MicroRNAs(miRNAs)是一種非編碼的小RNA,在轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程中抑制基因表達(dá),其失調(diào)可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。我們發(fā)現(xiàn)miR-512-5p在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中低表達(dá),因此我們使用qRT-PCR和FISH檢測(cè)了miR-512-5p在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)。然后,我們使用CCK-8、平板克隆、EdU分析以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-512-5p在U87和T98細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)效果。Jagged1(JAG1)經(jīng)熒光素酶報(bào)告基因和Western blotting實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為miR-512-5p的下游靶基因。通過(guò)Western blotting、CCK-8、平板克隆、EdU等檢測(cè)以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)JAG1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的影響。在功能恢復(fù)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)JAG1過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-512-5p的作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,miR-512-5p抑制腫瘤生長(zhǎng),延長(zhǎng)裸鼠的總體生存時(shí)間,降低JAG1、CD31和Ki67蛋白水平。我們認(rèn)為miR-512-5p是膠質(zhì)瘤分子治療的新靶點(diǎn)。MiR-512-5p首先通過(guò)抑制JAG1抑制膠質(zhì)瘤的增殖,還可誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯,從而發(fā)揮腫瘤抑癌基因的重要作用。

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1(A)CCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中驗(yàn)證miR-512-5p的表達(dá)

謀澩鎪?較宰諾陀詰圖侗鸞褐柿觶╓HOII和WHOI）（圖1A）。MiR-512-5p在膠質(zhì)瘤組織中顯著低表達(dá)和非腫瘤腦組織相比。同時(shí)，高

圖2(A)qRT-PCR分析轉(zhuǎn)染miR-512-5p或miR-NC慢病毒后U87和T98細(xì)胞中miR-512-5p的表達(dá)水平

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中miR-512-5p表達(dá)水平明顯低于低級(jí)神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織（圖1B）。此外，我們選擇正常人星形膠質(zhì)細(xì)胞（NHAs）和5個(gè)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系來(lái)評(píng)估m(xù)iR-512-5p的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)miR-512-5p在U87和T98膠質(zhì)瘤細(xì)胞....

圖4(A)Westernblot分析轉(zhuǎn)染si-JAG1后U87和T98細(xì)胞中JAG1、CDK4、CDK6和CyCD1的表達(dá)情況

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖3A）。通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)，發(fā)現(xiàn)野生型的相對(duì)熒光素酶活性顯著降低，然而突變體未顯示任何顯著變化（圖3B）。我們使用Pearson檢驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了JAG1與miR-512-5p的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)JAG1表達(dá)與miR-512-5p表達(dá)呈負(fù)相....

圖5(A-C)CCK-8檢測(cè)將JAG1-cDNA或JAG1-NC轉(zhuǎn)入miR-512-5p或miR-NC慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力的改變(D-F)EdU檢測(cè)JAG1-cDNA或JAG1-NC轉(zhuǎn)染后U87和T98細(xì)胞增殖能力的改變

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們使用小干擾RNA，si-JAG1轉(zhuǎn)染U87和T98細(xì)胞，Westernblot顯示siJAG1轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中JAG1蛋白表達(dá)降低（圖4A）。我們?cè)诩?xì)胞功能實(shí)驗(yàn)上進(jìn)一步分析了JAG1在U87和T98細(xì)胞中的作用。通過(guò)CCK....

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