發(fā)布時(shí)間：2017-06-23 16:14

  本文關(guān)鍵詞：P物質(zhì)及其NK-1受體參與大鼠外周傷害性信息傳入引起的脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：近年來,隨著對中樞神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞功能研究的深入,其在外周神經(jīng)損傷及炎癥誘發(fā)的病理性痛中的作用越來越受到重視。研究發(fā)現(xiàn),在外周神經(jīng)損傷引起的神經(jīng)病理性痛模型中或福爾馬林、角叉菜膠等引起的炎性痛模型中,均伴有脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。活化激活的小膠質(zhì)細(xì)胞通過產(chǎn)生和釋放多種促炎細(xì)胞因子如白介素-1p,腫瘤壞死因子-α等,上調(diào)表達(dá)多種活性蛋白或受體,如補(bǔ)體受體CD4、C3、CX3CR1, ATP受體P2X(4)等,直接或間接作用于痛覺傳遞神經(jīng)元,使其敏化,參與病理性痛及痛覺過敏的產(chǎn)生與維持。而給予小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活后,可顯著抑制病理性痛及痛覺過敏的產(chǎn)生。以上研究表明,小膠質(zhì)細(xì)胞的激活在病理性痛及痛覺過敏的產(chǎn)生和維持中發(fā)揮重要作用。但在這一過程中,小膠質(zhì)細(xì)胞激活的具體機(jī)制尚不完全清楚。P物質(zhì)(Substance P, SP)是脊髓內(nèi)重要的神經(jīng)激肽類遞質(zhì),被認(rèn)為是痛覺傳遞的重要信使。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為,SP主要存在于脊髓Ⅱ板層初級(jí)傳入纖維(C類纖維)末梢中。它的受體神經(jīng)激肽-1(neurokinin-1, NK-1)受體主要分布在脊髓后角Ⅰ板層神經(jīng)元的樹突和胞體上。SP通過與其NK-1受體結(jié)合發(fā)揮作用,參與脊髓傷害性信息的傳遞。但是近年來的研究發(fā)現(xiàn),除了初級(jí)傳入末梢外,人胚和鼠類的小膠質(zhì)細(xì)胞也可以釋放大量的SP。同時(shí),除了介導(dǎo)痛覺傳遞的二級(jí)神經(jīng)元胞體外,人胚和鼠類的小膠質(zhì)細(xì)胞上也表達(dá)著有功能的NK-1受體。因此,傷害性信息傳入時(shí),引起SP釋放也可能通過膠質(zhì)細(xì)胞膜上的NK-1受體參與脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。因此,本實(shí)驗(yàn)通過觀察應(yīng)用NK-1受體拮抗劑L-732,138對大鼠蜜蜂毒(bee venom, B V)炎性痛及痛過敏時(shí)脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞CD11b/c (OX-42)表達(dá)的影響,探討SP及其NK-1受體在外周傷害性信息傳入引起的脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞激活中的作用。方法：雄性Sprague-Dawley大鼠84只,體重250-280 g,隨機(jī)分為以下5組：①Sham組(n=24)：于正常大鼠右后足底皮下注射生理鹽水50μl。②蜜蜂毒組(n=24)：于大鼠右后足底皮下注射蜜蜂毒溶液(4g/L) 50μl。③蜜蜂毒+L-732,138組(n=12)：給大鼠椎管內(nèi)注射10μl NK-1受體拮抗劑L-732,138 (200 nmol),15min后于大鼠右后足底皮下注射蜜蜂毒溶液(4g/L) 50 μl。④蜜蜂毒+DMSO組(n=12)：給大鼠椎管內(nèi)注射10μl 80%DMSO(L-732,138的溶劑),15 min后于大鼠右后足底皮下注射蜜蜂毒溶液(4g/L) 50 μl。⑤Sham+L-732,138組(n=12)：給大鼠椎管內(nèi)注射10 μl NK-1受體拮抗劑L-732,138 (200 nmol),15min后于大鼠右后足底皮下注射50μ1生理鹽水。各組大鼠于足底注射生理鹽水或蜜蜂毒溶液后即刻計(jì)數(shù)1h內(nèi)自發(fā)縮足次數(shù),觀察其自發(fā)痛反應(yīng)變化；并于足底注射前1 d、注射后1 d、3d、7d測定熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值的變化；Sham組與蜜蜂毒組于足底注射后1h、1d、3d、7d取材,其余各組于足底注射后3d取材,冰凍連續(xù)切片,應(yīng)用免疫組化法觀察L5節(jié)段脊髓后角CD11b/c (OX-42)蛋白的表達(dá),以觀察脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀態(tài)。結(jié)果：1 NK-1受體拮抗劑L-732,138減輕足底注射蜜蜂毒大鼠的自發(fā)痛及痛過敏反應(yīng)1.1自發(fā)痛行為反應(yīng)足底注射生理鹽水后,大鼠不產(chǎn)生自發(fā)痛行為,而足底注射蜜蜂毒后,大鼠出現(xiàn)明顯的自發(fā)痛行為,表現(xiàn)為緊張性的舔,咬和劇烈抖動(dòng)注射足,注射足抬高,不持重或持重減輕等行為,自發(fā)痛反應(yīng)評(píng)分顯著增加(P0.05)。與蜜蜂毒組相比,椎管內(nèi)預(yù)先注射L-732,138后,大鼠的自發(fā)痛行為反應(yīng)有所減輕,自發(fā)痛反應(yīng)評(píng)分顯著降低(P0.05)；而椎管內(nèi)預(yù)先注射DMSO對注射蜜蜂毒引起的自發(fā)痛行為無顯著影響。椎管內(nèi)注射L-732,138不會(huì)引起sham組大鼠的自發(fā)痛行為。1.2熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值與注射前相比,足底注射生理鹽水(sham組)后1d、3 d和7 d,大鼠注射足的熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值無顯著變化。足底注射蜜蜂毒后,上述各時(shí)間點(diǎn)大鼠注射足的熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值均較sham顯著降低(P0.05),其中以注射后1d降低最為顯著,3 d、7d逐漸回升,表明足底注射蜜蜂毒誘發(fā)大鼠產(chǎn)生了熱和機(jī)械性痛覺過敏。椎管內(nèi)預(yù)先注射L-732,138可顯著抑制注射蜜蜂毒大鼠熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值的下降(P0.05)；而椎管內(nèi)預(yù)先注射DMSO對注射蜜蜂毒大鼠的熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值無顯著影響。椎管內(nèi)注射L-732,138對sham組大鼠的熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值無顯著影響。2 NK-1受體拮抗劑L-732,138抑制蜜蜂毒炎性痛大鼠脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活免疫組化染色結(jié)果顯示,CD11b/c (OX-42)在sham組大鼠L5節(jié)段脊髓后角有一定量的基礎(chǔ)表達(dá),免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞較少,胞體較小,突起較細(xì),散在分部于脊髓后角。大鼠足底注射蜜蜂毒1h后,脊髓后角免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞未見明顯變化；注射后1d時(shí),免疫陽性細(xì)胞數(shù)量顯著增多,胞體增大,突起變粗,免疫染色積分光密度值顯著增大(P0.05)；注射后3d時(shí),CD11b/c (OX-42)表達(dá)達(dá)到高峰；注射后7d時(shí),雖然CD11b/c(OX-42)陽性表達(dá)水平仍較高,但較3d時(shí)有所減少。以上結(jié)果表明,脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞在蜜蜂毒炎性痛模型中受到炎性刺激后1d開始激活,3d時(shí)激活達(dá)到高峰,7d時(shí)開始減弱。在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇小膠質(zhì)細(xì)胞激活最明顯的3d時(shí)間點(diǎn),觀察NK-1受體拮抗劑L-732,138對蜜蜂毒炎性痛大鼠脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),預(yù)先椎管內(nèi)給予NK-1受體拮抗劑L-732,138后,可顯著抑制蜜蜂毒引起的大鼠脊髓后角CD11b/c (OX-42)表達(dá)的上調(diào),表現(xiàn)為免疫陽性細(xì)胞數(shù)量減少,胞體縮小,突起變細(xì),免疫染色積分光密度值顯著降低(P0.05)。表明NK-1受體拮抗劑L-732,138抑制了蜜蜂毒引起的大鼠脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。結(jié)論：1大鼠足底注射蜜蜂毒可引起大鼠自發(fā)痛反應(yīng)及熱和機(jī)械性痛覺過敏,同時(shí)引起大鼠脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。2 NK-1受體拮抗劑L-732,138可顯著抑制蜜蜂毒引起的大鼠脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,同時(shí)可減輕蜜蜂毒引起的大鼠自發(fā)痛反應(yīng)及熱和機(jī)械性痛覺過敏。3上述結(jié)果提示,SP及其NK-1受體參與傷害性信息傳入所致脊髓后角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。
【關(guān)鍵詞】：蜜蜂毒 炎性痛 NK-1受體 L-732 138 小膠質(zhì)細(xì)胞 CD11b/c(OX-42) 脊髓
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述 小膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)病理性疼痛39-52
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡歷53

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