本文關(guān)鍵詞：線粒體ND4、ND5基因變異與顳葉癲癇的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過比較顳葉癲癇患者與正常正常組之間ND4、ND5基因變異情況的不同,探究顳葉癲癇與ND4、ND5基因變異間的相關(guān)性,探討顳葉癲癇形成機制以及尋求新的抗癲癇治療分子靶點。方法:(1)實驗分組:51例顳葉癲癇患者癲癇組,16名健康成年人為正常組。(2)對癲癇組顳葉癲癇患者及正常組成員采集病史及相關(guān)信息,并采外周靜脈血樣本,置于-80℃冰箱內(nèi)備用。(3)利用Flexi Gene DNA Kit,提取線粒體DNA;利用Bioer PCR熱循環(huán)儀對線粒體ND4、ND5基因進(jìn)行擴增;利用瓊脂糖凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測。(4)用sanger測序技術(shù)對存在的突變位點進(jìn)行檢測。結(jié)果:(1)癲癇組患者及健康對照者的年齡、性別構(gòu)成無顯著性差異。顳葉癲癇組患者具有病史長、藥物控制情況差、復(fù)發(fā)率高、受教育程度普遍較低的特點。(2)癲癇組51名顳葉癲癇患者線粒體ND4基因共發(fā)現(xiàn)119處單核苷酸堿基改變,異質(zhì)性突變13處,同質(zhì)性突變103處。線粒體ND5基因共發(fā)現(xiàn)124處單核苷酸堿基改變,其中異質(zhì)性突變9處,同質(zhì)性突變115處。(3)24名顳葉癲癇患者ND4基因存在引起氨基酸改變的單核苷酸改變,2名正常組ND4基存在引起氨基酸改變的單核苷酸改變,行卡方檢驗,P=0.013,存在統(tǒng)計學(xué)意義。27名顳葉癲癇患者ND5基因存在引起氨基酸改變的單核苷酸改變,9名對照者ND5基因存在引起氨基酸改變的單核苷酸改變,行卡方檢驗,P=0.817,無統(tǒng)計學(xué)意義。(4)ND4基因所有引起氨基酸改變突變位點在癲癇組及正常組間比較,P值均大于0.05,無統(tǒng)計學(xué)意義。(5)顳葉癲癇患者線粒體ND4基因所發(fā)現(xiàn)的20個可引起編碼氨基酸改變突變位點中,3個突變位點曾在相關(guān)疾病的研究中被報道,其余17個位點為本次實驗新發(fā)現(xiàn)突變位點;線粒體ND5基因所發(fā)現(xiàn)的24個可引起編碼氨基酸改變突變位點中,6個突變位點曾在相關(guān)疾病的研究中被報道,其余18個位點為本次實驗新發(fā)現(xiàn)突變位點。結(jié)論:(1)線粒體ND4基因變異與顳葉癲癇的易感性存在關(guān)聯(lián),但具體變異位點尚不能明確。(2)線粒體ND5基因變異與顳葉癲癇的易感性無關(guān)聯(lián)。(3)本實驗發(fā)現(xiàn)了35種未在相關(guān)疾病中報道的線粒體DNA突變位點,進(jìn)一步說明了線粒體DNA高突變率的特點,并可能成為進(jìn)一步探究線粒體ND4、ND5基因與TLE相關(guān)性的潛在位點。
【關(guān)鍵詞】：顳葉癲癇 線粒體基因 ND4 ND5
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 引言13-14
• 第2章 文獻(xiàn)綜述14-19
• 2.1 線粒體及生理功能14-15
• 2.2 線粒體基因的遺傳及突變特點15-16
• 2.3 線粒體功能障礙與TLE16-17
• 2.3.1 線粒體功能障礙與TLE的相關(guān)性16
• 2.3.2 線粒體功能障礙導(dǎo)致TLE發(fā)作的可能機制16-17
• 2.4 TLE相關(guān)的線粒體突變基因17-18
• 2.5 ND4、ND5 基因研究現(xiàn)狀18
• 2.6 展望18-19
• 第3章 實驗方法19-25
• 3.1 研究對象及分組19
• 3.1.1 癲癇組入組標(biāo)準(zhǔn)19
• 3.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)19
• 3.1.3 正常組入組標(biāo)準(zhǔn)19
• 3.2 實驗材料19-21
• 3.2.1 主要試劑19-20
• 3.2.2 主要實驗儀器20
• 3.2.3 主要溶液配制20-21
• 3.3 提取線粒體ND4、ND5 基因21-22
• 3.3.1 從 300μl的全血中分離提取DNA:21-22
• 3.3.2 DNA濃度計純度測定22
• 3.4 線粒體ND4、ND5 基因PCR擴增22-23
• 3.4.1 PCR體外擴增線粒體ND4 基因區(qū)域基因片段22
• 3.4.2 PCR體外擴增線粒體ND5 基因區(qū)域基因片段22-23
• 3.5 PCR產(chǎn)物電泳23
• 3.5.1 制膠23
• 3.5.2 上樣23
• 3.6 拍照23
• 3.7 測序23-24
• 3.8 統(tǒng)計學(xué)分析24-25
• 第4章 結(jié)果25-34
• 4.1 一般臨床資料25-26
• 4.2 基因組提取結(jié)果26
• 4.3 PCR擴增產(chǎn)物26-27
• 4.3.1 線粒體ND4 區(qū)域經(jīng)PCR擴增所得片段26
• 4.3.2 線粒體ND5 區(qū)域經(jīng)PCR擴增所得片段26-27
• 4.4 線粒體ND4 基因變異測序結(jié)果27-31
• 4.4.1 線粒體ND4 變異率的比較27-28
• 4.4.2 線粒體ND4 基因錯義突變位點變異率的比較28-30
• 4.4.3 線粒體ND4 基因部分突變位點峰圖(見圖 4~圖 6)30-31
• 4.5 線粒體ND5 基因變異測序結(jié)果31-33
• 4.5.1 線粒體ND5 基因變異率比較31
• 4.5.2 線粒體ND5 基因變異位點31-32
• 4.5.3 線粒體ND5 基因部分突變位點檢測峰圖(圖 7~圖 9)32-33
• 4.6 未被報道的引起氨基酸改變的突變位點33-34
• 第5章 討論34-38
• 第6章 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的學(xué)術(shù)成果45-46
• 致謝46

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