研究背景:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的致死性原發(fā)惡性腦腫瘤,約占成人腦腫瘤的60%以上。盡管針對(duì)多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者已經(jīng)采用了最新的綜合治療方案,即最大范圍安全切除腫瘤,放射治療、同步和或輔助化學(xué)治療、靶向治療等,但患者的中位生存期仍然只有8-15個(gè)月。高度侵襲性是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤一個(gè)顯著的生物學(xué)特點(diǎn),是導(dǎo)致腫瘤快速進(jìn)展和患者預(yù)后不良的重要因素。侵襲性生長(zhǎng)導(dǎo)致外科手術(shù)不能徹底切除膠質(zhì)母細(xì)胞瘤,而殘留的腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織成為術(shù)后快速?gòu)?fù)發(fā)和患者高致死率的根源,由此可見(jiàn),單純使用外科手術(shù)是無(wú)法治愈膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤高度侵襲性除了依賴腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的遷移能力和侵襲能力外,腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重塑也是重要因素之一。通常,腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌基質(zhì)金屬蛋白酶和尿激酶纖溶酶原激活物等因子來(lái)降解細(xì)胞外基質(zhì),繼而為腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲開辟前進(jìn)的道路。除此之外,腫瘤細(xì)胞通過(guò)自分泌和旁分泌方式釋放多種細(xì)胞因子和炎癥因子來(lái)改變腫瘤微環(huán)境,為腫瘤遷移和侵襲創(chuàng)造有利條件。既往研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)降壓素受體1通過(guò)激活Rho家族鳥苷三磷酸酶、粘著斑激酶、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶等多種信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄和腫瘤生長(zhǎng)。作者在前期研究中發(fā)現(xiàn),在膠質(zhì)瘤組織中神經(jīng)降壓素受體1呈顯著高表達(dá)狀態(tài),表達(dá)水平與腫瘤的病理級(jí)別呈正相關(guān)性,與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)性。在膠質(zhì)瘤中,活化的神經(jīng)降壓素受體1參與了細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和腫瘤干細(xì)胞“干性”維持等多種生物學(xué)進(jìn)程,而使用神經(jīng)降壓素受體1的特異性拮抗劑SR48692或者敲低神經(jīng)降壓素受體1均可抑制上述生物學(xué)效果。值得注意的是,作者在前期研究中還觀察到,神經(jīng)降壓素受體1似乎可以通過(guò)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路來(lái)促進(jìn)膠質(zhì)瘤的遷移和侵襲,而敲低神經(jīng)降壓素受體1或使用受體拮抗劑均可以抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲,但具體分子機(jī)制需要進(jìn)一步探究。微小RNA是一類短鏈非編碼RNA,微小RNA與相應(yīng)蛋白形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物RISC,而RISC通過(guò)與目標(biāo)基因mRNA的3端非轉(zhuǎn)錄區(qū)結(jié)合來(lái)抑制mRNA的翻譯或者降解該mRNA,并最終抑制目標(biāo)基因的表達(dá)。越來(lái)越多的研究證實(shí),微小RNA在腫瘤的進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用,并可以根據(jù)微小RNA的功能將其劃分為致癌型微小RNA和抑癌型微小RNA。前期研究證實(shí),微小RNA在膠質(zhì)瘤組織中異常表達(dá),并參與了腫瘤細(xì)胞的增殖過(guò)程。但微小RNA與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移和侵襲之間的關(guān)系還需要進(jìn)一步研究。研究目的:1.觀察神經(jīng)降壓素受體1對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移和侵襲的影響。2.闡明神經(jīng)降壓素受體1誘導(dǎo)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移和侵襲的分子機(jī)制。材料方法:使用小RNA干擾技術(shù)敲低NTSR1、Jun、SOCS6蛋白的表達(dá)。使用Jun過(guò)表達(dá)載體上調(diào)Jun蛋白的表達(dá)。免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NTSR1、Jun、SOCS6蛋白的表達(dá)水平。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U87MG和U118MG細(xì)胞的增殖活性。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U87MG和U118MG細(xì)胞的遷移能力。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U87MG和U118MG細(xì)胞的侵襲能力。ChIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子Jun與miR-494啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合情況。使用shNTSR1-U87MG和shNTSR1+miR-494-U87MG細(xì)胞構(gòu)建裸鼠原位移植瘤模型。MRI檢測(cè)原位移植瘤的生長(zhǎng)情況。HE染色觀察移植瘤模型的侵襲情況。Kaplan-Meier生存曲線檢測(cè)荷瘤裸鼠的生存時(shí)間。研究結(jié)果:1.神經(jīng)降壓素受體1促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的遷移和侵襲 敲低神經(jīng)降壓素受體1不影響膠質(zhì)母細(xì)胞瘤24小時(shí)內(nèi)的增殖活性。敲低神經(jīng)降壓素受體1顯著抑制U87MG和U118MG細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力。敲低神經(jīng)降壓素受體1可明顯抑制原位移植瘤的生長(zhǎng)和侵襲。敲低神經(jīng)降壓素受體1可顯著延長(zhǎng)荷瘤裸鼠的生存時(shí)間。2.神經(jīng)降壓素受體1調(diào)控Jun/miR-494/SOCS6信號(hào)通路 敲低神經(jīng)降壓素受體1抑制U87MG和U118MG細(xì)胞中miR-494和轉(zhuǎn)錄因子Jun的表達(dá)。ChIP實(shí)驗(yàn)顯示,在U87MG細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子Jun可以與miR-494啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合。在U87MG和U118MG細(xì)胞中敲低Jun可抑制miR-494的表達(dá),而過(guò)表達(dá)Jun可促進(jìn)miR-494的表達(dá)。微小RNA靶點(diǎn)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)提示SOCS6是miR-494潛在的作用靶點(diǎn)。熒光素酶報(bào)告基因提示,miR-494可以與SOCS6的3端非轉(zhuǎn)錄區(qū)結(jié)合。敲低神經(jīng)降壓素受體1可上調(diào)SOCS6蛋白的表達(dá),而過(guò)表達(dá)miR-494可抑制SOCS6蛋白的表達(dá)。拮抗miR-494可以恢復(fù)SOCS6蛋白的表達(dá)。敲低神經(jīng)降壓素受體1可上調(diào)原位移植瘤中SOCS6蛋白的表達(dá)。過(guò)表達(dá)miR-494可抑制原位移植瘤中SOCS6蛋白的表達(dá)。3.神經(jīng)降壓素受體1通過(guò)miR-494/SOCS6通路促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲 上調(diào)miR-494可促進(jìn)U87MG和U118MG細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力,而拮抗miR-494可以抑制U87MG和U118MG細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力。敲低SOCS6可促進(jìn)U87MG和U118MG細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力。過(guò)表達(dá)miR-494可促進(jìn)原位移植瘤的生長(zhǎng)和侵襲,過(guò)表達(dá)miR-494也可以顯著地減短荷瘤裸鼠的生存時(shí)間。研究結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)敲低神經(jīng)降壓素受體1抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力。神經(jīng)降壓素受體1具有調(diào)控Jun/miR-494/SOCS6信號(hào)通路的作用,該信號(hào)通路在神經(jīng)降壓素受體1誘導(dǎo)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移和侵襲過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。本研究結(jié)果有利于為探尋抗膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲的治療靶點(diǎn)提供初步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.4
【部分圖文】：

siNTSR1 可以顯著地敲低 U87MG 細(xì)胞系中神經(jīng)降壓素受 1 蛋白的siNTSR1 可以顯著地敲低 U118MG 細(xì)胞系中神經(jīng)降壓素受體 1 蛋白低神經(jīng)降壓素受體 1 抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的遷移能力細(xì)胞瘤細(xì)胞系 U87MG 和 U118MG 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 siNTSR1，母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的遷移能力。發(fā)現(xiàn)敲低神經(jīng)降壓素受體 1 系的遷移能力（圖 2）。

siNTSR1 可以顯著地敲低 U118MG 細(xì)胞系中神經(jīng)降壓素受體 1 蛋白低神經(jīng)降壓素受體 1 抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的遷移能力母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 U87MG 和 U118MG 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 siNTSR1，采質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的遷移能力。發(fā)現(xiàn)敲低神經(jīng)降壓素受體 1 可胞系的遷移能力（圖 2）。

-2 siNTSR1 可以顯著地敲低 U118MG 細(xì)胞系中神經(jīng)降壓素受體 1 蛋白的表 敲低神經(jīng)降壓素受體 1 抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的遷移能力質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 U87MG 和 U118MG 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 siNTSR1，采膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的遷移能力。發(fā)現(xiàn)敲低神經(jīng)降壓素受體 1 可以細(xì)胞系的遷移能力（圖 2）。
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本文編號(hào)：2888636