第一部分：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞體外誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞癌變的實(shí)驗(yàn)研究 目的：將人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察膠質(zhì)瘤細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的相互作用及能否誘導(dǎo)后者發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，并鑒定其轉(zhuǎn)化后的生物學(xué)表型。 方法：取全身表達(dá)綠色熒光蛋白的C57BL/6J-NC-GFP裸小鼠，腹腔灌洗得到的巨噬細(xì)胞與轉(zhuǎn)紅色熒光基因的人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞系SU3-RFP直接及間接共培養(yǎng)，建立雙色熒光示蹤細(xì)胞共培養(yǎng)模型，觀察膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與宿主巨噬細(xì)胞相互作用，觀察巨噬細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞特性的變化，鑒定其生物學(xué)表型的改變。 結(jié)果：不論是直接及間接共培養(yǎng)，均可見(jiàn)巨噬細(xì)胞受腫瘤刺激后發(fā)生形態(tài)上的變化。其中直接共培養(yǎng)體系中，早期可見(jiàn)巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬。繼續(xù)傳代培養(yǎng)，巨噬細(xì)胞由小圓形逐漸變?yōu)殚L(zhǎng)梭形，并可連續(xù)傳代，生長(zhǎng)曲線表明此轉(zhuǎn)化的巨噬細(xì)胞具有同SU3細(xì)胞相似的生長(zhǎng)周期及生長(zhǎng)速度，具有惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞特性。 結(jié)論：體外雙色熒光細(xì)胞共培養(yǎng)模型中，人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞可誘導(dǎo)宿主巨噬細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，值得進(jìn)一步深入研究。 第二部分：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞誘導(dǎo)宿主巨噬細(xì)胞癌變的體內(nèi)研究 目的：腫瘤免疫研究表明，進(jìn)展期腫瘤組織中的巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤生長(zhǎng)起促進(jìn)作用，本文旨在探索膠質(zhì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物-GFP裸鼠A：SPF級(jí)GFP裸鼠房；C：GFP裸鼠大體觀；D：GFP裸鼠普通光成像；B：GFP裸鼠熒光成像

第一部分：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞體外誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞癌變的實(shí)驗(yàn)研究1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和器材1.細(xì)胞系及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源6～8W齡C57BL/6J-NC-GFP綠色熒光裸小鼠（圖1），體質(zhì)量13～17g，雌拘，由蘇州大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物房提供[合格證號(hào)為SYXK(蘇)2007-0035]。....

圖2毛細(xì)玻璃管

3.毛細(xì)玻璃吸管的制備取普通玻璃吸管，酒精燈下加熱后將其延長(zhǎng)，形成玻璃細(xì)絲管，注水驗(yàn)證其通暢性后高壓消毒備用（圖2）。圖2毛細(xì)玻璃管2、實(shí)驗(yàn)方法1.巨噬細(xì)胞取材將GFP裸小鼠脫臼處死，并浸入75％乙醇中3min，然后取出小鼠，仰臥于超凈臺(tái)中的無(wú)菌紗布上。用滅菌眼科鑷提....

圖3SU3和SU3-RFP細(xì)胞（相差顯微鏡所見(jiàn)，比例尺20μm）：SU3在含生長(zhǎng)因子條件培養(yǎng)，呈懸浮的球狀生長(zhǎng)（A）；在含血清條件下培養(yǎng)，呈多形性貼壁生長(zhǎng)（B）；轉(zhuǎn)染RFP基因后的SU3-RFP細(xì)胞，幾乎有100％的RFP基因轉(zhuǎn)染率在相應(yīng)條件下培養(yǎng)，具有成球（C）和貼壁（D）生長(zhǎng)的形態(tài)特征

對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SU3、SU3-ihCMC以0.25%胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度為1x1100ul接種于96孔板內(nèi),每個(gè)96孔板每種細(xì)胞設(shè)6個(gè)復(fù)孔，并設(shè)不含細(xì)，共設(shè)7個(gè)96孔板，置37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，12小時(shí)后，板，每孔加入10ul....

圖5SU3-RFP培養(yǎng)液上清刺激后巨噬細(xì)胞形態(tài)變化（標(biāo)尺=50μm）：A為SU3-RFP培養(yǎng)液上清培養(yǎng)巨噬細(xì)胞一周后的細(xì)胞形態(tài)（A1：光學(xué)顯微鏡下所見(jiàn)，A2：熒光顯微鏡下所見(jiàn)）；B為普通培養(yǎng)液培養(yǎng)巨噬細(xì)胞一周后的細(xì)胞形態(tài)（B1：光學(xué)顯微鏡下所見(jiàn)，B2：熒光顯微鏡下所見(jiàn)）

其中巨噬細(xì)胞比例約為99%以上（圖4）。A、B分別為C57BL/6J-NC-GFP鼠腹腔灌洗細(xì)胞同一視野光學(xué)顯微鏡下（標(biāo)尺=100光顯微鏡下（標(biāo)尺=100μm）所見(jiàn)，B中無(wú)綠色熒光的小圓形細(xì)胞為紅細(xì)胞，余類圓形細(xì)胞均發(fā)綠色熒光。C為灌洗細(xì)胞CD68免疫細(xì)胞化學(xué)....

本文編號(hào)：3981071