本文關鍵詞：鹽酸小檗堿對慢性腦缺血大鼠認知功能的改善作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的腦卒中是目前嚴重危害人類健康與生命安全的常見病、難治病,根據(jù)不完全統(tǒng)計我國發(fā)生腦卒中的患者多達200余萬/年,幸存700萬余人,其中約450萬患者已生活不能完全自理,患病率、病殘率遠高于其他發(fā)達與發(fā)展中國家,足以證明腦卒中是影響壽命的第三大殺手。臨床上腦卒中主要包括缺血性與出血性腦卒中兩大類,其中缺血性腦卒中較為多見。腦組織缺血可引起能量代謝障礙產(chǎn)生神經(jīng)細胞變性、壞死、凋亡等連鎖反應,甚至喪失其功能,從而導致一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥候。腦卒中及相關腦血管病(腦低灌注致記憶、認知和行為改變)可致嚴重認知功能障礙綜合征。近些年的研究可知,造成缺血性腦損傷重要的始動因素—能量代謝障礙,其機制包括能量供應不足后引起的代謝性酸中毒、氧化應激性損傷、電解質紊亂、突觸后細胞膜過度去極化、炎癥反應及細胞凋亡等。文獻表明,細胞能量的感受器—單磷酸腺苷活化蛋白激酶—在心臟病、肥胖、糖尿病等能量代謝障礙性疾病中發(fā)揮重要作用;哺乳動物雷帕霉素靶蛋白—證實在能量代謝障礙疾病的研究領域中同樣起關鍵作用。小檗堿(又名黃連素),是一種存在于(小檗科等四個科十個屬)繁多植物中常見的異喹啉生物堿,分子式C20H18NO4。最初提取后廣泛制成清熱解毒與抗菌藥物應用于臨床,近些年深入研究發(fā)現(xiàn)小檗堿可能是一種對治療心腦血管病、高尿酸癥、高脂血癥、糖尿病及許多慢性炎癥性疾病的藥物,備受心腦系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)領域關注,但是目前對小檗堿的研究多集中在急性腦血管病及神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變方面,癡呆方面的研究多數(shù)集中在阿爾茨海默病(AD),對于慢性腦缺血方面的研究相對較少,小檗堿是否可以通過單磷酸腺苷活化蛋白激酶/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/m TOR)信號通路改善慢性腦缺血大鼠的認知功能,還不得而知。本實驗采用Wistar大鼠雙側頸總動脈永久性阻斷法建立2VO大鼠的慢性腦缺血模型,并給予小檗堿腹腔注射(40mg·kg-1)14天,應用Morris水迷宮試驗、免疫組織化學檢測法、TUNEL法、蛋白質免疫印跡法觀察小檗堿通過AMPK/m TOR信號通路對慢性腦缺血大鼠認知功能的保護作用。材料與方法選取約24周齡健康雄性Wistar大鼠180只,體重約250±30g,由河南省實驗動物供應中心提供,隨機分為三組,分別為假手術組、模型組、干預組,每組60只,模型組與干預組應用雙側頸總動脈永久性阻斷法(2VO)造模,假手術組除不結扎血管外余步驟同模型組。三組設置給藥后2、4、8周三個時間點,每個時間點20只。干預組大鼠每天給予小檗堿(40mg·kg-1·d)腹腔注射14天,術后2、4、8周時,分別通過Morris水迷宮檢測各組大鼠的認知功能,免疫組織化學檢測大鼠海馬CA1區(qū)AMPK、m TOR表達變化,TUNEL法檢測大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細胞凋亡,Western blot檢測大鼠海馬組織中AMPK、p-AMPK、m TOR、p-m TOR的表達情況。結果1.行為學觀察:三個時間點相比較,隨著時間延長,假手術組大鼠平均逃避潛伏期無明顯變化(P0.05);三組間同一時間點比較,干預組與模型組的平均逃避潛伏期均較假手術組顯著延長(P0.05);干預組較模型組大鼠平均逃避潛伏期顯著縮短,具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.免疫組織化學檢測結果:AMPK:假手術組三個時間點比較,免疫陽性細胞數(shù)目無明顯差別(P0.05);模型組免疫陽性細胞數(shù)目較假手術組明顯減少(P0.05);2周、4周干預組免疫細胞數(shù)目較模型組明顯減少,8周時增加(P0.05)。mTOR:假手術組大鼠各時間點比較,免疫陽性細胞數(shù)目無統(tǒng)計學差別(P0.05);與假手術組相比,模型組和干預組免疫陽性細胞數(shù)目相對減少;與模型組相比,干預組免疫細胞數(shù)目明顯增多(P0.05);模型組與干預組,隨著時間延長,陽性細胞數(shù)目呈遞增趨勢(P0.05)。3.TUNEL法凋亡檢測結果:鏡下觀察大鼠海馬CA1區(qū),假手術組可見極個別TUNEL標記的陽性細胞;模型組、干預組可見較多散在分布的陽性細胞,出現(xiàn)明顯凋亡。數(shù)據(jù)處理結果:模型組和干預組與假手術組相比陽性細胞數(shù)目顯著增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);干預組較模型組陽性細胞減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);模型組和干預組陽性細胞數(shù)組內(nèi)(8周與4周、4周與2周)比較,隨著時間的推移,凋亡明顯加重(P0.05)。4.Western blot結果:各組大鼠海馬組織內(nèi)AMPK、m TOR的表達活性采用p-AMPK/AMPK、p-m TOR/m TOR來說明。假手術組三個時間點AMPK的活性極弱,基本處于抑制狀態(tài)(P0.05),與假手術組相比,模型組與干預組p-AMPK/AMPK比值顯著升高(P0.05),與模型組相比,干預組p-AMPK/AMPK比值明顯升高(P0.05),隨著缺血狀態(tài)的持續(xù),活性逐漸降低(P0.05);假手術組三個時間點m TOR的活性無明顯變化,與假手術組相比,模型組與干預組p-m TOR/m TOR比值顯著減少(P0.05),與模型組相比,干預組p-m TOR/m TOR比值明顯降低(P0.05),隨著缺血狀態(tài)的持續(xù),活性進一步降低(P0.05)。結論1慢性腦缺血狀態(tài)可影響大鼠海馬區(qū)AMPK、m TOR的表達,一定時間范圍內(nèi),隨著時間的延長,AMPK活性增加、m TOR活性降低,二者呈相互拮抗時向關系。2鹽酸小檗堿可調控慢性腦缺血大鼠海馬區(qū)AMPK、m TOR的表達,一定的時間范圍內(nèi),表現(xiàn)為隨著時間延長AMPK活性進一步增加,m TOR活性進一步降低。3慢性腦缺血持續(xù)狀態(tài)可導致大鼠認知功能下降,應用鹽酸小檗堿可改善慢性腦缺血大鼠的認知功能,其治療機制可能是通過激活AMPK和抑制m TOR的表達。4鹽酸小檗堿與AMPK/m TOR通路可為治療慢性腦缺血所致認知功能障礙提供新的思路與方法。
【關鍵詞】：鹽酸小檗堿 腦缺血 認知 AMPK mTOR
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 符號說明12-13
• 前言13-16
• 材料及方法16-29
• 結果29-32
• 討論32-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-44
• 附圖44-49
• 綜述 小檗堿治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病最新進展49-60
• 參考文獻55-60
• 個人簡歷、研究生期間撰寫的論文60-61
• 致謝61

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：鹽酸小檗堿對慢性腦缺血大鼠認知功能的改善作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：386205