本文關(guān)鍵詞：母愛(ài)剝奪對(duì)缺氧缺血性腦損傷新生鼠遠(yuǎn)期行為發(fā)育的影響及海馬神經(jīng)再生研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究母愛(ài)剝奪(maternal deprivation,MD)對(duì)缺氧缺血性腦損傷(hypoxicischemic brain damage,HIBD)新生大鼠遠(yuǎn)期行為發(fā)育的影響,及其下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic pituitary adrenocortical axis,HPA軸)激素水平、海馬病理學(xué)、神經(jīng)元數(shù)目、與神經(jīng)再生相關(guān)的蛋白及其核酸表達(dá)的變化,探討早期MD對(duì)HIBD大鼠的影響及可能機(jī)制,旨在為新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房中HIBD患兒盡可能創(chuàng)造母子互動(dòng)機(jī)會(huì),以及早期干預(yù)提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。方法采用Rice法建立7日齡(postnatal day 7,P7)SD新生大鼠HIBD模型,即分離并結(jié)扎離斷右側(cè)頸總動(dòng)脈,再放入缺氧裝置中給予80 mL/L氧氮混合氣體,吸入2.5 h。造模成功后,隨機(jī)分為四組:雌性對(duì)照(control female,CF)組、雄性對(duì)照(control male,CM)組、雌性母愛(ài)剝奪(maternal deprivation female,MF)組、雄性母愛(ài)剝奪(maternal deprivation male,MM)組。另設(shè)雌性假手術(shù)(Sham female,SF)組、雄性假手術(shù)(Sham male,SM)組,其僅分離右側(cè)頸總動(dòng)脈。MD組大鼠于造模后第2 d至第14 d每天接受3 h的母子分離,出生第28 d后應(yīng)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠焦慮情緒,HE染色觀察大鼠右側(cè)腦海馬病理形態(tài)學(xué)改變,尼氏染色計(jì)數(shù)大鼠右側(cè)腦海馬存活神經(jīng)元數(shù)目,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠右側(cè)腦海馬巢蛋白(nestin)和水通道蛋白-4(AQP-4)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),RT-PCR法檢測(cè)大鼠右側(cè)腦海馬nestin和AQP-4 mRNA的表達(dá)變化,western-blot檢測(cè)大鼠右側(cè)腦海馬nestin蛋白表達(dá)變化,酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠血清中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、皮質(zhì)酮(Corticoserone,CORT)水平。結(jié)果1.morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,mf組和mm組大鼠在潛伏期和穿臺(tái)次數(shù)中成績(jī)明顯差于cf組和cm組(p0.05),cf組和cm組成績(jī)明顯差于sf組和sm組(p0.05);mf組與mm組比較,差異不明顯(p㧐0.05)。2.高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,mf組和mm組大鼠成績(jī)明顯差于cf組和cm組(p0.05),cf組和cm組成績(jī)差于sf組和sm組(p0.05);cf組好于cm組(p0.05),mf組好于mm組(p0.05)。3.elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,cf組和cm組大鼠血清中acth、cort、crh的含量明顯高于sf組和sm組(p0.05),mf組和mm組明顯高于cf組和cm組(p0.05);cf組高于cm組(p0.05),mf組高于mm組(p0.05)。4.he染色結(jié)果顯示,sf組和sm組右側(cè)大腦海馬區(qū)細(xì)胞層數(shù)多,排列整齊,細(xì)胞輪廓正常,核仁清晰;cf組和cm組右側(cè)大腦海馬區(qū)細(xì)胞層數(shù)減少,排列較為疏松,細(xì)胞輪廓及形態(tài)較為正常;mf組和mm組右側(cè)海馬區(qū)細(xì)胞排列疏松、紊亂,核仁偏移及碎裂。5.神經(jīng)元尼氏染色計(jì)數(shù)顯示,mf組和mm組右側(cè)大腦海馬區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)目明顯少于cf組和cm組(p0.05),cf組和cm組少于sf組和sm組(p0.05);mf組與mm組比較,差異不明顯(p㧐0.05)。6.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,cf組和cm組nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯多于sf組和sm組(p0.05),mf組和mm組明顯少于cf組和cm組(p0.05),mf組多于mm組(p0.05);cf組和cm組aqp-4陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目多于sf組和sm組(p0.05),mf組和mm組明顯多于cf組和cm組(p0.05),mf組與mm組比較,差異顯著(p0.05)。7.rt-pcr檢測(cè)結(jié)果顯示,mf組和mm組nestinmrna的表達(dá)量低于cf組和cm組(p0.05),cf組和cm組高于sf組和sm組(p0.05),mf組高于mm組(p0.05);mf組和mm組aqp-4mrna的表達(dá)量明顯高于cf組和cm組(p0.05),cf組和cm組高于sf組和sm組(p0.05),mf組與mm組比較,差異顯著(p0.05)。8.Western-blot結(jié)果顯示,MF組和MM組nestin蛋白的表達(dá)量明顯低于CF組和CM組(P0.05);MF組與MM組比較,差異顯著(P0.05)。結(jié)論1.MF和MM組大鼠在水迷宮和高架十字迷宮測(cè)試中成績(jī)明顯差于CF和CM組,而CF和CM組成績(jī)又差于SF和SM組,說(shuō)明MD加重了HIBD大鼠的焦慮情緒及遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力的受損;高架十字迷宮測(cè)試中,雄性大鼠成績(jī)明顯差于雌性,表明雄性大鼠的焦慮癥狀較雌性大鼠更嚴(yán)重,推測(cè)早期應(yīng)激事件例如MD,對(duì)雄性大鼠的影響更大。2.與CF和CM組相比,MF和MM組大鼠血清中CRH、ACTH、CORT水平升高,說(shuō)明作為應(yīng)激事件,MD導(dǎo)致了大鼠HPA軸功能的改變;其中雌性大鼠血清中激素水平普遍高于雄性,表明作為應(yīng)激事件,例如MD甚至僅分離右側(cè)頸總動(dòng)脈,對(duì)雌性大鼠HPA軸的功能影響更大,或雌性大鼠HPA軸的功能變化對(duì)應(yīng)激事件的反應(yīng)更敏感;結(jié)合高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)可能雌性大鼠通過(guò)HPA軸功能改變調(diào)節(jié)焦慮情緒的能力強(qiáng)于雄性大鼠。3.與CF和CM組相比,MF和MM組大鼠海馬區(qū)病理?yè)p害嚴(yán)重,神經(jīng)元存活數(shù)目減少,與神經(jīng)再生相關(guān)的蛋白nestin表達(dá)降低,AQP-4表達(dá)增多,表明MD后海馬神經(jīng)細(xì)胞的再生受抑制,不利于腦損傷修復(fù),神經(jīng)再生受抑制可能是MD加重HIBD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力受損的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：缺氧缺血 母愛(ài)剝奪 巢蛋白 水通道蛋白 HPA軸
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-16
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-22
• 1.1 主要設(shè)備和儀器16-17
• 1.2 主要的藥品和試劑17-19
• 1.3 主要試劑配制19-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組22
• 2.2 模型制備22
• 2.3 MD干預(yù)22-23
• 2.4 行為學(xué)測(cè)試23-24
• 2.5 病理形態(tài)學(xué)觀察24-27
• 2.6 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中CRH、ACTH、CORT水平27-28
• 2.7 RT-PCR檢測(cè)nestin mRNA、AQP-4 mRNA28-30
• 2.8 Western-blot檢測(cè)nestin蛋白水平30-32
• 2.9 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理及分析32-33
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-52
• 3.1 MD對(duì)HIBD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響33-35
• 3.2 MD對(duì)HIBD大鼠情緒記憶的影響35-36
• 3.3 MD對(duì)HIBD大鼠HPA軸激素水平的影響36-38
• 3.4 MD對(duì)HIBD大鼠病理形態(tài)學(xué)及神經(jīng)元數(shù)目的影響38-44
• 3.5 MD對(duì)HIBD大鼠右側(cè)海馬nestin和AQP-4 表達(dá)的影響44-49
• 3.6 MD對(duì)HIBD大鼠右側(cè)海馬nestin和AQP-4 mRNA表達(dá)的影響49-51
• 3.7 MD對(duì)HIBD大鼠右側(cè)海馬nestin蛋白表達(dá)的影響51-52
• 4 討論52-58
• 4.1 HIBD大鼠動(dòng)物模型及MD模型的建立52-53
• 4.2 MD對(duì)HIBD大鼠行為學(xué)的影響53-54
• 4.3 MD對(duì)HIBD大鼠HPA軸功能及激素水平的影響54-55
• 4.4 MD對(duì)HIBD大鼠神經(jīng)元數(shù)目及神經(jīng)再生的影響55-58
• 5 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 文獻(xiàn)綜述 164-73
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 文獻(xiàn)綜述 273-81
• 參考文獻(xiàn)78-81
• 附錄81-82
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果82-83
• 致謝83-84

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本文編號(hào)：386815