本文關(guān)鍵詞：鹽酸小檗堿對(duì)慢性腦缺血大鼠認(rèn)知功能的改善作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的腦卒中是目前嚴(yán)重危害人類健康與生命安全的常見(jiàn)病、難治病,根據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)我國(guó)發(fā)生腦卒中的患者多達(dá)200余萬(wàn)/年,幸存700萬(wàn)余人,其中約450萬(wàn)患者已生活不能完全自理,患病率、病殘率遠(yuǎn)高于其他發(fā)達(dá)與發(fā)展中國(guó)家,足以證明腦卒中是影響壽命的第三大殺手。臨床上腦卒中主要包括缺血性與出血性腦卒中兩大類,其中缺血性腦卒中較為多見(jiàn)。腦組織缺血可引起能量代謝障礙產(chǎn)生神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、凋亡等連鎖反應(yīng),甚至喪失其功能,從而導(dǎo)致一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥候。腦卒中及相關(guān)腦血管病(腦低灌注致記憶、認(rèn)知和行為改變)可致嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙綜合征。近些年的研究可知,造成缺血性腦損傷重要的始動(dòng)因素—能量代謝障礙,其機(jī)制包括能量供應(yīng)不足后引起的代謝性酸中毒、氧化應(yīng)激性損傷、電解質(zhì)紊亂、突觸后細(xì)胞膜過(guò)度去極化、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等。文獻(xiàn)表明,細(xì)胞能量的感受器—單磷酸腺苷活化蛋白激酶—在心臟病、肥胖、糖尿病等能量代謝障礙性疾病中發(fā)揮重要作用;哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白—證實(shí)在能量代謝障礙疾病的研究領(lǐng)域中同樣起關(guān)鍵作用。小檗堿(又名黃連素),是一種存在于(小檗科等四個(gè)科十個(gè)屬)繁多植物中常見(jiàn)的異喹啉生物堿,分子式C20H18NO4。最初提取后廣泛制成清熱解毒與抗菌藥物應(yīng)用于臨床,近些年深入研究發(fā)現(xiàn)小檗堿可能是一種對(duì)治療心腦血管病、高尿酸癥、高脂血癥、糖尿病及許多慢性炎癥性疾病的藥物,備受心腦系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)領(lǐng)域關(guān)注,但是目前對(duì)小檗堿的研究多集中在急性腦血管病及神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變方面,癡呆方面的研究多數(shù)集中在阿爾茨海默病(AD),對(duì)于慢性腦缺血方面的研究相對(duì)較少,小檗堿是否可以通過(guò)單磷酸腺苷活化蛋白激酶/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/m TOR)信號(hào)通路改善慢性腦缺血大鼠的認(rèn)知功能,還不得而知。本實(shí)驗(yàn)采用Wistar大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性阻斷法建立2VO大鼠的慢性腦缺血模型,并給予小檗堿腹腔注射(40mg·kg-1)14天,應(yīng)用Morris水迷宮試驗(yàn)、免疫組織化學(xué)檢測(cè)法、TUNEL法、蛋白質(zhì)免疫印跡法觀察小檗堿通過(guò)AMPK/m TOR信號(hào)通路對(duì)慢性腦缺血大鼠認(rèn)知功能的保護(hù)作用。材料與方法選取約24周齡健康雄性Wistar大鼠180只,體重約250±30g,由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)中心提供,隨機(jī)分為三組,分別為假手術(shù)組、模型組、干預(yù)組,每組60只,模型組與干預(yù)組應(yīng)用雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性阻斷法(2VO)造模,假手術(shù)組除不結(jié)扎血管外余步驟同模型組。三組設(shè)置給藥后2、4、8周三個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)20只。干預(yù)組大鼠每天給予小檗堿(40mg·kg-1·d)腹腔注射14天,術(shù)后2、4、8周時(shí),分別通過(guò)Morris水迷宮檢測(cè)各組大鼠的認(rèn)知功能,免疫組織化學(xué)檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)AMPK、m TOR表達(dá)變化,TUNEL法檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡,Western blot檢測(cè)大鼠海馬組織中AMPK、p-AMPK、m TOR、p-m TOR的表達(dá)情況。結(jié)果1.行為學(xué)觀察:三個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較,隨著時(shí)間延長(zhǎng),假手術(shù)組大鼠平均逃避潛伏期無(wú)明顯變化(P0.05);三組間同一時(shí)間點(diǎn)比較,干預(yù)組與模型組的平均逃避潛伏期均較假手術(shù)組顯著延長(zhǎng)(P0.05);干預(yù)組較模型組大鼠平均逃避潛伏期顯著縮短,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:AMPK:假手術(shù)組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較,免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目無(wú)明顯差別(P0.05);模型組免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較假手術(shù)組明顯減少(P0.05);2周、4周干預(yù)組免疫細(xì)胞數(shù)目較模型組明顯減少,8周時(shí)增加(P0.05)。mTOR:假手術(shù)組大鼠各時(shí)間點(diǎn)比較,免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P0.05);與假手術(shù)組相比,模型組和干預(yù)組免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目相對(duì)減少;與模型組相比,干預(yù)組免疫細(xì)胞數(shù)目明顯增多(P0.05);模型組與干預(yù)組,隨著時(shí)間延長(zhǎng),陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目呈遞增趨勢(shì)(P0.05)。3.TUNEL法凋亡檢測(cè)結(jié)果:鏡下觀察大鼠海馬CA1區(qū),假手術(shù)組可見(jiàn)極個(gè)別TUNEL標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞;模型組、干預(yù)組可見(jiàn)較多散在分布的陽(yáng)性細(xì)胞,出現(xiàn)明顯凋亡。數(shù)據(jù)處理結(jié)果:模型組和干預(yù)組與假手術(shù)組相比陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目顯著增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);干預(yù)組較模型組陽(yáng)性細(xì)胞減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);模型組和干預(yù)組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)組內(nèi)(8周與4周、4周與2周)比較,隨著時(shí)間的推移,凋亡明顯加重(P0.05)。4.Western blot結(jié)果:各組大鼠海馬組織內(nèi)AMPK、m TOR的表達(dá)活性采用p-AMPK/AMPK、p-m TOR/m TOR來(lái)說(shuō)明。假手術(shù)組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)AMPK的活性極弱,基本處于抑制狀態(tài)(P0.05),與假手術(shù)組相比,模型組與干預(yù)組p-AMPK/AMPK比值顯著升高(P0.05),與模型組相比,干預(yù)組p-AMPK/AMPK比值明顯升高(P0.05),隨著缺血狀態(tài)的持續(xù),活性逐漸降低(P0.05);假手術(shù)組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)m TOR的活性無(wú)明顯變化,與假手術(shù)組相比,模型組與干預(yù)組p-m TOR/m TOR比值顯著減少(P0.05),與模型組相比,干預(yù)組p-m TOR/m TOR比值明顯降低(P0.05),隨著缺血狀態(tài)的持續(xù),活性進(jìn)一步降低(P0.05)。結(jié)論1慢性腦缺血狀態(tài)可影響大鼠海馬區(qū)AMPK、m TOR的表達(dá),一定時(shí)間范圍內(nèi),隨著時(shí)間的延長(zhǎng),AMPK活性增加、m TOR活性降低,二者呈相互拮抗時(shí)向關(guān)系。2鹽酸小檗堿可調(diào)控慢性腦缺血大鼠海馬區(qū)AMPK、m TOR的表達(dá),一定的時(shí)間范圍內(nèi),表現(xiàn)為隨著時(shí)間延長(zhǎng)AMPK活性進(jìn)一步增加,m TOR活性進(jìn)一步降低。3慢性腦缺血持續(xù)狀態(tài)可導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能下降,應(yīng)用鹽酸小檗堿可改善慢性腦缺血大鼠的認(rèn)知功能,其治療機(jī)制可能是通過(guò)激活A(yù)MPK和抑制m TOR的表達(dá)。4鹽酸小檗堿與AMPK/m TOR通路可為治療慢性腦缺血所致認(rèn)知功能障礙提供新的思路與方法。
【關(guān)鍵詞】：鹽酸小檗堿 腦缺血 認(rèn)知 AMPK mTOR
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-13
• 前言13-16
• 材料及方法16-29
• 結(jié)果29-32
• 討論32-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 附圖44-49
• 綜述 小檗堿治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病最新進(jìn)展49-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、研究生期間撰寫(xiě)的論文60-61
• 致謝61

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：鹽酸小檗堿對(duì)慢性腦缺血大鼠認(rèn)知功能的改善作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：386205