本文關(guān)鍵詞：Hsp22對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型神經(jīng)保護(hù)作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD),又稱震顫麻痹(paralysis agitans),是第二常見的神經(jīng)退行性疾病。PD最常見的臨床表現(xiàn)包括肌張力增高、運(yùn)動遲緩、靜止性震顫以及姿勢步態(tài)異常等[1]。PD的神經(jīng)病理學(xué)特征是黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺能細(xì)胞的變性和進(jìn)行性脫失,存活下來的神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)特征性的蛋白質(zhì)包涵體,即路易小體(Lewy小體)。PD在60歲以后高發(fā),但是近年來呈現(xiàn)出低齡化的趨勢。對患者而言,PD最大的危害是導(dǎo)致自身的生活質(zhì)量進(jìn)行性下降,晚期甚至生活不能自理,同時常常出現(xiàn)各種并發(fā)癥。但PD確切的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。研究表明,線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激、蛋白質(zhì)異常修飾及錯誤折疊等機(jī)制導(dǎo)致的多巴胺能神經(jīng)元功能紊亂是PD的重要發(fā)病機(jī)制。早期的研究發(fā)現(xiàn),PD病人血小板的線粒體功能障礙。在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中,進(jìn)一步證實(shí)在PD患者的數(shù)種組織細(xì)胞中的線粒體復(fù)合體出現(xiàn)了功能障礙。自從黑質(zhì)毒素MPP+能抑制復(fù)合體I(C1)的活性這一現(xiàn)象被發(fā)現(xiàn)了之后,線粒體就成為了研究PD發(fā)病機(jī)制的熱點(diǎn)方向。PINK1、Parkin等基因的突變與常染色體隱性家族性的PD有關(guān),這些相關(guān)基因所編碼的蛋白質(zhì)對于維持線粒體的形態(tài)和功能起著非常重要的作用[2]。在已知的家族性和散發(fā)性PD的致病基因當(dāng)中,PINK1是唯一一個定位在線粒體的基因產(chǎn)物[3]。pink1b9是pink1基因截短后的突變基因。pink1b9突變的果蠅模型重現(xiàn)了pd的幾個重要特點(diǎn)。特別是,pink1b9提供了關(guān)于早發(fā)性帕金森病致病分子基礎(chǔ)和線粒體功能障礙的重要信息[4],已經(jīng)被用于研究神經(jīng)退行性變及其分子機(jī)制[5]。熱休克蛋白22(hsp22/hspb8)是小熱休克蛋白(hspb)家族中最重要的成員之一。hsp22定位于線粒體,具有分子伴侶、抗氧化作用、凋亡、抗凋亡、延長壽命等廣泛的生物學(xué)作用[6]。近年來,在相關(guān)文獻(xiàn)研究中,我們發(fā)現(xiàn)hsp22在阿爾茨海默病(alzheimerdisease,ad),亨廷頓病(huntingtondisease,hd)及遠(yuǎn)端脊髓肌肉萎縮癥(distalspinalmuscularatrophy,dsma)等神經(jīng)退行性疾病中起神經(jīng)保護(hù)作用[7、8]。因此,本實(shí)驗(yàn)選用pink1b9突變的pd轉(zhuǎn)基因果蠅模型來研究過表達(dá)的hsp22是否對pd起神經(jīng)保護(hù)作用,并研究其發(fā)揮作用的機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)根據(jù)經(jīng)典的gal4-uas系統(tǒng),選取mhc-gal4作為啟動子。與w1118雜交得到表達(dá)mhc-gal4的正常果蠅,作為正常對照。再將mhc-gal4與pink1b9雜交,使pink1功能缺失的基因(pink1b9)在果蠅的肌肉組織中選擇性表達(dá),構(gòu)建出mhc-gal4/uas系統(tǒng)pink1突變pd轉(zhuǎn)基因果蠅的模型。然后,pink1突變pd轉(zhuǎn)基因果蠅分別與hsp22過表達(dá)及hsp22rnai基因雜交,干預(yù)mhc-gal4/uas系統(tǒng)pink1突變pd轉(zhuǎn)基因果蠅模型。果蠅模型構(gòu)建成功后,對包括mhc-gal4與w1118雜交的正常果蠅在內(nèi)的四組果蠅中的雄果蠅,分別進(jìn)行第5天、第15天的行為學(xué)的翅膀形態(tài)異常率統(tǒng)計(jì)、飛行能力檢測,并通過電鏡觀察四組雄果蠅第5天的間接飛行肌肉組織線粒體形態(tài)。結(jié)果:成功構(gòu)建四組果蠅模型。與正常果蠅模型相比,發(fā)現(xiàn)MHC-GAL4系統(tǒng)PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型翅膀異常率明顯升高、飛行能力顯著降低,而過表達(dá)的Hsp22基因干預(yù)疾病果蠅模型后,可非常明顯的改善疾病果蠅模型的翅膀異常率和飛行能力,很大程度改善了飛行肌肉中線粒體形態(tài)的完整性等。同時,Hsp22RNAi基因干預(yù)疾病果蠅模型后與疾病果蠅模型的飛行能力和翅膀形態(tài)異常率基本一致,飛行肌肉線粒體形態(tài)的完整性亦無明顯改善。結(jié)論:(1)Hsp22過表達(dá)對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型具有神經(jīng)保護(hù)作用。(2)Hsp22過表達(dá)可能通過保護(hù)線粒體形態(tài)來發(fā)揮對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型的神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 Hsp22 轉(zhuǎn)基因果蠅 神經(jīng)保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 前言13-16
• 1 材料與方法16-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16
• 1.1.1 果蠅品系16
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑16
• 1.2.1 試劑及耗材16
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器16-18
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法18-24
• 1.4.1 果蠅的培養(yǎng)18
• 1.4.2 收集處女蠅18-19
• 1.4.3 構(gòu)建MHC -GAL4系統(tǒng)正常轉(zhuǎn)基因果蠅模型19
• 1.4.4 構(gòu)建MHC-GAL4系統(tǒng)PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅疾病模型19-22
• 1.4.4.1 構(gòu)建基因型為Pink1B9/ FM6雌性果蠅19
• 1.4.4.2 構(gòu)建基因型為FM6/Y；TM2/+的雄性果蠅19-20
• 1.4.4.3 構(gòu)建基因型為Pink1B9/ FM6；TM2/+的雌性果蠅20
• 1.4.4.4 構(gòu)建基因型為FM6/Y;MHC-GAL4/+的雄性果蠅20
• 1.4.4.5 構(gòu)建基因型為Pink1B9/FM6; MHC-GAL4/TM2的雌性果蠅20
• 1.4.4.6 構(gòu)建基因型為Pink1B9/y; Hsp22/+;MHC-GAL4/+的雄性果蠅20-21
• 1.4.4.7 構(gòu)建基因型為Pink1B9/y; MHC-GAL4/Hsp22RNAi的 雄性果蠅21-22
• 1.4.5 觀察果蠅的翅膀形態(tài)異常及統(tǒng)計(jì)果蠅翅膀的形態(tài)異常率22-23
• 1.4.6 檢測果蠅飛行/跳躍能力23-24
• 1.4.7 電鏡下果蠅間接飛行肌肉中線粒體的形態(tài)觀測24
• 2 結(jié)果24-31
• 2.1 果蠅模型的建立24-25
• 2.1.1 構(gòu)建MHC-GAL4系統(tǒng)正常對照組轉(zhuǎn)基因果蠅模型24-25
• 2.1.2 構(gòu)建MHC-GAL4系統(tǒng)PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅疾病模型25
• 2.2 Hsp22過表達(dá)對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型翅膀形態(tài)的影響25-27
• 2.3 Hsp22過表達(dá)對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型飛行/跳躍能力的影響27-29
• 2.4 Hsp22過表達(dá)對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型線粒體形態(tài)的影響29-31
• 3 討論31-33
• 3.1 建立四組轉(zhuǎn)基果蠅模型31
• 3.2 線粒體形態(tài)異常在PD發(fā)病機(jī)制中的作用31-32
• 3.3 Hsp22過表達(dá)通過保護(hù)線粒體形態(tài)來發(fā)揮對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型的神經(jīng)保護(hù)作用32-33
• 4 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述38-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄51-52
• 致謝52-53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉中霖;王麗敏;陶恩祥;;帕金森病患者運(yùn)動障礙的臨床異質(zhì)性[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年03期

  本文關(guān)鍵詞：Hsp22對PINK1突變PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型神經(jīng)保護(hù)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：386413