發(fā)布時(shí)間：2017-06-23 17:02

  本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、擬采用3D培養(yǎng)技術(shù)模擬體內(nèi)環(huán)境研究膠質(zhì)瘤干細(xì)胞增殖的異質(zhì)性及一些生物特性。2、在體外進(jìn)行人工合成核酸適體文庫(kù)合成,使用Cell-SELEX技術(shù)進(jìn)行篩選,以期得到可以特異性識(shí)別膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的核酸適體。方法:1、利用微孔陣列芯片技術(shù)制作出高通量微膠原蛋白陣列,然后使用固定力的按壓方式,使細(xì)胞均勻分布于陣列中,形成三維培養(yǎng)模型。三維長(zhǎng)期培養(yǎng)條件下,進(jìn)行高通量膠質(zhì)瘤干細(xì)胞單細(xì)胞異質(zhì)性分析。2、使用化學(xué)方法人工合成的隨機(jī)寡核苷酸庫(kù),以體外培養(yǎng)的的人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞誘導(dǎo)出的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞為靶細(xì)胞,以人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞為反篩細(xì)胞,利用Cell-SELEX技術(shù),進(jìn)行核酸適體篩選。結(jié)果:1、膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以高通量微膠原蛋白陣列中長(zhǎng)期存活,并且增殖,細(xì)胞活性沒(méi)有影響。2、經(jīng)過(guò)7天、30天培養(yǎng),觀察、鑒定,3D培養(yǎng)條件下可以觀察到膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞之間的增殖能力差異及各自細(xì)胞傳代過(guò)程中異質(zhì)性。3、經(jīng)過(guò)15輪循環(huán)的篩選得到了可以結(jié)合膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的核酸適體文庫(kù)4、這個(gè)核酸適體庫(kù)可以很好地與人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞結(jié)合,而不與人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251相結(jié)合。結(jié)論:1、建立了一種高通量單細(xì)胞三維培養(yǎng)平臺(tái),用于膠質(zhì)瘤干細(xì)胞細(xì)胞異質(zhì)性的分析。膠質(zhì)瘤子細(xì)胞傳代具有局限性,而膠質(zhì)瘤干細(xì)胞幾乎可以無(wú)限增殖。2、篩選得到的核酸適配體庫(kù)可以特異性的結(jié)合于靶細(xì)胞表面的靶標(biāo)蛋白分子,為適配體在尋找膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生物標(biāo)志物,以及膠質(zhì)瘤的靶向載藥、術(shù)后化療、術(shù)中導(dǎo)航等研究領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了一定的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 核酸適體 配體的指數(shù)富集系統(tǒng)進(jìn)化 3D 培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略表5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的 3D培養(yǎng)11-24
• 1.1 引言11
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料11-12
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法12-15
• 1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)12-13
• 1.3.2 SU 8 模板的制作13
• 1.3.3 μCGA的制作13-14
• 1.3.4 單細(xì)胞增殖能力異質(zhì)性分析14
• 1.3.5 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的CD133及Nestin鑒定14-15
• 1.4 結(jié)果15-21
• 1.4.1 μCGA單細(xì)胞捕獲15-16
• 1.4.2 μCGA單細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)可行性實(shí)驗(yàn)16
• 1.4.3 三維培養(yǎng)條件下的單細(xì)胞增殖能力異質(zhì)性分析16-20
• 1.4.4 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的鑒定20-21
• 1.5 討論21-23
• 1.6 小結(jié)23-24
• 第二部分、膠質(zhì)瘤干細(xì)胞核酸適體篩選及應(yīng)用24-39
• 2.1 引言24-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料26-29
• 2.2.1 試劑與儀器26-28
• 2.2.2 DNA文庫(kù)合成28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法29-32
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)29
• 2.3.2 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的核酸適體篩選29-31
• 2.3.3 檢測(cè)庫(kù)的富集情況31-32
• 2.4 結(jié)果32-36
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)32-33
• 2.4.2 瓊脂糖電泳凝膠圖33
• 2.4.3 流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)核酸適體的篩選進(jìn)程33-34
• 2.4.4 富集庫(kù)的親和力測(cè)定34-36
• 2.5 討論36-39
• 2.6 小結(jié)39
• 全文結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 綜述45-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59

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2 黃強(qiáng);膠質(zhì)瘤起源細(xì)胞探討[J];中國(guó)微侵襲神經(jīng)外科雜志;2003年08期

3 王飛,李世亭;膠質(zhì)瘤的起源細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞的關(guān)系[J];中國(guó)腫瘤;2004年04期

4 高進(jìn)喜,王守森,王如密;膠質(zhì)瘤化療進(jìn)展[J];中國(guó)微侵襲神經(jīng)外科雜志;2004年05期

5 李蘊(yùn)潛,李毅平,李才;基質(zhì)金屬蛋白酶2及其抑制物在人膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年06期

6 岳武;宋大勇;孔令秀;趙釗;孟祥喜;張旭;王殿洪;王策;;體外超聲激活血卟啉單甲醚抗C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究[J];中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志;2006年05期

7 高樹(shù)梓;高宜錄;林社裕;劉道坤;;C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移的初步研究[J];中國(guó)神經(jīng)腫瘤雜志;2006年04期

8 江濤;王忠誠(chéng);;構(gòu)建膠質(zhì)瘤綜合治療體系[J];河北醫(yī)藥;2007年01期

9 刁宏宇;張明杰;高連波;喻博;李少一;王成林;;基質(zhì)金屬蛋白酶9在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年01期

10 李振飛;張梅奎;張笑明;尹嶺;;平瘤康方劑對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[J];中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐;2007年05期

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1 楊孔賓;趙世光;劉炳學(xué);陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和凋亡影響[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

2 黃強(qiáng);;膠質(zhì)瘤生成細(xì)胞研究[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

3 潘冬生;;聯(lián)合基因誘導(dǎo)體內(nèi)抗膠質(zhì)瘤免疫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 朱永堅(jiān);張建民;劉偉國(guó);沈宏;;甲氧胺聯(lián)合β-欖香烯抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

5 謝爽;王學(xué)美;謝東澤;;鮮壁虎提取物抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和凋亡的研究[A];第九屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2002年

6 楊正欽;;姜黃素抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖＼誘導(dǎo)其凋亡的分子機(jī)制[A];第十二屆全國(guó)神經(jīng)精神藥理學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

7 張?jiān)I;楊孔賓;劉贊;葉遠(yuǎn)柱;趙世光;;組蛋白去乙�；敢种苿┰黾拥鞍酌敢种苿⿲�(duì)膠質(zhì)瘤的凋亡[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

8 石鍵;傅偉明;張宏;陳鵬;;外源性wt p53基因及對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的熱增敏效應(yīng)[A];2008年浙江省神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 周朋;劉曉謙;胡煒;;耐藥基因的表達(dá)與體外藥敏試驗(yàn)對(duì)膠質(zhì)瘤化療的指導(dǎo)意義[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

10 趙世光;韓大勇;趙洪波;滕雷;李一;;三氧化二砷緩釋片體內(nèi)對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制作用[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

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1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

2 記者 匡遠(yuǎn)深;讓膠質(zhì)瘤干細(xì)胞不再“繁殖”[N];健康報(bào);2011年

3 張獻(xiàn)懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報(bào);2007年

4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)與應(yīng)用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

5 王德江；劉藏；王貴懷；曹勇；王新生；肖新如;交流最新進(jìn)展 提高診治水平[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

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1 陳儇;氯化甲基汞抗鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2007年

2 俞磊;膠質(zhì)瘤中異檸檬酸脫氫酶基因的檢測(cè)及其對(duì)化療療效的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 范左栩;低氧微環(huán)境對(duì)體外培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

4 黃吉煒;膠質(zhì)瘤特異性4optHBS-Msi1/GFAP啟動(dòng)子的構(gòu)建評(píng)價(jià)及其在基因治療中的初步應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

5 黃偉;EZH2基因調(diào)控腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 楊柳松;不同1p雜合性缺失特征少枝膠質(zhì)瘤的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

7 楊冰;膠質(zhì)瘤相關(guān)新基因的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

8 王舒楠;內(nèi)皮祖細(xì)胞參與膠質(zhì)瘤微血管形成及功能的活體影像學(xué)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

9 劉國(guó)棟;轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的載阿霉素氧化石墨烯納米�？鼓z質(zhì)瘤實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

10 范文海;蛋白酶體抑制劑對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2012年

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1 孫珊珊;~1H-MRS在檢測(cè)膠質(zhì)瘤早期放療反應(yīng)中的應(yīng)用研究[D];山東大學(xué);2012年

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3 李宗豪;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞研究進(jìn)展[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

4 李科;苯丁酸鈉體外誘導(dǎo)大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化及凋亡的研究[D];山東大學(xué);2010年

5 徐鑫;缺氧誘導(dǎo)因子-1α與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

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9 沈云天;膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞在惡性膠質(zhì)瘤放射抗拒中作用的初步研究[D];蘇州大學(xué);2008年

10 張景澤;逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用的體外研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2009年

  本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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