目的:明確mi R-448-3p對顱內動脈瘤發(fā)展的影響。方法:我們通過結扎左側腎動脈和左側頸總動脈的方法建立大鼠IA模型;qRT-PCR用于檢測mi R-448-3p表達;qRT-PCR和western blot用于檢測KLF5 m RNA和蛋白表達;qRT-PCR和ELISA法用于檢測炎癥因子水平。結果:我們發(fā)現(xiàn)IA誘導大鼠中mi R-448-3p表達下調,而KLF5表達上調。我們發(fā)現(xiàn)并鑒定出KLF5是平滑肌細胞中mi R-448-3p的直接靶點。此外,mi R-448-3p處理使得IA誘導4周后動脈瘤大小和瘤腔截面積變小。mi R-448-3p處理保護了IA誘導后的壁厚比,抑制了巨噬細胞浸潤。IAs引起KLF5表達顯著增加,被mi R-448-3p處理后表達顯著降低。我們還發(fā)現(xiàn)mi R-448-3p在脂多糖誘導的RAW 264.7巨噬細胞中具有抗炎作用。脂多糖促進KLF5、MMP2、MMP9的表達水平,但卻被mi R-448-3p所抑制。結論:研究結果表明,mi R-448-3p可以抑制IA的進展,其機制可能是通過下調KLF5的介導的炎癥反應。

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【部分圖文】：

圖1在IA大鼠模型中，KLF5表達上調，而miR-448-3p表達下調。（A)IA誘導4周后，IA誘導模型組和假手術組大鼠ACA/OA分叉的HE染色。（B,C）通過qRT-PCR分析，miR-448-3p和KLF5在IA大鼠和假手術組大鼠動脈壁中的表達。（D)Westernblot法檢測KLF5蛋白表達。*P<0.05。

我們通過結扎左腎動脈和左頸總動脈建立大鼠IA模型。與對照大鼠相比，動脈瘤大鼠模型誘導4周后大腦前動脈/嗅動脈分叉部分的HE染色顯示動脈瘤壁較薄及其破壞性嚴重（圖1A）。為了探究miR-448-3p和KLF5在IA中的作用，我們首先檢測了miR-448-3p和KLF5在IA大鼠....

圖2KLF5是miR-448-3p的直接靶點。（A)miR-448-3pKLF53′UTR野生型（Wt）或突變體（Mt）目標序列。（B）螢光素酶實驗。（C)miR-448-3p在轉染miR-448-3pmimic模擬物或陰性對照的SMCs中表達。（D,E)KLF5在轉染miR-448-3pmimic模擬物或陰性對照的SMCs中mRNA和蛋白表達。*P<0.05。

動脈瘤的發(fā)生和發(fā)展涉及復雜的病理機制，但IA的分子發(fā)病機制尚不清楚。在本研究中，我們建立了IA大鼠模型，發(fā)現(xiàn)IA大鼠動脈壁中miR-448-3p表達較對照組減少，而KLF5表達增加。我們發(fā)現(xiàn)miR-448-3p通過其對巨噬細胞的抗炎作用防止了IA的生長。KLF5被發(fā)現(xiàn)是mi....

圖3miR-448-3p治療對IA誘導有較強的預防作用。（A,B）檢測miR-448-3p和KLF5在IA組和IA+miR-448-3p組中的表達。在IA誘導后4周制備ACA/OA分叉處誘導的IA標本，并測量（C）動脈瘤大小，（D）壁厚比，（E）動脈瘤管腔面積和（F）巨噬細胞浸潤病灶的數(shù)目。*P<0.05。

圖2KLF5是miR-448-3p的直接靶點。（A)miR-448-3pKLF53′UTR野生型（Wt）或突變體（Mt）目標序列。（B）螢光素酶實驗。（C)miR-448-3p在轉染miR-448-3pmimic模擬物或陰性對照的SMCs中表達。（D,E)KLF5....

圖4miR-488-3p過表達抑制IA中巨噬細胞浸潤和活化。（A-D)qRT-PCR法檢測CD68、MCP-1、TNF-α和IL-6在IA大鼠和miR-488-3p處理IA大鼠組動脈壁中的表達。（E)ELISA法檢測炎性細胞因子MCP-1、TNF-α和IL-6水平。（F)Westernblot檢測KLF5、MMP2、MMP9蛋白在對照組、LPS組和LPS+miR-448-3p組中的表達情況。*P<0.05。

研究表明KLF5參與低氧肺動脈高壓、心肌肥厚和動脈粥樣硬化發(fā)展[18-20]。一項研究表明，在腹主動脈瘤的發(fā)展過程中，足細胞的形成和巨噬細胞的遷移需要依賴于KLF5對Myo9b/RhoA的調節(jié)[21]。然而，KLF5參與IA形成的可能作用和機制尚不清楚。在此，我們確定KLF5....

本文編號：3981134