本文關(guān)鍵詞：P120ctn在沖擊流場(chǎng)引發(fā)血管內(nèi)皮損傷中的作用

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【摘要】：目的:顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的形成機(jī)制目前仍不清楚。我們前期研究發(fā)現(xiàn)表明血流動(dòng)力學(xué)改變所致的血管內(nèi)皮損傷所致的血管壁重構(gòu)是顱內(nèi)動(dòng)脈瘤形成的主要病理生理環(huán)節(jié),且在動(dòng)脈瘤的形成過(guò)程中VE-cadherin與P120 catenin(P120ctn)在血管內(nèi)膜的表達(dá)進(jìn)行性下降。本課題通過(guò)體外培養(yǎng)的細(xì)胞在沖擊流場(chǎng)作用下,檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)因素對(duì)P120 ctn及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,探討血流動(dòng)力學(xué)因素參與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤形成的可能。方法:自行設(shè)計(jì)的T型流室系統(tǒng)可模擬血管分叉處的血流環(huán)境,并通過(guò)提供不同流速的沖擊流體,在流室內(nèi)創(chuàng)造不同條件的血流動(dòng)力學(xué)環(huán)境。體外培養(yǎng)人類臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)及運(yùn)用Si RNA干擾技術(shù)敲除P120ctn基因片段后的HUVEC。將細(xì)胞種植在22×50mm的載玻片上,待細(xì)胞匯合度達(dá)到85-95%后將載玻片置入流室,在250ml/min和500ml/min的流速作用下,觀察3小時(shí)、6小時(shí)和12小時(shí)處理后,HUVEC細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)方式,及P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso、MMP-2、α-catenin和β-catenin的表達(dá)情況。結(jié)果:正常HUVEC在沖擊流作用12小時(shí)后仍可維持正常貼壁生長(zhǎng)。加載250ml/min的流速,作用12小時(shí)后沖擊點(diǎn)及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形,細(xì)胞分布未見(jiàn)明顯改變。加載流速500ml/min,6小時(shí)后沖擊點(diǎn)及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形,細(xì)胞分布未見(jiàn)明顯改變。12小時(shí)后,可見(jiàn)沖擊點(diǎn)處的細(xì)胞過(guò)度融合,細(xì)胞間隙變窄。高切應(yīng)力(WSS)和高切應(yīng)力梯度(WSSG)區(qū)的細(xì)胞密度下降且形態(tài)被拉長(zhǎng),部分細(xì)胞向下游遷徙,排列與沖擊流方向平行一致。兩種流速加載12小時(shí)后,P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso和α-catenin表達(dá)下降,β-catenin表達(dá)未見(jiàn)明顯變化,MMP-2表達(dá)升高;其中P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2的變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。P120ctn敲除后的HUVEC在流室內(nèi)生長(zhǎng)時(shí)間短于正常HUVEC。加載250ml/min的流速,1小時(shí)以內(nèi)沖擊點(diǎn)及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形,但高WSS及高WSSG區(qū)域部分細(xì)胞開(kāi)始向下游移動(dòng)并聚集,細(xì)胞排列方式部分隨流體方向排列。加載500ml/min時(shí),30分鐘以內(nèi)沖擊點(diǎn)及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形,細(xì)胞分布未見(jiàn)明顯改變。1小時(shí)后,可見(jiàn)高切應(yīng)力(WSS)和高切應(yīng)力梯度(WSSG)區(qū)的細(xì)胞密度明顯下降且形態(tài)被拉長(zhǎng),大量細(xì)胞向下游遷徙并集聚,排列與沖擊流方向平行一致。加載兩種流速作用1小時(shí)后,VE-Cadherin、Kaiso、α-catenin表達(dá)下降,β-catenin表達(dá)無(wú)明顯變化,MMP-2表達(dá)升高;其中VE-Cadherin、Kaiso以及MMP-2的表達(dá)改變具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。空病毒對(duì)照組在加載250ml/min和500ml/min后,細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)方式與正常對(duì)照組相比未見(jiàn)明顯改變,P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso、α-catenin,β-catenin和MMP-2的表達(dá)也未見(jiàn)明顯改變(P0.05)。結(jié)論:血管內(nèi)皮損傷多發(fā)生于高WSS及高WSSG的區(qū)域。血流動(dòng)力學(xué)的改變可以引起血管內(nèi)皮細(xì)胞在形態(tài)、生長(zhǎng)方式及相關(guān)蛋白表達(dá)的改變,進(jìn)而導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞間黏附連接穩(wěn)定性的下降及相關(guān)致炎因子的表達(dá)改變。P120ctn敲除導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附連接穩(wěn)定性的進(jìn)一步降低。
【關(guān)鍵詞】：顱內(nèi)動(dòng)脈瘤 血流動(dòng)力學(xué) 血管內(nèi)皮細(xì)胞 P120ctn 血管壁切應(yīng)力 血管壁切應(yīng)力變化梯度
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-25
• 2.1 研究對(duì)象及細(xì)胞株12
• 2.2 慢病毒載體12
• 2.3 主要儀器12-13
• 2.4 主要試劑13-14
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)主要試劑13
• 2.4.2 Western Blot實(shí)驗(yàn)主要試劑13-14
• 2.5 主要試劑的配制14-17
• 2.5.1 沖擊流體的配置14
• 2.5.2 細(xì)胞培養(yǎng)主要試劑配制14-15
• 2.5.3 Western Blot實(shí)驗(yàn)主要試劑配制15-17
• 2.6 實(shí)驗(yàn)方法17-24
• 2.6.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 2.6.2 慢病毒細(xì)胞轉(zhuǎn)染18-19
• 2.6.3 蛋白印記19-21
• 2.6.4 沖擊流場(chǎng)的加載21-24
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 第3章 結(jié)果25-41
• 3.1 流室內(nèi)參數(shù)模擬25-27
• 3.2 慢病毒轉(zhuǎn)染情況27-28
• 3.3 沖擊流場(chǎng)作用下，，HUVEC形態(tài)學(xué)及生長(zhǎng)方式的改變28-34
• 3.3.1 正常HUVEC28-31
• 3.3.2 P120ctn敲除的HUVEC31-34
• 3.4 沖擊流場(chǎng)作用下，P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso等相關(guān)蛋白的表達(dá)34-41
• 3.4.1 正常 HUVEC34-37
• 3.4.2 P120ctn敲除HUVEC37-41
• 第4章 討論41-47
• 4.1 血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)與功能的改變引發(fā)血管內(nèi)皮損傷的機(jī)制41-42
• 4.2 P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2 表達(dá)改變引發(fā)血管內(nèi)皮損傷的可能機(jī)制42-44
• 4.3 血流動(dòng)力學(xué)的改變引發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的可能機(jī)制44-46
• 4.4 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的意義46-47
• 第5章 結(jié)論與展望47-49
• 5.1 結(jié)論47
• 5.2 展望47-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果53-54
• 綜述54-63
• 參考文獻(xiàn)61-63

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