發(fā)布時(shí)間：2017-09-25 16:30

  本文關(guān)鍵詞：ALK5對(duì)KA癲癇大鼠TGF-β1-ALK1-p-Smad1通路的影響

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【摘要】：[目的]采用海人酸致癇SD大鼠模型,通過腹腔注射ALK5抑制劑(SB431542)干擾ALK5受體,觀察癲癇大鼠海馬組織中ALK1及其下游分子p-Smad1的mRNA及其蛋白的表達(dá),研究癲癇大鼠ALK5對(duì)ALK1受體的作用,探討可能的干預(yù)癲癇發(fā)作的新靶點(diǎn)。[方法]紅藻氨酸(kainic acid, KA)側(cè)腦室注入SD大鼠制備癲癇模型,隨機(jī)分為KA模型對(duì)照組(A組)、ALK5 Inhibitor腹腔注射3d組(B組)、ALK5 Inhibitor腹腔注射7d組(C組),另設(shè)假手術(shù)組為生理鹽水對(duì)照組(NC組),每組各10只。NC組、A組、B組分別于第3d,C組于第7d取海馬,檢測(cè)海馬組織中ALK1和p-Smad1的mRNA及其蛋白的表達(dá)。[結(jié)果](1)免疫熒光組化結(jié)果顯示：模型對(duì)照組ALK1和p-Smadl蛋白表達(dá)量較空白對(duì)照組表達(dá)增高(P0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組和7天組ALK1和p-Smadl蛋白表達(dá)量較模型對(duì)照組表達(dá)降低(P0.05)。各組的ALK1蛋白AOD值分別為：對(duì)照組(0.11±0.05),模型組對(duì)照組(0.17±0.04),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組(0.11±0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組(0.08±0.04)；各組的p-Smadl蛋白AOD值分別為：對(duì)照組(0.07±0.03),模型組對(duì)照組(0.12±0.04), ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組(0.09±0.02),ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組(0.08±0.02)。各模型組ALK1和p-Smadl蛋白表達(dá)量與對(duì)照組比較差異具有顯著性(P0.05),模型組對(duì)照組與ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組比較差異具有顯著性(P0.05),模型組對(duì)照組與ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組比較差異具有顯著性(P＜0.05), ALK5Inhibitor腹腔注射3天組與ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組比較無顯著性差異(P0.05)。(2)熒光PCR結(jié)果顯示：模型對(duì)照組ALK1和p-Smad1基因表達(dá)量較對(duì)照組表達(dá)增高(P0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組和7天組ALK1和p-Smad1基因表達(dá)量較模型對(duì)照組表達(dá)降低(P0.05)。各組的ALK1基因相對(duì)表達(dá)倍數(shù)分別為：對(duì)照組(1.00±0.00),模型組對(duì)照組(3.34±1.52),ALK5Inhibitor腹腔注射3天組(0.94±0.81),ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組(0.92±0.42)；各組的p-Smad1基因相對(duì)表達(dá)倍數(shù)分別為：對(duì)照組(1.00±0.00),模型組對(duì)照組(1.93±0.72),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組(0.98±0.13), ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組(0.95±0.06)。各組模型組與對(duì)照組比較差異具有顯著性(P0.05),模型組對(duì)照組與ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組比較差異具有顯著性(P0.05),模型組對(duì)照組與ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組比較差異具有顯著性(P0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天組與ALK5 Inhibitor腹腔注射7天組比較無顯著性差異(P0.05)。[結(jié)論](1)ALK5抑制劑腹腔注射后導(dǎo)致KA誘導(dǎo)的SD癲癇大鼠ALK1受體和p-Smad1表達(dá)下調(diào)。(2) TGF-β1—ALK5-p-Smad2/3對(duì)TGF-β1—ALK1-p-Smad1/5具有促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：癲癇 TGF-β1 ALK1 P-Smad1 ALK5抑制劑
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.1
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分：紅藻氨酸癲癇模型的建立及腹腔注射ALK5抑制劑14-17
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 1.2 主要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備14
• 1.3 主要試劑14
• 1.4 溶液的配制14-15
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 2.1 KA模型建立及給藥15-16
• 2.2 ALK5抑制劑給藥方法16-17
• 第二部分：ALK1、p-Smad1蛋白的檢測(cè)17-23
• 1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>17
• 2 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 2.1 主要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備17
• 2.2 主要試劑17
• 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組17-18
• 3.實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 3.1 心臟灌注取大鼠取腦組織18
• 3.2 大鼠腦組織石蠟塊制作及切片18-19
• 3.3 免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)19-20
• 4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20
• 5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-23
• 5.1 動(dòng)物行為學(xué)觀察20
• 5.2 免疫熒光組化結(jié)果20-23
• 第三部分：ALK1、p-Smad1基因的檢測(cè)23-30
• 1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>23
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 2.1 主要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備23
• 2.2 主要試劑23-24
• 2.3 動(dòng)物及分組24
• 3.實(shí)驗(yàn)方法24-28
• 3.1 直接斷頭取大鼠取腦組織24
• 3.2 熒光定量PCR技術(shù)24-28
• 3.2.1 海馬組織總RNA提取24-25
• 3.2.2 海馬組織總RNA純度測(cè)定25-26
• 3.2.3 海馬組織cDNA的合成26
• 3.2.4 引物合成與設(shè)計(jì)26-27
• 3.2.5 RT-PCR反應(yīng)27-28
• 4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28
• 5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 中英文對(duì)照縮寫36-38
• 綜述38-51
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 致謝51-52
• 功讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文52-53
• 附件53-57

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：918456