發(fā)布時(shí)間：2017-09-23 23:24

  本文關(guān)鍵詞：抑制縫隙連接蛋白43促進(jìn)新生大鼠腦缺血損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)

  更多相關(guān)文章： 谷氨酸 細(xì)胞凋亡 星形膠質(zhì)細(xì)胞 PI3K/Akt通路 泛素-蛋白酶體途徑

【摘要】：第一部分 Cx43模擬肽對(duì)新生大鼠腦缺血缺氧損傷的保護(hù)作用目的：1、觀察新生大鼠缺血缺氧損傷后縫隙連接蛋白43(Cx43)1周內(nèi)的含量變化；2、觀察Cx43模擬肽對(duì)新生大鼠腦缺血缺氧損傷是否具有保護(hù)作用。方法：出生7天的SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組、假手術(shù)+Gap26 (Sham+ Gap26)組、缺血缺氧(HI)組和缺血缺氧+Gap26 (HI+Gap26)組,建立新生大鼠缺血缺氧(the hypoxia/ischemia model, HI)模型,取缺血損傷側(cè)腦組織為標(biāo)本,采用Western blot法測(cè)定缺血缺氧1周內(nèi)Cx43蛋白的表達(dá)；觀察缺氧前1小時(shí)給予Gap26(不同給藥劑量)處理對(duì)新生大鼠腦梗死體積的影響以及缺血缺氧后連續(xù)給藥1周對(duì)新生大鼠遠(yuǎn)期神經(jīng)行為功能的影響。結(jié)果：1、Cx43在缺血缺氧4小時(shí)后開始增加,在8小時(shí)后明顯增加,并隨著時(shí)間的延長持續(xù)增加；在缺血缺氧后1周,Cx43含量相對(duì)于假手術(shù)組增加了18倍左右。2、與手術(shù)組相比,經(jīng)Gap26處理后大鼠的腦梗死體積明顯減小,神經(jīng)行為功能明顯增強(qiáng)。缺氧前1小時(shí)腹腔預(yù)給予Gap2625μg/kg,48小時(shí)后腦梗塞體積減小了24.56%；且該神經(jīng)保護(hù)作用具有劑量依賴性。另一Cx43模擬肽Gap27(25μg/kg)預(yù)處理,相對(duì)于手術(shù)組同樣減少腦梗塞體積26.21%左右。缺血缺氧后連續(xù)給藥1周,分別于第2、3、4周進(jìn)行前爪抓握實(shí)驗(yàn)和足錯(cuò)誤實(shí)驗(yàn),第4周進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn),給藥組大鼠的抓握能力、平衡能力以及學(xué)習(xí)記憶功能明顯優(yōu)于手術(shù)組,各項(xiàng)神經(jīng)行為學(xué)指標(biāo)具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；4周后給藥組大鼠的半腦損失量明顯低于手術(shù)組(P0.05)。結(jié)論：1、新生大鼠缺血缺氧后,腦組織Cx43含量明顯增加,并且存在時(shí)間依賴性。說明Cx43蛋白含量在新生大鼠缺血缺氧早期(24小時(shí))及晚期(24小時(shí)后)的病理生理學(xué)變化中均起到重要的作用。2、使用Gap26干預(yù)新生大鼠HI模型,大鼠的腦梗死體積明顯減小,遠(yuǎn)期神經(jīng)行為功能缺損明顯減輕。這些均提示Gap26對(duì)新生大鼠腦缺血缺氧損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用。關(guān)鍵詞：Gap26；腦缺血缺氧損傷；神經(jīng)保護(hù)第二部分Cx43模擬肽對(duì)新生大鼠腦缺血缺氧損傷的保護(hù)機(jī)制目的：1、觀察Gap26對(duì)新生大鼠缺血缺氧損傷后腦組織內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白caspase-3表達(dá)、細(xì)胞外谷氨酸含量、星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀態(tài)的影響；2、研究Gap26對(duì)新生大鼠及元代星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧損傷后Cx43的過量表達(dá)的影響以及兩者相互作用的相關(guān)分子機(jī)制。方法：1、將出生7天的SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組、假手術(shù)+Gap26 (Sham+Gap26)組、缺血缺氧(HI)組和缺血缺氧+Gap26 (HI+Gap26)組,建立HI模型,取缺血損傷側(cè)腦組織為標(biāo)本：采用Western blot法檢測(cè)Cx43.GFAP. Cleaved Caspase-3的表達(dá)；采用微透析方法提取新生大鼠活體腦組織細(xì)胞外液,利用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定腦組織及其細(xì)胞外透析液中谷氨酸的含量；采用免疫共沉淀法檢測(cè)腦組織勻漿中的Cx43與生物素(biotin)標(biāo)記的Gap26有無相互作用關(guān)系；采用免疫熒光染色法觀察各實(shí)驗(yàn)組腦組織冰凍切片星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活、Cx43的表達(dá)以及biotin-Gap26與Cx43定位關(guān)系。2、將出生2天的SD大鼠取元代星形膠質(zhì)細(xì)胞種板,隨機(jī)分為對(duì)照(Con)組、對(duì)照+Gap26(Con+Gap26)組、氧糖剝奪(OGD)組和氧糖剝奪+Gap26 (OGD+Gap26)組,制作細(xì)胞氧糖剝奪(OGD)模型,觀察缺氧前給予Gap26處理對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧損傷的影響：通過Westwen blot法檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧損傷后各實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間點(diǎn)不同處理方法下Cx43、Akt、p-Akt的表達(dá)水平；利用交聯(lián)劑BS3標(biāo)記細(xì)胞膜表面蛋白；采用免疫熒光染色法觀察細(xì)胞爬片上星形膠質(zhì)細(xì)胞biotin-Gap26與Cx43定位關(guān)系；采用MTT方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組星形膠質(zhì)細(xì)胞活力；采用免疫共沉淀法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組泛素化Cx43的含量。結(jié)果：1、Gap26明顯降低腦缺血損傷后Cx43、GFAP和Cleaved Caspase-3的過量表達(dá)(P0.05),減少缺血損傷側(cè)腦組織及其細(xì)胞外液谷氨酸的含量(P0.05)；熒光染色顯示Gap26抑制HI組星形膠質(zhì)細(xì)胞過度激活以及Cx43的過量表達(dá),Cx43與biotin-Gap26在腦組織有共定位關(guān)系；免疫共沉淀法檢測(cè)腦組織勻漿中的Cx43與biotin-Gap26有相互作用關(guān)系,而作為對(duì)照組的biotin-P5則與Cx43沒有相關(guān)性。2、Cx43與biotin-Gap26在星形膠質(zhì)細(xì)胞存在共定位關(guān)系；Gap26/Gap27明顯降低Cx43的表達(dá)(P0.05),同樣可以減少小分子Cx43在OGD損傷后的過量表達(dá),但對(duì)細(xì)胞膜表面和胞漿的Cx43具有不同的作用；Gap26顯著升高OGD損傷后p-Akt的表達(dá)以及泛素化Cx43的含量(P0.05),P13K特異性抑制劑LY294002、蛋白酶體抑制劑MG132以及溶酶體抑制劑氯喹均能在不同程度上抑制Cx43的降解以及PI3K/Akt通路的激活,降低Gap26對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用,以LY294002、MG132作用為著(P0.05)；免疫共沉淀結(jié)果顯示LY294002部分抑制了Cx43的泛素化水平。結(jié)論：1、Gap26對(duì)新生大鼠缺血缺氧損傷的神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制與抑制細(xì)胞外毒性水平的谷氨酸的釋放、抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的過度激活、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。2、Gap26主要通過泛素-蛋白酶體途徑降解缺血缺氧損傷后過度表達(dá)的Cx43,這種作用依賴于PI3K/Akt通路的激活。
【關(guān)鍵詞】：谷氨酸 細(xì)胞凋亡 星形膠質(zhì)細(xì)胞 PI3K/Akt通路 泛素-蛋白酶體途徑
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-14
• 第一部分 Cx43模擬肽對(duì)新生大鼠缺血缺氧損傷的保護(hù)作用14-20
• 材料和方法14-16
• 結(jié)果16-19
• 小結(jié)19-20
• 第二部分 Cx43模擬肽對(duì)新生大鼠缺血缺氧損傷的保護(hù)機(jī)制20-37
• 材料和方法20-28
• 結(jié)果28-36
• 小結(jié)36-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 附錄55-56
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文56-57
• 致謝57

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李雷;王永杰;陳浩;秦永剛;周煜博;趙嘉勛;郭麗;;嚴(yán)重?zé)齻麑?duì)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)的誘導(dǎo)作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年05期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號(hào)：908061