神經退行性疾病（Neurodegenerative diseases）多發(fā)于老年群體,具有病情發(fā)展緩慢、發(fā)病率高、治愈率低等特點,對患者的健康生活造成較大影響,氧化應激是該類疾病的重要發(fā)病機制。核轉錄因子E2相關因子2（Nuclear factor erythroid 2 related factor2,Nrf2）是內源性抗氧化系統(tǒng)中的關鍵元件,氧化應激條件下調控機體抗氧化系統(tǒng),進而發(fā)揮對機體的保護作用。Nrf2激活劑可以增強機體抗氧化應激的能力,在多種神經退行性疾病中表現(xiàn)出良好的保護作用。本研究以已報道的178種天然抗氧化劑為研究對象,通過分子對接篩選出具有激活Nrf2活性的苯乙醇苷（Phenylpropanoid glycosides,PhGs）,并利用氧化損傷細胞和動物模型,從基因和蛋白水平深入研究其神經保護作用及作用機制,為苯乙醇苷特別是毛蕊花糖苷應用于預防帕金森疾病（Parkinson's disease,PD）的發(fā)生奠定了理論基礎。本文主要研究內容及結果如下:1.建立178種天然抗氧化劑數(shù)據(jù)庫,利用分子對接篩選Nrf2的潛在激活劑。結果表明,不同類型化合物與Keap1的親和力...

【文章頁數(shù)】：152 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 神經退行性疾病研究進展
        1.1.1 神經退行性疾病概述
        1.1.2 神經退行性疾病發(fā)病機制
        1.1.3 天然抗氧化劑與神經退行性疾病
    1.2 Nrf2-ARE信號通路在神經退行性疾病中的作用研究進展
        1.2.1 Nrf2-ARE信號通路概述
        1.2.2 Nrf2-ARE信號通路與神經退行性疾病
        1.2.3 天然抗氧化劑與Nrf2激活劑
    1.3 苯乙醇苷類化合物研究進展
        1.3.1 苯乙醇苷類化合物概述
        1.3.2 苯乙醇苷類化合物生物活性
        1.3.3 苯乙醇苷類化合物與神經退行性疾病
    1.4 天然產物抗氧化活性的常見評價方法
        1.4.1 化學分析法
        1.4.2 細胞模型
        1.4.3 動物模型
    1.5 分子對接與藥物篩選
    1.6 研究背景及主要內容
        1.6.1 研究背景和意義
        1.6.2 研究主要內容
        1.6.3 技術路線圖
第二章 基于分子對接的天然抗氧化劑對Nrf2激活作用研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 生物學軟件
        2.2.2 細胞品系
        2.2.3 試劑與耗材
        2.2.4 主要儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 天然抗氧化劑的整理與配體分子的準備
        2.3.2 天然抗氧化劑與Keap1蛋白分子對接
        2.3.3 天然抗氧化劑與Keap1親和力的3D-QSAR模型研究
        2.3.4 細胞培養(yǎng)
        2.4.5 細胞活力檢測
        2.3.6 細胞質蛋白與細胞核蛋白分離提取
        2.3.7 蛋白質定量檢測
        2.3.8 Western blot
        2.3.9 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結果與分析
        2.4.1 天然抗氧化劑與Keap1分子對接結果分析
        2.4.2 天然抗氧化劑與Keap1分子對接影響因素分析
        2.4.3 天然抗氧化劑與Keap1親和力的3D-QSAR分析
        2.4.4 天然抗氧化劑的細胞毒性分析
        2.4.5 天然抗氧化劑對Nrf2的激活能力分析
    2.5 本章小結
第三章 苯乙醇苷對氧化應激損傷細胞的保護作用研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞品系
        3.2.2 試劑與耗材
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)
        3.3.2 細胞活力測定
        3.3.3 蛋白質定量檢測
        3.3.4 細胞內SOD、GSH-Px、CAT酶活力檢測
        3.3.5 細胞內MDA含量檢測
        3.3.6 細胞內ROS水平檢測
        3.3.7 細胞凋亡率檢測
        3.3.8 DAPI染色
        3.3.9 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結果與分析
        3.4.1 苯乙醇苷的細胞毒性分析
        3.4.2 苯乙醇苷對氧化應激損傷細胞增殖率的影響
        3.4.3 苯乙醇苷對氧化應激損傷細胞抗氧化酶活性的影響
        3.4.4 苯乙醇苷對氧化應激損傷細胞ROS水平的影響
        3.4.5 苯乙醇苷對氧化應激損傷細胞MDA含量的影響
        3.4.6 苯乙醇苷對氧化應激損傷細胞凋亡率的影響
    3.5 本章小結
第四章 苯乙醇苷對氧化應激損傷細胞的保護作用機制研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細胞品系
        4.2.2 試劑與耗材
        4.2.3 主要儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細胞培養(yǎng)
        4.3.2 免疫熒光檢測
        4.3.3 蛋白質提取方法
        4.3.4 蛋白質定量檢測
        4.3.5 Western blot
        4.3.6 總RNA提取
        4.3.7 反轉錄
        4.3.8 RT-PCR
        4.3.9 抑制劑處理
        4.3.10 siRNA轉染
        4.3.11 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結果與分析
        4.4.1 苯乙醇苷對細胞內Nrf2分布的影響
        4.4.2 苯乙醇苷對細胞保護作用中Nrf2效果確證
        4.4.3 苯乙醇苷對Nrf2下游Ⅱ相解毒酶的影響
        4.4.4 苯乙醇苷對細胞保護作用中Ⅱ相解毒酶HO-1效果確證
        4.4.5 苯乙醇苷對Nrf2內源性蛋白抑制劑Keap1的影響
        4.4.6 苯乙醇苷對Nrf2-ARE信號通路激活機制分析
    4.5 本章小結
第五章 毛蕊花糖苷對6-OHDA誘導的PD斑馬魚的保護作用研究
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 實驗動物
        5.2.2 試劑與耗材
        5.2.3 主要儀器
    5.3 實驗方法
        5.3.1 斑馬魚的飼養(yǎng)
        5.3.2 配魚與魚卵收集
        5.3.3 毛蕊花糖苷最大耐受劑量篩選
        5.3.4 斑馬魚行為學檢測
        5.3.5 斑馬魚體內SOD、GSH-Px、CAT酶活力檢測
        5.3.6 斑馬魚體內MDA含量檢測
        5.3.7 酪氨酸羥化酶活性檢測
        5.3.8 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結果與分析
        5.4.1 斑馬魚對毛蕊花糖苷的耐受劑量分析
        5.4.2 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚行為學的影響
        5.4.3 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚MDA含量的影響
        5.4.4 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚抗氧化酶活性的影響
        5.4.5 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚黑質多巴胺能神經元的影響
    5.5 本章小結
第六章 毛蕊花糖苷對6-OHDA誘導的PD斑馬魚的保護作用機制研究
    6.1 引言
    6.2 實驗材料
        6.2.1 實驗動物
        6.2.2 試劑與耗材
        6.2.3 主要儀器
    6.3 實驗方法
        6.3.1 斑馬魚的飼養(yǎng)
        6.3.2 配魚與魚卵收集
        6.3.3 總RNA提取
        6.3.4 反轉錄
        6.3.5 RT-PCR
        6.3.6 斑馬魚幼魚毛蕊花糖苷暴露處理
        6.3.7 斑馬魚成魚毛蕊花糖苷腹腔注射處理
        6.3.8 UHPLC-PDA分析
        6.3.9 伊文思藍染色
        6.3.10 數(shù)據(jù)分析
    6.4 結果與分析
        6.4.1 毛蕊花糖苷對NRF2基因轉錄的影響
        6.4.2 毛蕊花糖苷對Nrf2下游Ⅱ相解毒酶基因轉錄的影響
        6.4.3 毛蕊花糖苷對PD相關基因轉錄的影響
        6.4.4 毛蕊花糖苷對血腦屏障透過性的研究
        6.4.6 毛蕊花糖苷對已受損血腦屏障的影響
    6.5 本章小結
第七章 全文總結、創(chuàng)新點及展望
    7.1 全文總結
    7.2 創(chuàng)新點
    7.3 展望
參考文獻
附錄
個人簡介
攻讀博士期間主要科研成果
攻讀博士期間獲獎情況



本文編號：4025050