本文關鍵詞：Hsp22對PINK1突變PD轉基因果蠅模型神經保護作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD),又稱震顫麻痹(paralysis agitans),是第二常見的神經退行性疾病。PD最常見的臨床表現包括肌張力增高、運動遲緩、靜止性震顫以及姿勢步態(tài)異常等[1]。PD的神經病理學特征是黑質致密區(qū)多巴胺能細胞的變性和進行性脫失,存活下來的神經元內出現特征性的蛋白質包涵體,即路易小體(Lewy小體)。PD在60歲以后高發(fā),但是近年來呈現出低齡化的趨勢。對患者而言,PD最大的危害是導致自身的生活質量進行性下降,晚期甚至生活不能自理,同時常常出現各種并發(fā)癥。但PD確切的發(fā)病機制目前尚不明確。研究表明,線粒體功能障礙、氧化應激、蛋白質異常修飾及錯誤折疊等機制導致的多巴胺能神經元功能紊亂是PD的重要發(fā)病機制。早期的研究發(fā)現,PD病人血小板的線粒體功能障礙。在現代分子生物學研究中,進一步證實在PD患者的數種組織細胞中的線粒體復合體出現了功能障礙。自從黑質毒素MPP+能抑制復合體I(C1)的活性這一現象被發(fā)現了之后,線粒體就成為了研究PD發(fā)病機制的熱點方向。PINK1、Parkin等基因的突變與常染色體隱性家族性的PD有關,這些相關基因所編碼的蛋白質對于維持線粒體的形態(tài)和功能起著非常重要的作用[2]。在已知的家族性和散發(fā)性PD的致病基因當中,PINK1是唯一一個定位在線粒體的基因產物[3]。pink1b9是pink1基因截短后的突變基因。pink1b9突變的果蠅模型重現了pd的幾個重要特點。特別是,pink1b9提供了關于早發(fā)性帕金森病致病分子基礎和線粒體功能障礙的重要信息[4],已經被用于研究神經退行性變及其分子機制[5]。熱休克蛋白22(hsp22/hspb8)是小熱休克蛋白(hspb)家族中最重要的成員之一。hsp22定位于線粒體,具有分子伴侶、抗氧化作用、凋亡、抗凋亡、延長壽命等廣泛的生物學作用[6]。近年來,在相關文獻研究中,我們發(fā)現hsp22在阿爾茨海默病(alzheimerdisease,ad),亨廷頓病(huntingtondisease,hd)及遠端脊髓肌肉萎縮癥(distalspinalmuscularatrophy,dsma)等神經退行性疾病中起神經保護作用[7、8]。因此,本實驗選用pink1b9突變的pd轉基因果蠅模型來研究過表達的hsp22是否對pd起神經保護作用,并研究其發(fā)揮作用的機制。方法:本實驗根據經典的gal4-uas系統(tǒng),選取mhc-gal4作為啟動子。與w1118雜交得到表達mhc-gal4的正常果蠅,作為正常對照。再將mhc-gal4與pink1b9雜交,使pink1功能缺失的基因(pink1b9)在果蠅的肌肉組織中選擇性表達,構建出mhc-gal4/uas系統(tǒng)pink1突變pd轉基因果蠅的模型。然后,pink1突變pd轉基因果蠅分別與hsp22過表達及hsp22rnai基因雜交,干預mhc-gal4/uas系統(tǒng)pink1突變pd轉基因果蠅模型。果蠅模型構建成功后,對包括mhc-gal4與w1118雜交的正常果蠅在內的四組果蠅中的雄果蠅,分別進行第5天、第15天的行為學的翅膀形態(tài)異常率統(tǒng)計、飛行能力檢測,并通過電鏡觀察四組雄果蠅第5天的間接飛行肌肉組織線粒體形態(tài)。結果:成功構建四組果蠅模型。與正常果蠅模型相比,發(fā)現MHC-GAL4系統(tǒng)PINK1突變PD轉基因果蠅模型翅膀異常率明顯升高、飛行能力顯著降低,而過表達的Hsp22基因干預疾病果蠅模型后,可非常明顯的改善疾病果蠅模型的翅膀異常率和飛行能力,很大程度改善了飛行肌肉中線粒體形態(tài)的完整性等。同時,Hsp22RNAi基因干預疾病果蠅模型后與疾病果蠅模型的飛行能力和翅膀形態(tài)異常率基本一致,飛行肌肉線粒體形態(tài)的完整性亦無明顯改善。結論:(1)Hsp22過表達對PINK1突變PD轉基因果蠅模型具有神經保護作用。(2)Hsp22過表達可能通過保護線粒體形態(tài)來發(fā)揮對PINK1突變PD轉基因果蠅模型的神經保護作用。
【關鍵詞】：帕金森病 Hsp22 轉基因果蠅 神經保護
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 前言13-16
• 1 材料與方法16-24
• 1.1 實驗材料16
• 1.1.1 果蠅品系16
• 1.2 主要實驗試劑16
• 1.2.1 試劑及耗材16
• 1.3 主要實驗儀器16-18
• 1.4 實驗方法18-24
• 1.4.1 果蠅的培養(yǎng)18
• 1.4.2 收集處女蠅18-19
• 1.4.3 構建MHC -GAL4系統(tǒng)正常轉基因果蠅模型19
• 1.4.4 構建MHC-GAL4系統(tǒng)PINK1突變PD轉基因果蠅疾病模型19-22
• 1.4.4.1 構建基因型為Pink1B9/ FM6雌性果蠅19
• 1.4.4.2 構建基因型為FM6/Y；TM2/+的雄性果蠅19-20
• 1.4.4.3 構建基因型為Pink1B9/ FM6；TM2/+的雌性果蠅20
• 1.4.4.4 構建基因型為FM6/Y;MHC-GAL4/+的雄性果蠅20
• 1.4.4.5 構建基因型為Pink1B9/FM6; MHC-GAL4/TM2的雌性果蠅20
• 1.4.4.6 構建基因型為Pink1B9/y; Hsp22/+;MHC-GAL4/+的雄性果蠅20-21
• 1.4.4.7 構建基因型為Pink1B9/y; MHC-GAL4/Hsp22RNAi的 雄性果蠅21-22
• 1.4.5 觀察果蠅的翅膀形態(tài)異常及統(tǒng)計果蠅翅膀的形態(tài)異常率22-23
• 1.4.6 檢測果蠅飛行/跳躍能力23-24
• 1.4.7 電鏡下果蠅間接飛行肌肉中線粒體的形態(tài)觀測24
• 2 結果24-31
• 2.1 果蠅模型的建立24-25
• 2.1.1 構建MHC-GAL4系統(tǒng)正常對照組轉基因果蠅模型24-25
• 2.1.2 構建MHC-GAL4系統(tǒng)PINK1突變PD轉基因果蠅疾病模型25
• 2.2 Hsp22過表達對PINK1突變PD轉基因果蠅模型翅膀形態(tài)的影響25-27
• 2.3 Hsp22過表達對PINK1突變PD轉基因果蠅模型飛行/跳躍能力的影響27-29
• 2.4 Hsp22過表達對PINK1突變PD轉基因果蠅模型線粒體形態(tài)的影響29-31
• 3 討論31-33
• 3.1 建立四組轉基果蠅模型31
• 3.2 線粒體形態(tài)異常在PD發(fā)病機制中的作用31-32
• 3.3 Hsp22過表達通過保護線粒體形態(tài)來發(fā)揮對PINK1突變PD轉基因果蠅模型的神經保護作用32-33
• 4 結論33-34
• 參考文獻34-38
• 綜述38-51
• 參考文獻48-51
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄51-52
• 致謝52-53

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 劉中霖;王麗敏;陶恩祥;;帕金森病患者運動障礙的臨床異質性[J];南方醫(yī)科大學學報;2008年03期

  本文關鍵詞：Hsp22對PINK1突變PD轉基因果蠅模型神經保護作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：386413