人類文明的進(jìn)步并未阻止傳染病的肆虐,進(jìn)入二十一世紀(jì),傳染病的防治仍是人類必須面對的巨大挑戰(zhàn)。對傳染病病原學(xué)的研究始終是一項具有重大意義的任務(wù)。近年來,生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展也使得傳染病病原體的檢測與鑒定技術(shù)得到飛速發(fā)展,每一項技術(shù)的革新對生命科學(xué)領(lǐng)域來說都是一次跨越。目前,眾多分子生物學(xué)方法已成功應(yīng)用于病原體檢測中,如PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)、分子雜交技術(shù)等。相對于傳統(tǒng)檢測技術(shù)而言,新一代分子生物學(xué)技術(shù)具有操作簡單、耗時短、檢測效率高等特點,但是也存在相應(yīng)的不足,如何避免這些不足并開發(fā)新技術(shù)已成為目前科研工作者的首要任務(wù)。在本研究中,我們將最初用于基因分型、突變位點檢測、耐藥位點分析等方面的多重PCR-Mass ARRAY技術(shù)應(yīng)用于傳染病病原體的高通量檢測中,以15種可引起腦炎/腦膜炎癥狀的病原體以及16種可引起病毒性出血熱的病毒為研究對象,建立腦炎/腦膜炎以及出血熱病毒的多重PCR-Mass ARRAY檢測技術(shù),實現(xiàn)此類病原體的多重、高通量、高特異性以及高靈敏度檢測,服務(wù)于流行病學(xué)調(diào)查研究以及傳染病病原體大規(guī)模篩查與鑒定。 實驗方法：針對擬檢測病原體,使用生物信息學(xué)方法對待檢病原體的基...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 引言
    1.1 腦炎/腦膜炎病原體簡介
        1.1.1 蟲媒性腦炎/腦膜炎病毒
        1.1.2 腦炎/腦膜炎細(xì)菌
    1.2 病毒性出血熱病原體簡介
        1.2.1 拉沙熱病毒(lassa fever virus.Lassa)
        1.2.2 胡寧病毒(junin virus.Junin)
        1.2.3 馬秋波病毒(machupo virus.Machupo)
        1.2.4 漢坦病毒(hanta virus.Hanta)
        1.2.5 新疆出血熱病毒(crimeancongo hemorrhagic fever virus.CCHFV)
        1.2.6 馬爾堡病毒(marburg virus.Marburg)
        1.2.7 埃博拉病毒(ebola virus.Ebola)
        1.2.8 登革病毒(dengue virus.DENV)
        1.2.9 裂谷熱病毒(rift valley fever virus.RVFV)
        1.2.10 肺綜合征出血熱病毒(sin nombre virus.SNV)
        1.2.11 黃熱病毒(yellow fever virus.YFV)
    1.3 病原體檢測技術(shù)
        1.3.1 傳統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)
        1.3.2 現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)
    1.4 多重PCR-Mass ARRAY簡介
        1.4.1 MALDI TOF MS
        1.4.2 Mass ARRAY
        1.4.3 iPLEX基因型分析法的工作原理
        1.4.4 多重PCR-Mass ARRAY的優(yōu)勢及應(yīng)用
    1.5 研究內(nèi)容與意義
2. 膜炎/腦膜炎病原體多重PCR-Mass ARRAY檢測技術(shù)的建立
    2.1 實驗材料
        2.1.1 樣本
        2.1.2 試劑
        2.1.3 設(shè)備與耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 腦膜炎病原體保守序列分析與篩選
        2.2.2 內(nèi)參基因的選擇
        2.2.3 引物的設(shè)計、配制與測試
        2.2.4 質(zhì)粒構(gòu)建及驗證
        2.2.5 病毒培養(yǎng)液的預(yù)處理
        2.2.6 臨床標(biāo)本的預(yù)處理
    2.3 多重PCR-Mass ARRAY檢測技術(shù)的建立
        2.3.1 前PCR擴(kuò)增
        2.3.2 SAP消化
        2.3.3 iPLEX延伸反應(yīng)
        2.3.4 樹脂純化
        2.3.5 質(zhì)譜檢測
    2.4 多重PCR-Mass ARRAY檢測技術(shù)的特異性與靈敏度
        2.4.1 峰圖判讀分析
        2.4.2 特異性結(jié)果分析
        2.4.3 靈敏度結(jié)果分析
        2.4.4 重復(fù)性結(jié)果分析
    2.5 病毒培養(yǎng)物的檢測步驟與結(jié)果分析
        2.5.1 純病毒標(biāo)本多重PCR-Mass ARRAY實驗標(biāo)準(zhǔn)流程
        2.5.2 純病毒標(biāo)本多重PCR-Mass ARRAY實驗結(jié)果分析
    2.6 臨床標(biāo)本檢測步驟與結(jié)果分析
        2.6.1 腦炎臨床標(biāo)本cDNA多重PCR-Mass ARRAY實驗標(biāo)準(zhǔn)流程
        2.6.2 臨床標(biāo)本多重PCR-Mass ARRAY實驗結(jié)果分析
    2.7 小結(jié)
        2.7.1 特異性
        2.7.2 靈敏度
        2.7.3 實用性
3. 出血熱病原體多重PCR-Mass ARRAY檢測技術(shù)的建立
    3.1 實驗材料
        3.1.1 出血熱病毒質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品
        3.1.2 試劑
        3.1.3 設(shè)備與耗材
    3.2 實驗方法
        3.2.1 出血熱病毒保守序列分析、篩選以及內(nèi)參基因的選擇
        3.2.2 引物設(shè)計及測試
        3.2.3 構(gòu)建重組質(zhì)粒
        3.2.4 方法特異性、靈敏度及重復(fù)性驗證
    3.3 出血熱病毒多重PCR-Mass ARRAY檢測技術(shù)的建立
        3.3.1 前PCR擴(kuò)增
        3.3.2 SAP消化
        3.3.3 iPLEX延伸反應(yīng)
        3.3.4 樹脂純化
        3.3.5 質(zhì)譜檢測
    3.4 實驗結(jié)果分析
        3.4.1 特異性結(jié)果分析
        3.4.2 出血熱病毒重組質(zhì)粒靈敏度結(jié)果分析
        3.4.3 體系重復(fù)性結(jié)果分析
    3.5 小結(jié)
        3.5.1 特異性
        3.5.2 靈敏度
        3.5.3 可重復(fù)性
4. 討論與結(jié)論
    4.1 討論
        4.1.1 病原體保守序列選擇的關(guān)鍵點
        4.1.2 引物設(shè)計的關(guān)鍵點
        4.1.3 實驗結(jié)果的判定
    4.2 結(jié)論
        4.2.1 腦炎/腦膜炎病原體多重PCR-Mass ARRAY檢測
        4.2.2 出血熱病原體多重PCR-Mass ARRAY檢測
        4.2.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間科研成果



本文編號：3956582