神經(jīng)退行性疾�。∟eurodegenerative diseases）多發(fā)于老年群體,具有病情發(fā)展緩慢、發(fā)病率高、治愈率低等特點,對患者的健康生活造成較大影響,氧化應(yīng)激是該類疾病的重要發(fā)病機制。核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（Nuclear factor erythroid 2 related factor2,Nrf2）是內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)中的關(guān)鍵元件,氧化應(yīng)激條件下調(diào)控機體抗氧化系統(tǒng),進而發(fā)揮對機體的保護作用。Nrf2激活劑可以增強機體抗氧化應(yīng)激的能力,在多種神經(jīng)退行性疾病中表現(xiàn)出良好的保護作用。本研究以已報道的178種天然抗氧化劑為研究對象,通過分子對接篩選出具有激活Nrf2活性的苯乙醇苷（Phenylpropanoid glycosides,PhGs）,并利用氧化損傷細胞和動物模型,從基因和蛋白水平深入研究其神經(jīng)保護作用及作用機制,為苯乙醇苷特別是毛蕊花糖苷應(yīng)用于預(yù)防帕金森疾�。≒arkinson's disease,PD）的發(fā)生奠定了理論基礎(chǔ)。本文主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.建立178種天然抗氧化劑數(shù)據(jù)庫,利用分子對接篩選Nrf2的潛在激活劑。結(jié)果表明,不同類型化合物與Keap1的親和力...

【文章頁數(shù)】：152 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 神經(jīng)退行性疾病研究進展
        1.1.1 神經(jīng)退行性疾病概述
        1.1.2 神經(jīng)退行性疾病發(fā)病機制
        1.1.3 天然抗氧化劑與神經(jīng)退行性疾病
    1.2 Nrf2-ARE信號通路在神經(jīng)退行性疾病中的作用研究進展
        1.2.1 Nrf2-ARE信號通路概述
        1.2.2 Nrf2-ARE信號通路與神經(jīng)退行性疾病
        1.2.3 天然抗氧化劑與Nrf2激活劑
    1.3 苯乙醇苷類化合物研究進展
        1.3.1 苯乙醇苷類化合物概述
        1.3.2 苯乙醇苷類化合物生物活性
        1.3.3 苯乙醇苷類化合物與神經(jīng)退行性疾病
    1.4 天然產(chǎn)物抗氧化活性的常見評價方法
        1.4.1 化學(xué)分析法
        1.4.2 細胞模型
        1.4.3 動物模型
    1.5 分子對接與藥物篩選
    1.6 研究背景及主要內(nèi)容
        1.6.1 研究背景和意義
        1.6.2 研究主要內(nèi)容
        1.6.3 技術(shù)路線圖
第二章 基于分子對接的天然抗氧化劑對Nrf2激活作用研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 生物學(xué)軟件
        2.2.2 細胞品系
        2.2.3 試劑與耗材
        2.2.4 主要儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 天然抗氧化劑的整理與配體分子的準(zhǔn)備
        2.3.2 天然抗氧化劑與Keap1蛋白分子對接
        2.3.3 天然抗氧化劑與Keap1親和力的3D-QSAR模型研究
        2.3.4 細胞培養(yǎng)
        2.4.5 細胞活力檢測
        2.3.6 細胞質(zhì)蛋白與細胞核蛋白分離提取
        2.3.7 蛋白質(zhì)定量檢測
        2.3.8 Western blot
        2.3.9 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 天然抗氧化劑與Keap1分子對接結(jié)果分析
        2.4.2 天然抗氧化劑與Keap1分子對接影響因素分析
        2.4.3 天然抗氧化劑與Keap1親和力的3D-QSAR分析
        2.4.4 天然抗氧化劑的細胞毒性分析
        2.4.5 天然抗氧化劑對Nrf2的激活能力分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 苯乙醇苷對氧化應(yīng)激損傷細胞的保護作用研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞品系
        3.2.2 試劑與耗材
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)
        3.3.2 細胞活力測定
        3.3.3 蛋白質(zhì)定量檢測
        3.3.4 細胞內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT酶活力檢測
        3.3.5 細胞內(nèi)MDA含量檢測
        3.3.6 細胞內(nèi)ROS水平檢測
        3.3.7 細胞凋亡率檢測
        3.3.8 DAPI染色
        3.3.9 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 苯乙醇苷的細胞毒性分析
        3.4.2 苯乙醇苷對氧化應(yīng)激損傷細胞增殖率的影響
        3.4.3 苯乙醇苷對氧化應(yīng)激損傷細胞抗氧化酶活性的影響
        3.4.4 苯乙醇苷對氧化應(yīng)激損傷細胞ROS水平的影響
        3.4.5 苯乙醇苷對氧化應(yīng)激損傷細胞MDA含量的影響
        3.4.6 苯乙醇苷對氧化應(yīng)激損傷細胞凋亡率的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 苯乙醇苷對氧化應(yīng)激損傷細胞的保護作用機制研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細胞品系
        4.2.2 試劑與耗材
        4.2.3 主要儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細胞培養(yǎng)
        4.3.2 免疫熒光檢測
        4.3.3 蛋白質(zhì)提取方法
        4.3.4 蛋白質(zhì)定量檢測
        4.3.5 Western blot
        4.3.6 總RNA提取
        4.3.7 反轉(zhuǎn)錄
        4.3.8 RT-PCR
        4.3.9 抑制劑處理
        4.3.10 siRNA轉(zhuǎn)染
        4.3.11 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 苯乙醇苷對細胞內(nèi)Nrf2分布的影響
        4.4.2 苯乙醇苷對細胞保護作用中Nrf2效果確證
        4.4.3 苯乙醇苷對Nrf2下游Ⅱ相解毒酶的影響
        4.4.4 苯乙醇苷對細胞保護作用中Ⅱ相解毒酶HO-1效果確證
        4.4.5 苯乙醇苷對Nrf2內(nèi)源性蛋白抑制劑Keap1的影響
        4.4.6 苯乙醇苷對Nrf2-ARE信號通路激活機制分析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 毛蕊花糖苷對6-OHDA誘導(dǎo)的PD斑馬魚的保護作用研究
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 實驗動物
        5.2.2 試劑與耗材
        5.2.3 主要儀器
    5.3 實驗方法
        5.3.1 斑馬魚的飼養(yǎng)
        5.3.2 配魚與魚卵收集
        5.3.3 毛蕊花糖苷最大耐受劑量篩選
        5.3.4 斑馬魚行為學(xué)檢測
        5.3.5 斑馬魚體內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT酶活力檢測
        5.3.6 斑馬魚體內(nèi)MDA含量檢測
        5.3.7 酪氨酸羥化酶活性檢測
        5.3.8 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 斑馬魚對毛蕊花糖苷的耐受劑量分析
        5.4.2 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚行為學(xué)的影響
        5.4.3 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚MDA含量的影響
        5.4.4 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚抗氧化酶活性的影響
        5.4.5 毛蕊花糖苷對PD斑馬魚黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的影響
    5.5 本章小結(jié)
第六章 毛蕊花糖苷對6-OHDA誘導(dǎo)的PD斑馬魚的保護作用機制研究
    6.1 引言
    6.2 實驗材料
        6.2.1 實驗動物
        6.2.2 試劑與耗材
        6.2.3 主要儀器
    6.3 實驗方法
        6.3.1 斑馬魚的飼養(yǎng)
        6.3.2 配魚與魚卵收集
        6.3.3 總RNA提取
        6.3.4 反轉(zhuǎn)錄
        6.3.5 RT-PCR
        6.3.6 斑馬魚幼魚毛蕊花糖苷暴露處理
        6.3.7 斑馬魚成魚毛蕊花糖苷腹腔注射處理
        6.3.8 UHPLC-PDA分析
        6.3.9 伊文思藍染色
        6.3.10 數(shù)據(jù)分析
    6.4 結(jié)果與分析
        6.4.1 毛蕊花糖苷對NRF2基因轉(zhuǎn)錄的影響
        6.4.2 毛蕊花糖苷對Nrf2下游Ⅱ相解毒酶基因轉(zhuǎn)錄的影響
        6.4.3 毛蕊花糖苷對PD相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響
        6.4.4 毛蕊花糖苷對血腦屏障透過性的研究
        6.4.6 毛蕊花糖苷對已受損血腦屏障的影響
    6.5 本章小結(jié)
第七章 全文總結(jié)、創(chuàng)新點及展望
    7.1 全文總結(jié)
    7.2 創(chuàng)新點
    7.3 展望
參考文獻
附錄
個人簡介
攻讀博士期間主要科研成果
攻讀博士期間獲獎情況



本文編號：4025050