下降且形態(tài)被拉長,大量細胞向下游遷徙并集聚,排列與沖擊流方向平行一致。加載兩種流速作用1小時后,VE-Cadherin、Kaiso、α-catenin表達下降,β-catenin表達無明顯變化,MMP-2表達升高;其中VE-Cadherin、Kaiso以及MMP-2的表達改變具有統(tǒng)計學意義(P0.01)�？詹《緦φ战M在加載250ml/min和500ml/min后,細胞形態(tài)和生長方式與正常對照組相比未見明顯改變,P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso、α-catenin,β-catenin和MMP-2的表達也未見明顯改變(P0.05)。結(jié)論:血管內(nèi)皮損傷多發(fā)生于高WSS及高WSSG的區(qū)域。血流動力學的改變可以引起血管內(nèi)皮細胞在形態(tài)、生長方式及相關(guān)蛋白表達的改變,進而導致血管內(nèi)皮細胞間黏附連接穩(wěn)定性的下降及相關(guān)致炎因子的表達改變。P120ctn敲除導致血管內(nèi)皮細胞黏附連接穩(wěn)定性的進一步降低。
【關(guān)鍵詞】：顱內(nèi)動脈瘤 血流動力學 血管內(nèi)皮細胞 P120ctn 血管壁切應(yīng)力 血管壁切應(yīng)力變化梯度
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R743
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-25
• 2.1 研究對象及細胞株12
• 2.2 慢病毒載體12
• 2.3 主要儀器12-13
• 2.4 主要試劑13-14
• 2.4.1 細胞培養(yǎng)主要試劑13
• 2.4.2 Western Blot實驗主要試劑13-14
• 2.5 主要試劑的配制14-17
• 2.5.1 沖擊流體的配置14
• 2.5.2 細胞培養(yǎng)主要試劑配制14-15
• 2.5.3 Western Blot實驗主要試劑配制15-17
• 2.6 實驗方法17-24
• 2.6.1 細胞培養(yǎng)17-18
• 2.6.2 慢病毒細胞轉(zhuǎn)染18-19
• 2.6.3 蛋白印記19-21
• 2.6.4 沖擊流場的加載21-24
• 2.7 統(tǒng)計學分析24-25
• 第3章 結(jié)果25-41
• 3.1 流室內(nèi)參數(shù)模擬25-27
• 3.2 慢病毒轉(zhuǎn)染情況27-28
• 3.3 沖擊流場作用下，，HUVEC形態(tài)學及生長方式的改變28-34
• 3.3.1 正常HUVEC28-31
• 3.3.2 P120ctn敲除的HUVEC31-34
• 3.4 沖擊流場作用下，P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso等相關(guān)蛋白的表達34-41
• 3.4.1 正常 HUVEC34-37
• 3.4.2 P120ctn敲除HUVEC37-41
• 第4章 討論41-47
• 4.1 血管內(nèi)皮細胞形態(tài)與功能的改變引發(fā)血管內(nèi)皮損傷的機制41-42
• 4.2 P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2 表達改變引發(fā)血管內(nèi)皮損傷的可能機制42-44
• 4.3 血流動力學的改變引發(fā)血管內(nèi)皮細胞損傷的可能機制44-46
• 4.4 本實驗結(jié)果的意義46-47
• 第5章 結(jié)論與展望47-49
• 5.1 結(jié)論47
• 5.2 展望47-49
• 致謝49-50
• 參考文獻50-53
• 攻讀學位期間的研究成果53-54
• 綜述54-63
• 參考文獻61-63

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本文編號：935346