本文關(guān)鍵詞：miR-505-3p在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞中抑制可變剪接因子以調(diào)控運動神經(jīng)元存活基因可變剪接

  更多相關(guān)文章： miR--p 可變剪接因子 運動神經(jīng)元存活基因 鼠胚胎成纖維細(xì)胞

【摘要】：目的探究微小RNA 505-3p(miR-505-3p)對于運動神經(jīng)元存活基因(survival motor neuron gene,SMN)可變剪接的影響。方法利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-505-3p靶基因,構(gòu)建雙熒光素酶報告載體,在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中驗證靶基因為可變剪接因子(alternative splicing factor,ASF)基因,運用免疫印跡和免疫熒光染色驗證miR-505-3p對ASF的抑制效果,利用實時定量PCR技術(shù)檢測miR-505-3p對具有正常功能的全長SMN(SMN-FL)以及含有毒性的第7號外顯子缺失的SMN(SMN-D7)表達(dá)量的影響及ASF在其中的作用。結(jié)果 miR-505-3P直接結(jié)合ASF3'端調(diào)控區(qū)并抑制ASF mRNA及蛋白表達(dá)量,抑制ASF蛋白在細(xì)胞核中的表達(dá)和分布。過表達(dá)miR-505-3p促進(jìn)SMN-FL向SMND7的轉(zhuǎn)化,而過表達(dá)靶基因ASF或者抑制miR-505-3p促進(jìn)SMN-FL的保留。結(jié)論 ASF對SMN基因正常剪接形成SMNFL是必需的,miR-505-3p通過抑制ASF,從而干擾ASF對于SMN可變剪接的調(diào)控,導(dǎo)致正常的SMN-FL向毒性的SMN-D7轉(zhuǎn)化。
【作者單位】： 東華大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院;東華大學(xué)化學(xué)化工與生物工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： miR--p 可變剪接因子 運動神經(jīng)元存活基因 鼠胚胎成纖維細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(3131257) 上海市科委重點項目(14140900502) 東華大學(xué)研究生創(chuàng)新基金(DH-D-2014049)
【分類號】：R741
【正文快照】： 微小RNA(miRNA)是一類短小而保守的非編 碼RNA,通過靶向結(jié)合mRNA的3’非編碼區(qū)(3’UTR區(qū)),對靶基因?qū)嵭修D(zhuǎn)錄后及翻譯水平的抑制⑴。小鼠miR-505基因位于X染色體上(物理位 置:6039240360392492),其轉(zhuǎn)錄初級體(pri-505)長90bp,前體(pre_505)長56bp。miR_505_3p和miR_ 505-5P

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